Estabelecimento de um modelo experimental de endometrioma em camundongos para estudar sua infertilidade relacionada

O escopo de nossa pesquisa está focado na compreensão dos mecanismos subjacentes à infertilidade associada ao endometrioma. Nosso objetivo é abordar a lacuna no conhecimento desenvolvendo um modelo de camundongo que simula o endometrioma e investigando seu impacto na fertilidade. No campo da pesquisa da endometriose, os desenvolvimentos recentes incluem avanços na compreensão dos mecanismos moleculares subjacentes à endometriose, identificação de novos marcadores para diagnóstico e tratamento e o desenvolvimento de modelos inovadores para estudar subtipos específicos como o endometrioma. Esses desenvolvimentos contribuem para melhorar o conhecimento e as possíveis estratégias terapêuticas para a endometriose. Os desafios experimentais atuais na pesquisa de endometrioma incluem a falta de um modelo animal confiável, compreensão limitada da patogênese e do impacto na fertilidade e a necessidade de estudos de recorrência e testes diagnósticos. O modelo de camundongo endometrioma e a incorporação de descobertas abordam esses desafios e avançam no campo.

Nosso protocolo oferece vantagens distintas em comparação com outras técnicas. Ele se concentra especificamente em imitar o endometrioma, enquanto nenhum outro subtipo foi estabelecido por esse método. Com uma alta taxa de sucesso, permite modificações genéticas e replica características reprodutivas semelhantes às humanas, tornando-se uma ferramenta valiosa para estudar a infertilidade relacionada ao endometrioma. Nossas descobertas abriram caminho para uma nova era de pesquisa sobre endometriose. Ao preencher uma lacuna de longa data, nosso modelo promete insights transformadores, revolucionando nossa compreensão, tratamento e potencialmente prevenção do endometrioma. Ao integrar os resultados dos estudos de recorrência e diagnóstico, nossa pesquisa aprimora o contexto mais amplo da pesquisa de endometriose e do atendimento ao paciente.

[Narrador] Depois de coletar a cama contendo feromônios masculinos, introduza-os na gaiola do rato fêmea por 48 horas. Despeje 10 mililitros de PBS em uma placa de Petri e mergulhe uma extremidade de um cotonete para absorver o líquido. Retire delicadamente um rato de sua gaiola e coloque-o na tampa. Insira delicadamente o cotonete umedecido na vagina e gire o cotonete suavemente a 45 graus em relação ao eixo longo do corpo do animal. Depois de coletar as células das paredes luminantes vaginais, retire cuidadosamente o cotonete. Role suavemente a ponta do cotonete em uma lâmina de vidro limpa e pré-rotulada para transferir as células coletadas. Examine a lâmina ao microscópio para verificar a presença de células epiteliais cornificadas indicando o estágio de estro. Para começar, desinfete a área abdominal da rata fêmea em estágio de estro eutanasiada com etanol a 70%. Use uma tesoura cirúrgica estéril para fazer uma incisão de um centímetro ao longo da linha média do peritônio, expondo a camada muscular. Em seguida, use uma tesoura diferente para cortar a camada muscular e revelar a cavidade pélvica. Feche as pontas da pinça e levante suavemente os intestinos usando a porção central romba. Depois de localizar o útero, disseque estéreo todo o corno uterino, garantindo a remoção de ambos os cornos uterinos. Coloque os tecidos excisados em uma placa de Petri contendo PBS e remova o excesso de tecido adiposo. Usando um bisturi estéril, disseque minuciosamente os tecidos em pedaços cúbicos de um milímetro. Adicione PBS periodicamente para manter os tecidos úmidos. Coloque o camundongo receptor anestesiado em decúbito dorsal em uma placa cirúrgica estéril. Identifique o local da cirurgia manipulando suavemente as patas traseiras para sentir uma proeminência óssea sob a pele. Desinfete a área cirúrgica com um cotonete de etanol a 70% e, em seguida, com Betadine. No local escolhido, faça uma incisão lateral precisa entre três e cinco milímetros. Estabilize o ovário com pinças de mão não dominantes e injete 100 microlitros de PBS na bursa ovariana, observando uma ligeira separação. Faça uma pequena fenda na bursa e, usando uma micropinça, transplante os fragmentos de tecido uterino cúbico de um milímetro. Após a cirurgia, suturar as camadas musculares com suturas absorvíveis e a pele com suturas não absorvíveis. Após quatro semanas, remova o camundongo receptor transplantado da gaiola de alojamento. Faça uma incisão na linha média no camundongo receptor sacrificado e exponha a cavidade abdominal para inspeção de órgãos. Inspecione minuciosamente a cavidade abdominal em busca de lesões endometrióticas estranhas. Em seguida, extraia os ovários com lesões visíveis para fotografia. Fixe os ovários com lesões em formalina tamponada neutra a 10%. Depois de seccionar e montar as seções de tecido em uma lâmina, coloque a solução de xileno da lâmina para remover a parafina. Reidrate as seções de tecido colocando a lâmina em uma série de concentrações decrescentes de etanol. Trate as seções de tecido com ácido periódico a 1% por cinco a 10 minutos em temperatura ambiente. Em seguida, enxágue bem a lâmina com água destilada para remover qualquer ácido periódico residual. Agora, core as seções de tecido com a solução de mudança por 15 minutos. Enxágue a lâmina em água quente da torneira para remover o excesso de manchas e depois em água destilada. Contra-core as seções de tecido com hematoxilina de Mayer por dois a três minutos. Enxágue a lâmina em água corrente da torneira antes de aplicar o reagente azulado por 30 segundos. Depois de enxaguar a lâmina em água destilada, desidrate as seções em concentrações crescentes de etanol. Mergulhe as seções em xileno para torná-las transparentes. Aplique um meio de montagem nas seções e coloque suavemente uma lamínula evitando bolhas de ar. Após a secagem, examine a lâmina em um microscópio óptico quanto à presença de glândulas endometriais, estroma e cistos hemorrágicos confirmando endometriose no ovário. Em comparação com o grupo controle simulado, o crescimento cístico endometrial ectópico foi visível em associação com a morfologia ovariana quatro semanas após o transplante no grupo endometrial. Um exame histopatológico adicional confirmou a implantação bem-sucedida do tecido endometrial ectópico no grupo endometrial.