Medindo as alterações dinâmicas do pH glicossomal em Trypanosoma brucei vivo

O metabolismo da glicose é crítico para o Trypanosoma brucei, mas pouco se sabe sobre como as células sentem e respondem às mudanças nos níveis de glicose no ambiente. Desenvolvemos parasitas expressando um biossensor de pH que nos permite monitorar o pH glicossomal em parasitas vivos, o que ajudará na compreensão das respostas dinâmicas dos parasitas à flutuação de nutrientes. Um desafio para este experimento seria a disponibilidade de um citômetro de fluxo equipado com um leitor de placas de microtitulação, bem como os conjuntos de filtros apropriados para medir a fluorescência de biossensores.

Além disso, o T.brucei é um organismo do grupo de risco dois, portanto, o citômetro deve ser alojado dentro de uma instalação de nível de biossegurança dois. Descobriu-se que o nível de pH dos glicossomas pode afetar a glicólise, pois a hexoquinase e a fosfofrutoquinase são sensíveis ao pH. No entanto, as sondas de pH usadas anteriormente não visaram com precisão o glicossomo na forma sanguínea.

Uma ferramenta melhor foi necessária para estudar a relação entre pH glicossomal e glicólise neste estágio de vida do parasita. O sensor pHluorin2-PTS1 é uma ferramenta que é melhor na localização para o glicossoma do que sondas químicas de pH nesta fase da vida. É fácil de usar, pois você só precisa induzir a expressão do sensor de pH durante a noite, e as células farão e localizarão pHluorin2 para o glicossomo.

O uso da citometria de fluxo para medir a pHluorina2 aumenta o rendimento e melhora as medidas estatísticas em comparação com a microscopia.