Name: Um modelo de camundongo da partição hepática associada e ligadura da veia porta para procedimento de hepatectomia encenada auxiliado por microscopia (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-01-19T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 45 s
Description: Aprenda a técnica ALPPS em camundongos para estudar regeneração hepática pós-cirurgia. Este modelo revela vias moleculares envolvendo Gata3 e Ramp2 em hepatócitos, auxiliando pesquisadores a compreender mecanismos celulares e melhorar resultados clínicos em pacientes com tumores hepáticos.

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<meta charset="utf8"></head><body>Estudando a regeneração hepática de ALLPS em modelos animais para hepatectomia estadiada

<ol><li>Michalopoulos, G. K., Bhushan, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liver+regeneration%3A+Biological+and+pathological+mechanisms+and+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Gastroenterol+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Liver regeneration: Biological and pathological mechanisms and implications.</a> Nat Rev Gastroenterol Hepatol. 18 (1), 40-55 (2021).</li>
<li>Chapelle, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estimation+of+the+future+remnant+liver+function+is+a+better+tool+to+pr+edict+post-hepatectomy+liver+failure+than+platelet-based+liver+scores%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Surg+Oncol%22%5BJournal%5D)">Estimation of the future remnant liver function is a better tool to pr edict post-hepatectomy liver failure than platelet-based liver scores.</a> Eur J Surg Oncol. 43 (12), 2277-2284 (2017).</li>
<li>Isfordink, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Portal+vein+ligation+versus+portal+vein+embolization+for+induction+of+hypertrophy+of+the+future+liver+remnant%3A+A+systematic+review+and+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Surg+Oncol%22%5BJournal%5D)">Portal vein ligation versus portal vein embolization for induction of hypertrophy of the future liver remnant: A systematic review and meta-analysis.</a> Surg Oncol. 26 (3), 257-267 (2017).</li>
<li>Linecker, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Risk+adjustment+in+alpps+is+associated+with+a+dramatic+decrease+in+ear+ly+mortality+and+morbidity%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Surg%22%5BJournal%5D)">Risk adjustment in alpps is associated with a dramatic decrease in ear ly mortality and morbidity.</a> Ann Surg. 266 (5), 779-786 (2017).</li>
<li>Darnis, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subtotal+hepatectomy+in+swine+for+studying+small-for-size+syndrome+and+portal+inflow+modulation%3A+Is+it+reliable%5BTitle%5D)+AND+%22HPB+%28Oxford%29%22%5BJournal%5D)">Subtotal hepatectomy in swine for studying small-for-size syndrome and portal inflow modulation: Is it reliable.</a> HPB (Oxford). 17 (10), 881-888 (2015).</li>
<li>Casellas, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inbred+mouse+strains+and+genetic+stability%3A+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22Animal%22%5BJournal%5D)">Inbred mouse strains and genetic stability: A review.</a> Animal. 5 (1), 1-7 (2011).</li>
<li>Zhang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolution+of+associating+liver+partition+and+portal+vein+ligation+for+staged+hepatectomy+from+2012+to+2021%3A+A+bibliometric+analysis.+Review%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Surg%22%5BJournal%5D)">Evolution of associating liver partition and portal vein ligation for staged hepatectomy from 2012 to 2021: A bibliometric analysis. Review.</a> Int J Surg. 103, 106648(2022).</li>
<li>Parola, M., Pinzani, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liver+fibrosis%3A+Pathophysiology%2C+pathogenetic+targets+and+clinical+iss+ues%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Aspects+Med%22%5BJournal%5D)">Liver fibrosis: Pathophysiology, pathogenetic targets and clinical iss ues.</a> Mol Aspects Med. 65, 37-55 (2019).</li>
<li>Kikuchi, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+associating+liver+partition+and+portal+vein+occlusion+for+st+aged+hepatectomy+on+tumor+growth+in+a+mouse+model+of+liver+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Surg+Oncol%22%5BJournal%5D)">Impact of associating liver partition and portal vein occlusion for st aged hepatectomy on tumor growth in a mouse model of liver metastasis.</a> Eur J Surg Oncol. 44 (1), 130-138 (2018).</li>
<li>Schlegel, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alpps%3A+From+human+to+mice+highlighting+accelerated+and+novel+mechanism+s+of+liver+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Surg%22%5BJournal%5D)">Alpps: From human to mice highlighting accelerated and novel mechanism s of liver regeneration.</a> Ann Surg. 260 (5), 839-846 (2014).</li>
<li>Dili, A., Lebrun, V., Bertrand, C., Leclercq, I. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Associating+liver+partition+and+portal+vein+ligation+for+staged+hepate+ctomy%3A+Establishment+of+an+animal+model+with+insufficient+liver+remnan+t%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Invest%22%5BJournal%5D)">Associating liver partition and portal vein ligation for staged hepate ctomy: Establishment of an animal model with insufficient liver remnan t.</a> Lab Invest. 99 (5), 698-707 (2019).</li>
<li>Schadde, E., Hertl, M., Breitenstein, S., Beck-Schimmer, B., Schläpfer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rat+model+of+the+associating+liver+partition+and+portal+vein+ligation+for+staged+hepatectomy+%28alpps%29+procedure%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Rat model of the associating liver partition and portal vein ligation for staged hepatectomy (alpps) procedure.</a> J Vis Exp. (126), e55895(2017).</li>
<li>Allaire, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+frontiers+in+liver+resection+for+hepatocellular+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22JHEP+Rep%22%5BJournal%5D)">New frontiers in liver resection for hepatocellular carcinoma.</a> JHEP Rep. 2 (4), 100134(2020).</li>
<li>Memi, F., Ntokou, A., Papangeli, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Crispr%2Fcas9+gene-editing%3A+Research+technologies%2C+clinical+applications+and+ethical+considerations%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Perinatol%22%5BJournal%5D)">Crispr/cas9 gene-editing: Research technologies, clinical applications and ethical considerations.</a> Semin Perinatol. 42 (8), 487-500 (2018).</li>
<li>Saviano, A., Henderson, N. C., Baumert, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+genomics+and+spatial+transcriptomics%3A+Discovery+of+novel+cell+states+and+cellular+interactions+in+liver+physiology+and+disease+biology%5BTitle%5D)+AND+%22J+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Single-cell genomics and spatial transcriptomics: Discovery of novel cell states and cellular interactions in liver physiology and disease biology.</a> J Hepatol. 73 (5), 1219-1230 (2020).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Injeção de glicose a 5% (500 mL)</td><td>Shapuaisi pharma (http://www.zjspas.com/)</td><td>H20003666</td><td>Eficiente, barato, máquina de anestesia de fácil acesso</td></tr><tr><td></td><td>RWD (www.rwdls.com)</td><td>R500</td><td>preço baixo e qualidade valiosa. É adequado para operações com iniciantes</td></tr><tr><td>C57 BL/6</td><td>The Jackson Lab</td><td>22349-2023</td><td>Estabilidade de cepas</td></tr><tr><td>isoflurano</td><td>KCSW (kcsw.szqisoubao.com)</td><td>H19980141</td><td>meloxicam durável e econômico</td></tr><tr><td></td><td>Boehringer-Ingelheim</td><td>H20020217</td> Microfórceps <td>duráveis e eficientes</td></tr><tr><td></td><td>podem ser</td><td>60018920</td><td>Durável e eficiente</td></tr><tr><td>microinstrumento</td><td>CH fábrica de instrumentos microcirúrgicos</td><td>HC-A804-1</td><td>campainha de</td></tr><tr><td>lactato de sódio</td> durável <td>e econômico Shapuaisi pharma (http://www.zjspas.com/)</td><td>H20193277</td><td>Linha de sutura eficiente, barata e de fácil acesso</td></tr><tr><td></td><td>Fábrica de instrumentos microcirúrgicos</td><td>CH 6-0 / 8-0</td><td>alta relação preço-desempenho</td></tr> anticorpos <tr><td>tópicos</td><td>chenxin farmacologia ( www.cisen-pharma.com)</td><td>H20020217</td><td>Evite efetivamente a infecção da incisão</td></tr></tbody></table>

um modelo de camundongo da partição hepática associada e ligadura da veia porta para procedimento de hepatectomia encenada auxiliado por microscopia

A Mouse Model of the Associating Liver Partition and Portal Vein Ligation for Staged Hepatectomy Procedure Aided by Microscopy

Em contraste com o PVL (etapas 2,3,4 e 5 do protocolo), os camundongos que foram submetidos à intervenção cirúrgica ALPPS (etapas 2,3,4,5 e 6) demonstraram uma maior propensão à proliferação celular. A Figura 2 delineia a demarcação isquêmica do lobo médio do fígado após a ligadura da veia porta, juntamente com o campo visual durante a transecção hepática, o que representa uma distinção fundamental entre ALPPS e PVL. Notavelmente, os níveis de mediadores inflamatórios, incluindo (Fator de Necrose Tumoral-α (TNF-α), interleucinas e fator de crescimento hepático (HGF), dentro do tecido hepático, superam os observados no grupo PVL. Isso é visto na Figura 4C , onde o grupo ALPPS apresentou níveis mais altos de IL-6 do que o grupo PVL, sugerindo que a inflamação pode estar envolvida na rápida regeneração hepática. Para fundamentar ainda mais esses achados, foi feita uma análise comparativa da relação fígado-peso corporal e dos níveis de expressão de ki67, um marcador amplamente reconhecido de proliferação celular, dentro do tecido hepático, dois dias após a cirurgia. As Figuras 4A, B e 5 mostram que o fígado no grupo ALPPS demonstra maior capacidade proliferativa.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66098/66098fig01.jpg"> Figura 1: Instrumentos cirúrgicos e consumíveis. (A) 1: Antibióticos tópicos para incisões; 2: 6-0, 8-0 Suturas cirúrgicas; 3: esponjas de gelatina hemostática. (B) 1: Tesoura e 2: porta-agulhas são empregados para a incisão e sutura da cavidade abdominal. (C) Procedimentos microscópicos requerem o uso de 1: tesoura, 2: fórceps, 3, 4: pinça de dissecação, 5: afastadores abdominais. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66098/66098fig01large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66098/66098fig02.jpg"> Figura 2: O procedimento cirúrgico hepático. (A) Ligadura e transecção da veia porta. A ligadura seqüencial de 1, 2 e 3 é meticulosamente executada, concomitantemente com a divisão meticulosa do parênquima hepático dentro do lobo médio. (B) A linha de demarcação do lobo médio é visualmente representada pela presença de uma linha tracejada branca. (C) Após o exame microscópico, o fígado é meticulosamente dissecado ao longo do limite isquêmico delineado. Abreviaturas: RLL = lobo lateral direito; LML = lobo médio esquerdo; LLL = lobo lateral esquerdo; RML = lobo mediano direito. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66098/66098fig02large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66098/66098fig03.jpg"> Figura 3: Ligadura da veia porta. (A) Ligadura da veia porta do lobo lateral direito; a área tracejada corresponde ao RLL ligado. (B) A ligadura da veia porta do lobo médio esquerdo e do lobo lateral esquerdo; A área da linha tracejada representa a entrada para a ligadura dos ramos da veia porta. (C) A área tracejada corresponde ao LML ligado e LLL. (D) A ligadura da veia porta do lobo caudado; A região tracejada delimita o lobo médio direito fisiologicamente perfundido, enquanto as setas demarcam o ramo da veia porta do lobo caudado, discretamente abrigado no parênquima hepático. Abreviaturas: RLL = lobo lateral direito; LML = lobo médio esquerdo; MIE = lobo lateral esquerdo. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66098/66098fig03large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66098/66098fig04v2.jpg"> Figura 4: Comparação de futuros remanescentes hepáticos, taxa de crescimento cinético, taxa de sobrevivência e ALT plasmática durante a primeira semana entre ALPPS e PVL. (A) O FLR foi avaliado no grupo PVL e no grupo PVL+T após a cirurgia. (B) A RG foi avaliada como o ganho da relação LMR/peso corporal por dia. A RG no grupo ALPPS aumentou rapidamente dentro de 2 dias após a cirurgia, depois diminuiu gradualmente, mas ainda foi maior do que no grupo PVL. (C) IL-6 plasmática entre PVL e ALPPS. (D) Curva de sobrevida após PVL e ALPPS. (E) AST plasmática entre PVL e ALPPS. Abreviaturas: FLR = futuros remanescentes hepáticos; PVL = ligadura da veia porta; PVL + T = ligadura da veia porta + transecção; KGR = razão de crescimento cinético; LMR = esquerda ; ALPPS = associação de partição hepática e ligadura da veia porta para hepatectomia estadiada; ALT = Alanina aminotransferase. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66098/66098fig04largev2.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66098/66098fig05.jpg"> Figura 5: Marcadores e morfologia da regeneração hepática após ligadura da veia porta ou transecção combinada. (A) A morfologia hepática foi avaliada no grupo de cirurgia simulada, grupo PVL e grupo PVL+T 2 dias após a cirurgia. A área delineada significa os lobos hepáticos regenerados; barra de escala = 1 cm. (B) A coloração de fluorescência revelou níveis heterogêneos de proliferação celular em coortes cirúrgicas distintas do fígado; barra de escala = 100 μm, ***P &lt; 0,001. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66098/66098fig05large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66098/66098fig06.jpg"> Figura 6: Imagens de HE da veia porta para a veia central após ALPPS. (A) O fígado de ALPPS HE corando de 0 a 2 dias. (B) Coloração HE de 3 a 7 dias. Barra de escala = 100 μm. Abreviaturas: HE = hematoxilina e eosina; ALPPS = associação de partição hepática e ligadura da veia porta para hepatectomia estadiada. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66098/66098fig06large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>

Um modelo de camundongo da partição hepática associada e ligadura da veia porta para procedimento de hepatectomia encenada auxiliado por microscopia

Hepatectomy is widely regarded as the primary treatment for hepatic malignancies; yet, postoperative liver failure remains a major cause of perioperative ...

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Nós estabelecemos um novo modelo murino de um sistema de peso pendurado por isquemia hepática. Esta técnica pode ser útil para futuras investigações de isquemia em modelos murinos hepáticas.

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Indução rápida hipertrofia hepática usando associando partição do fígado e ligadura da veia porta para um hepatectomy encenada (ALPPS) tem sido proposto para ressecção de tumores no fígado ressecável no limite. Este modelo pode elucidar os mecanismos envolvidos na hipertrofia rápida e permite testes de drogas que promovem ou bloqueiam a aceleração da regeneração.

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Aqui, apresentamos um protocolo para criar xenoenxertos de carcinoma hepatocelular ortotópico com e sem ligadura da artéria hepática e realizamos tomografia por emissão de pósitrons (PET) não invasiva de hipóxia tumoral usando [18 F]Fluoromisonidazol ([18 F]FMISO) e [18 F]Fluorodesoxiglicose ([18F]FDG).

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Estabelecemos um modelo murino de fibrose hepática crônica, que fornece um modelo animal adequado para o estudo mecanístico da atresia biliar (AB) induzida por vírus e uma plataforma para futuros tratamentos de AB.

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Neste protocolo, discutimos a implementação de um modelo de transplante ortotópico de fígado (THO) bem-sucedido em camundongos. Além disso, são discutidos também os adjuvantes para analisar melhor a patência do aloenxerto após o sucesso do TOL em camundongos, especificamente utilizando exames de microtomografia computadorizada (microTC).

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O modelo de camundongo de hepatectomia parcial 2/3 (66%) é bem descrito na literatura, mas hepatectomias mais extensas mimetizando a síndrome do pequeno para o tamanho após o transplante de fígado raramente foram usadas. Descrevemos um procedimento de hepatectomia estendida de 78% em um modelo de camundongo que resulta em aproximadamente 50% de letalidade pós-operatória em camundongos saudáveis.

Hepatectomia estendida de 78% em modelo cirúrgico de camundongo

Este protocolo apresenta um pipeline abrangente de imagem para visualizar e modelar a morfologia das células estreladas hepáticas em tecido hepático intacto. Essa abordagem combina marcação fluorescente de fibroblastos usando genética de camundongos, preparação de tecidos baseada em perfusão hepática in situ e um método modificado de limpeza de tecidos iDISCO para alcançar transparência óptica.

Mapeamento da morfologia das células estreladas hepáticas em modelos camundongos de fibrose hepática

Aprenda a técnica ALPPS em camundongos para estudar regeneração hepática pós-cirurgia. Este modelo revela vias moleculares envolvendo Gata3 e Ramp2 em hepatócitos, auxiliando pesquisadores a compreender mecanismos celulares e melhorar resultados clínicos em pacientes com tumores hepáticos.

Um modelo de camundongo da partição hepática associada e ligadura da veia porta para procedimento de hepatectomia encenada auxiliado por microscopia (Vídeo) | JoVE Journal

Um modelo de camundongo da partição hepática associada e ligadura da veia porta para procedimento de hepatectomia encenada auxiliado por microscopia

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