Name: Estabelecimento de um modelo experimental de endometrioma em camundongos para estudar sua infertilidade relacionada (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-04-05T13:40:00.000+00:00
Duration: 8 min 7 s
Description: Aprenda a estabelecer um modelo experimental de endometrioma em camundongos C57BL/6J para estudar mecanismos de infertilidade relacionados. Este método oferece uma ferramenta valiosa para pesquisas em medicina reprodutiva.

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<meta charset="utf8"></head><body>Desenvolvimento de um novo modelo de camundongo que simula endometrioma

<table><tbody><tr><td>Seringa de 1 cc com agulha de 25 G</td><td>BD Biociências</td><td>301320</td><td></td></tr><tr><td>10 mm Placa de cultura de tecidos</td><td>FALCÃO</td><td>353001</td><td></td></tr><tr><td>10% de formalina tamponada</td><td>Fisher Científico</td><td>SF100-4</td><td></td></tr><tr><td>10x tampão salino tamponado fosfato (PBS)</td><td>Fisher Científico</td><td>AM9625</td><td></td></tr><tr><td>Agulha de 30 G</td><td>BD Biociências</td><td>305107</td><td></td></tr><tr><td>5-0 sutura não absorvível de seda trançada preta</td><td>Ethicon Inc.</td><td>W500H</td><td></td></tr><tr><td>70% de etanol</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Lâminas adesivas para microscópio</td><td>Marienfeld</td><td>810401</td><td></td></tr><tr><td>Injeção de buprenorfina&nbsp;</td><td>Med-Vet Internacional</td><td>RXBUPRENOR5</td><td></td></tr><tr><td>Cotonete de duas cabeças</td><td>SANYO Co., LTD.</td><td>HUBY-340</td><td></td></tr><tr><td>Pinça fina</td><td>Ferramentas de Belas Ciências</td><td>11254-20</td><td></td></tr><tr><td>Cetamina</td><td>Alfasan International b.v</td><td>2203095-08</td><td></td></tr><tr><td>Microtubos</td><td>Corning&nbsp;</td><td>MCT-150-C</td><td></td></tr><tr><td>Porta-agulhas</td><td>Corporação Excelta</td><td>2827-NH-35-SE-ND</td><td></td></tr><tr><td>Pomada oftálmica</td><td>Principais produtos farmacêuticos</td><td>10033691</td><td></td></tr><tr><td>Kit de Mancha de Schiff (PAS) com Ácido Periódico (PAS)</td><td>Abcam</td><td>Ab150680</td><td></td></tr><tr><td>Luvas estéreis sem pó</td><td>Fisher Científico</td><td>19020558</td><td></td></tr><tr><td>Processamento/incorporação de</td><td>Fisher Científico</td><td>15-197-700A</td><td></td></tr><tr><td>Bisturi tamanho 3</td><td>Fisher Científico</td><td>22-079-657</td><td></td></tr><tr><td>Pinça semi-curvada serrilhada pequena</td><td>Roboz Instrumentos Cirúrgicos Co.</td><td>RS-5135</td><td></td></tr><tr><td>Tesoura cirúrgica pequena</td><td>Roboz Instrumentos Cirúrgicos Co.</td><td>RS-5850</td><td></td></tr><tr><td>Microscópio óptico padrão</td><td></td><td></td><td>Para avaliação de esfregaços de citologia vaginal e análise histológica.</td></tr><tr><td>Lâminas de bisturi de aço #10</td><td>B.Braun</td><td>BB510</td><td></td></tr><tr><td>Gaze estéril</td><td>MEDICOM</td><td>HMWS 077</td><td></td></tr><tr><td>Placas de Petri de vidro pirex esterilizadas</td><td>Corning</td><td>70160-101</td><td></td></tr><tr><td>Almofada elétrica termorregulada&nbsp;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sutura absorvível VICRYL RAPIDE (poliglactina 910)</td><td>Ethicon Inc.</td><td>W9918</td><td></td></tr><tr><td>Xilazina&nbsp;</td><td>Alfasan International b.v</td><td>2110333-10</td><td></td></tr></tbody></table>

estabelecimento de um modelo experimental de endometrioma em camundongos para estudar sua infertilidade relacionada

Establishment of an Experimental Mouse Model of Endometrioma to Study its Related Infertility

O estabelecimento bem-sucedido do OMA Dos 12 camundongos submetidos ao protocolo de transplante, 10 exibiram lesões características da OMA, tanto em nível anatômico macroscópico quanto histológico, traduzindo-se em uma taxa de sucesso de 83%. O exame macroscópico revelou lesões cheias de líquido aderentes aos ovários, lembrando apresentações clínicas de OMA (Figura 2). O exame histopatológico, conforme ilustrado na Figura 3, confirmou o implante bem-sucedido do tecido endometrial ectópico. Além disso, a infiltração de lesões endometrióticas induziu atresia maciça dos folículos ao lado dos implantes, indicando sua interferência no meio ovariano.
Especificidade do modelo Fundamental para a validade do modelo foi sua especificidade para endometriose ovariana. Após um exame minucioso, nenhum implante endometriótico estranho foi identificado em qualquer outro órgão pélvico ou abdominal, ressaltando a precisão do modelo e seu potencial como uma ferramenta robusta para investigar o endometrioma e sua infertilidade relacionada.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66240/66240fig01.jpg"> 
Figura 1: Geração do modelo de endometrioma. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66240/66240fig01large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66240/66240fig02.jpg"> 
Figura 2: Anatomia macroscópica do endometrioma. Em comparação com o grupo controle simulado, o crescimento cístico endometrial ectópico foi visível em associação com a morfologia ovariana 4 semanas após o transplante no grupo OMA em morfologia. Contorno tracejado azul: lesão endometriótica. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66240/66240fig02large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66240/66240fig03.jpg"> 
Figura 3: Corte histológico corado de uma lesão endometrial do modelo de camundongo. Em comparação com o grupo controle simulado, o crescimento cístico endometrial ectópico foi visível em associação com o ovário 4 semanas após o transplante no grupo OMA em histologia. Setas pretas indicam folículos atrésicos. Barras de escala = 0,5 mm. Abreviatura: OMA = endometrioma. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66240/66240fig03large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>

Estabelecimento de um modelo experimental de endometrioma em camundongos para estudar sua infertilidade relacionada

Endometrioma (OMA), a subtype of endometriosis characterized by the formation of endometriotic cysts in the ovaries, affects 17-44% of individuals ...

O escopo de nossa pesquisa está focado na compreensão dos mecanismos subjacentes à infertilidade associada ao endometrioma. Nosso objetivo é abordar a lacuna no conhecimento desenvolvendo um modelo de camundongo que simula o endometrioma e investigando seu impacto na fertilidade. No campo da pesquisa da endometriose, os desenvolvimentos recentes incluem avanços na compreensão dos mecanismos moleculares subjacentes à endometriose, identificação de novos marcadores para diagnóstico e tratamento e o desenvolvimento de modelos inovadores para estudar subtipos específicos como o endometrioma. Esses desenvolvimentos contribuem para melhorar o conhecimento e as possíveis estratégias terapêuticas para a endometriose. Os desafios experimentais atuais na pesquisa de endometrioma incluem a falta de um modelo animal confiável, compreensão limitada da patogênese e do impacto na fertilidade e a necessidade de estudos de recorrência e testes diagnósticos. O modelo de camundongo endometrioma e a incorporação de descobertas abordam esses desafios e avançam no campo.Nosso protocolo oferece vantagens distintas em comparação com outras técnicas. Ele se concentra especificamente em imitar o endometrioma, enquanto nenhum outro subtipo foi estabelecido por esse método. Com uma alta taxa de sucesso, permite modificações genéticas e replica características reprodutivas semelhantes às humanas, tornando-se uma ferramenta valiosa para estudar a infertilidade relacionada ao endometrioma. Nossas descobertas abriram caminho para uma nova era de pesquisa sobre endometriose. Ao preencher uma lacuna de longa data, nosso modelo promete insights transformadores, revolucionando nossa compreensão, tratamento e potencialmente prevenção do endometrioma. Ao integrar os resultados dos estudos de recorrência e diagnóstico, nossa pesquisa aprimora o contexto mais amplo da pesquisa de endometriose e do atendimento ao paciente.[Narrador] Depois de coletar a cama contendo feromônios masculinos, introduza-os na gaiola do rato fêmea por 48 horas. Despeje 10 mililitros de PBS em uma placa de Petri e mergulhe uma extremidade de um cotonete para absorver o líquido. Retire delicadamente um rato de sua gaiola e coloque-o na tampa. Insira delicadamente o cotonete umedecido na vagina e gire o cotonete suavemente a 45 graus em relação ao eixo longo do corpo do animal. Depois de coletar as células das paredes luminantes vaginais, retire cuidadosamente o cotonete. Role suavemente a ponta do cotonete em uma lâmina de vidro limpa e pré-rotulada para transferir as células coletadas. Examine a lâmina ao microscópio para verificar a presença de células epiteliais cornificadas indicando o estágio de estro. Para começar, desinfete a área abdominal da rata fêmea em estágio de estro eutanasiada com etanol a 70%. Use uma tesoura cirúrgica estéril para fazer uma incisão de um centímetro ao longo da linha média do peritônio, expondo a camada muscular. Em seguida, use uma tesoura diferente para cortar a camada muscular e revelar a cavidade pélvica. Feche as pontas da pinça e levante suavemente os intestinos usando a porção central romba. Depois de localizar o útero, disseque estéreo todo o corno uterino, garantindo a remoção de ambos os cornos uterinos. Coloque os tecidos excisados em uma placa de Petri contendo PBS e remova o excesso de tecido adiposo. Usando um bisturi estéril, disseque minuciosamente os tecidos em pedaços cúbicos de um milímetro. Adicione PBS periodicamente para manter os tecidos úmidos. Coloque o camundongo receptor anestesiado em decúbito dorsal em uma placa cirúrgica estéril. Identifique o local da cirurgia manipulando suavemente as patas traseiras para sentir uma proeminência óssea sob a pele. Desinfete a área cirúrgica com um cotonete de etanol a 70% e, em seguida, com Betadine. No local escolhido, faça uma incisão lateral precisa entre três e cinco milímetros. Estabilize o ovário com pinças de mão não dominantes e injete 100 microlitros de PBS na bursa ovariana, observando uma ligeira separação. Faça uma pequena fenda na bursa e, usando uma micropinça, transplante os fragmentos de tecido uterino cúbico de um milímetro. Após a cirurgia, suturar as camadas musculares com suturas absorvíveis e a pele com suturas não absorvíveis. Após quatro semanas, remova o camundongo receptor transplantado da gaiola de alojamento. Faça uma incisão na linha média no camundongo receptor sacrificado e exponha a cavidade abdominal para inspeção de órgãos. Inspecione minuciosamente a cavidade abdominal em busca de lesões endometrióticas estranhas. Em seguida, extraia os ovários com lesões visíveis para fotografia. Fixe os ovários com lesões em formalina tamponada neutra a 10%. Depois de seccionar e montar as seções de tecido em uma lâmina, coloque a solução de xileno da lâmina para remover a parafina. Reidrate as seções de tecido colocando a lâmina em uma série de concentrações decrescentes de etanol. Trate as seções de tecido com ácido periódico a 1% por cinco a 10 minutos em temperatura ambiente. Em seguida, enxágue bem a lâmina com água destilada para remover qualquer ácido periódico residual. Agora, core as seções de tecido com a solução de mudança por 15 minutos. Enxágue a lâmina em água quente da torneira para remover o excesso de manchas e depois em água destilada. Contra-core as seções de tecido com hematoxilina de Mayer por dois a três minutos. Enxágue a lâmina em água corrente da torneira antes de aplicar o reagente azulado por 30 segundos. Depois de enxaguar a lâmina em água destilada, desidrate as seções em concentrações crescentes de etanol. Mergulhe as seções em xileno para torná-las transparentes. Aplique um meio de montagem nas seções e coloque suavemente uma lamínula evitando bolhas de ar. Após a secagem, examine a lâmina em um microscópio óptico quanto à presença de glândulas endometriais, estroma e cistos hemorrágicos confirmando endometriose no ovário. Em comparação com o grupo controle simulado, o crescimento cístico endometrial ectópico foi visível em associação com a morfologia ovariana quatro semanas após o transplante no grupo endometrial. Um exame histopatológico adicional confirmou a implantação bem-sucedida do tecido endometrial ectópico no grupo endometrial.

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Medicina

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Um<em&gt; Ex vivo</em&gt; Modelo para estudar a ação do hormônio no peito humano

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