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Detecção e quantificação em tempo real do DNA do vírus da hepatite B baseado na reação em cadeia ...
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JoVE Journal Biology
Real-Time Polymerase Chain Reaction-Based Detection and Quantification of Hepatitis B Virus DNA

Detecção e quantificação em tempo real do DNA do vírus da hepatite B baseado na reação em cadeia da polimerase

Full Text
4,719 Views
04:11 min
December 15, 2023

DOI: 10.3791/66249-v

Satyabrata Bag1, Santanu Ghosh1, Roopa Lalwani1, Pratishtha Vishnoi1, Sudheer Gupta1, Dhirendra Dubey1

13B BlackBio Biotech India Limited

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Overview

This study presents a real-time PCR-based protocol for the detection and quantification of hepatitis B virus (HBV) DNA, which is essential for accurate diagnosis and monitoring of HBV infections. The method is recognized as the gold standard due to its sensitivity and specificity in identifying HBV viral loads.

Key Study Components

Research Area

  • Hepatitis B virus (HBV) detection
  • Viral load quantification
  • Clinical diagnostics

Background

  • Importance of accurate HBV detection in clinical settings
  • Challenges in identifying low viral loads and occult infections
  • Comparison of PCR with other diagnostic techniques

Methods Used

  • Real-time polymerase chain reaction (PCR)
  • Samples include HBV positive controls
  • Use of WHO international standard for calibration

Main Results

  • Successful quantification of HBV DNA using a standard curve
  • Identification of samples with significant amplification
  • Parameter calibration ensuring high accuracy and reproducibility

Conclusions

  • This study provides a reliable protocol for HBV DNA detection and viral load measurement.
  • The method’s high sensitivity makes it a valuable tool in hepatitis research and clinical diagnostics.

Frequently Asked Questions

What is the significance of detecting HBV DNA?
Detecting HBV DNA is crucial for diagnosing HBV infections and monitoring treatment effectiveness.
How does real-time PCR work?
Real-time PCR amplifies DNA and simultaneously quantifies it using fluorescent dyes during the PCR cycle.
What challenges exist in HBV detection?
Challenges include detecting low viral loads and accommodating various HBV genotypes.
How is the accuracy of PCR results ensured?
Accuracy is ensured by standardizing threshold settings across samples and validating with controls.
What role do quantification standards play?
Quantification standards provide a reference for measuring unknown samples, ensuring reliable results.
Can this protocol detect new mutations?
While the protocol is sensitive, emerging mutations may still pose challenges in accurate detection.
Is this method suitable for clinical use?
Yes, this real-time PCR method is fast, sensitive, and suited for clinical diagnostics.

A detecção e quantificação do DNA do vírus da hepatite B (HBV) baseada na reação em cadeia da polimerase (PCR) em tempo real é um método sensível e preciso para diagnosticar e monitorar a infecção pelo HBV. Aqui, apresentamos um protocolo para detecção do DNA do VHB e a medição da carga viral de uma amostra.

Neste vídeo, mostraremos um protocolo passo a passo para detectar o DNA do HBV e quantificar sua carga viral usando nosso desperdício de PCR em tempo real aprovado pelo IVD, através do kit de carga viral do HBV do PCR. Uso de pesquisa para diagnóstico de HBV, PCR em tempo real, PCR digital, NGS e testes sorológicos. A PCR em tempo real é o padrão ouro para detecção do DNA do VHB e quantificação da carga viral.

A PCR digital quantifica a carga viral absoluta. NGS identifica novas mutações e testes sorológicos detectam antígenos ou anticorpos. Existem vários desafios experimentais para detectar casos de baixa carga viral e infecções ocultas pelo VHB.

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