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DOI: 10.3791/66275-v
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Regiões intrinsecamente desordenadas (IDRs) são domínios proteicos flexíveis que modificam sua conformação em resposta a mudanças ambientais. A transferência de energia por ressonância de fluorescência em conjunto (FRET) pode estimar as dimensões da proteína sob diferentes condições. Apresentamos uma abordagem FRET para avaliar a sensibilidade estrutural da IDR em células vivas de Saccharomyces cerevisiae sob estresse hiperosmótico.
Nosso objetivo é entender como regiões intrinsecamente desordenadas sentem e respondem a mudanças nas propriedades físico-químicas do ambiente. Combinamos técnicas biofísicas, bioquímicas, genéticas e de biologia celular para monitorar como o conjunto estrutural de regiões desordenadas muda nas células vivas. Técnicas de biofísica de proteínas são atualmente utilizadas para estudar a confirmação de IVRs.
Estes incluem ressonância magnética nuclear, dicroísmo circular, espalhamento de raios X a baixos ângulos e FRET. A maioria dessas técnicas só pode ser usada in vitro. Estudar a confirmação de IVRs em um contexto celular é um desafio, com técnicas de alto custo e demoradas.
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