Name: Modelo de roedores de perda muscular volumétrica masseter para estudo de materiais de bioengenharia (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-05-31T13:00:00.000+00:00
Duration: 3 min 46 s
Description: Aprenda a criar um modelo de perda muscular volumétrica no masseter de ratos para estudar regeneração de músculos craniofaciais. Este método permite avaliar biomateriais como hidrogéis para terapias regenerativas.

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<meta charset="utf8"></head><body>Avaliação de biomateriais em lesões craniofaciais de VML usando um modelo de rato

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<li>Versnel, S. L., Duivenvoorden, H. J., Passchier, J., Mathijssen, I. M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Satisfaction+with+facial+appearance+and+its+determinants+in+adults+with+severe+congenital+facial+disfigurement%3A+A+case-referent+study%5BTitle%5D)+AND+%22J+Plast+Reconstr+Aesthet+Surg%22%5BJournal%5D)">Satisfaction with facial appearance and its determinants in adults with severe congenital facial disfigurement: A case-referent study.</a> J Plast Reconstr Aesthet Surg. 63 (10), 1642-1649 (2010).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>F1.652 Anticorpo monoclonal de cadeia pesada de miosina (embrionário)</td><td>DSHB</td><td>F1.652</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo secundário de adsorção cruzada IgG2b de cabra anti-camundongo, Alexa Fluor 647</td><td>Invitrogen</td><td>A-21242</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo secundário de alta adsorção cruzada IgG de cabra (H + L), Alexa Fluor 488</td><td>Invitrogen</td><td>A-11034</td><td></td></tr><tr><td>Punções de biópsia padrão Integra, punção de biópsia padrão descartável; 5 mm, Diâmetro: 0,19 pol., 0,5 cm</td><td>Integra</td><td>12460411</td><td></td></tr><tr><td>Meio de Montagem com DAPI - Aquoso, Fluoroshield</td><td>Abcam</td><td>ab104139</td><td></td></tr><tr><td>Rabbit Anti-Mouse IgG H& L (Alexa Fluor 647) pré-adsorvido</td><td>Abcam</td><td>ab150127</td><td></td></tr><tr><td>Sulfametoxazol/Trimetoprim Suspensão Oral, Sabor Cereja, 473 mL</td><td>Med-Vet International</td><td>SKU: RXBAC-SUSP</td><td></td></tr></tbody></table>

modelo de roedores de perda muscular volumétrica masseter para estudo de materiais de bioengenharia

Rodent Model of Masseter Volumetric Muscle Loss for Studying Bioengineering Materials

Os resultados para a avaliação do VML craniofacial e regeneração tecidual usando biomateriais incluem resultados quantitativos e qualitativos.
A Figura 2 mostra um exemplo de avaliação qualitativa usando o modelo descrito anteriormente. A observação do crescimento de fibras musculares de novo em nosso hidrogel é um resultado qualitativo positivo (Figura 2A) e sugere que um biomaterial pode fornecer suporte arquitetônico suficiente e fator de crescimento ou entrega de nutrientes. A retenção de hidrogel dentro do leito da ferida (Figura 2B) é visível na coloração HE. A avaliação qualitativa de outros tecidos dentro de um biomaterial pode ser feita, como a identificação de vasos sanguíneos usando HE (Figura 2C) e tricrômico de Masson (Figura 2D). Os ramos mandibular e bucal do nervo facial são visíveis nos cantos superior esquerdo e superior direito da imagem na Figura 2B, confirmando a correta colocação do hidrogel no leito da lesão do VML e fornecendo orientação. Uma camada de fáscia é vista acima do hidrogel, confirmando que o fechamento fascial foi bem-sucedido e permaneceu intacto durante o período pós-operatório. Um resultado negativo observado nesta etapa incluiria perda total de hidrogel (Figura 2E) ou perda de fechamento fascial e extrusão do leito da ferida (Figura 2F), com HE mostrando evidência de leito da ferida ou cicatriz fibrótica, dependendo do tempo decorrido no pós-operatório.
A análise imuno-histoquímica é fundamental na avaliação de biomateriais para o tratamento do VML craniofacial, a fim de identificar tipos celulares e interações moleculares no nível celular. Como o VML resulta na perda de células residentes e arquitetura capaz de regenerar o músculo esquelético, a regeneração muscular de novo no local lesionado é um resultado importante no tratamento4 e na avaliação da eficácia em terapias baseadas em biomateriais para VML. As isoformas de desenvolvimento da miosina, incluindo a miosina embrionária (MYH3) e neonatal (MYH8), são reexpressas nas fibras musculares esqueléticas em regeneração e fornecem um marcador específico para as fibras em regeneração18,19. A Figura 3 mostra um exemplo de como a imuno-histoquímica pode ser usada para identificar tipos celulares de interesse, neste caso, a cadeia pesada da miosina embrionária.
Finalmente, o ImageJ pode ser utilizado para quantificar as características das lâminas histológicas, incluindo imuno-histoquímica e colorações especializadas, como o tricrômico de Masson, para medir a resposta fibrótica (Figura 4). A remoção de uma porção de músculo nas lesões de VML altera a arquitetura e a composição muscular, levando ao aumento da deposição de colágeno I e fibrose macroscópica do tecido compartimental 2,3. Muitos estudos que avaliam tratamentos baseados em biomateriais para VML comparam a fibrose entre o grupo de intervenção e os grupos de controle4. Utilizando o método aqui descrito, os leitos das feridas em animais submetidos à lesão de VML podem ser identificados no tricrômico de Masson como cicatrizes fibróticas (Figura 4A). A deconvolução de cores através do ImageJ pode isolar e quantificar o canal azul correspondente ao tecido conjuntivo ( Figura 4B ) e, em seguida, definir em tons de cinza para medição ( Figura 4C ). A área da cicatriz pode ser isolada e medida usando a Imagem J (Figura 4D) e calibrada para uma barra de escala na imagem para tamanho preciso e área reprodutível. Usando essa abordagem, a deposição de tecido conjuntivo pode ser medida (Figura 4E).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66450/66450fig01.jpg"> 
Figura 1: Esquema cirúrgico demonstrando os passos. (A,B) Lesão cirúrgica do masseter VML. (C) Aplicação de biomaterial. (D) Colheita de masseter. (E) Morfologia muscular após a colheita. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66450/66450fig01large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66450/66450fig02.jpg"> 
Figura 2: Coloração tricrômica de HE e Masson. (A) Cortes de masseter de rato corados com HE da interface hidrogel-músculo com setas indicando estruturas morfologicamente identificadas como fibras musculares esqueléticas. (B) Seção de masseter de rato corada com HE demonstrando a abundância de fibras musculares esqueléticas em todo o hidrogel. (C) Tecido corado com HE e (D) tecido corado com tricrômico de Masson com setas indicando estruturas morfologicamente identificadas como vasos sanguíneos. (E, F) Resultados negativos mostrando perda total de hidrogel com gel aderido ao aspecto superficial do masseter em vez do leito da ferida e perda incompleta de hidrogel com perda de fechamento fascial, respectivamente. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66450/66450fig02large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66450/66450fig03.jpg"> 
Figura 3: Coloração imuno-histológica para cadeia pesada de miosina embrionária (eMHC) e laminina em seções transversais de masseter de rato. (A) 2 semanas após a cirurgia. (B) 12 semanas após a cirurgia. Uma concentração aumentada de eMHC é observada na amostra de 12 semanas em relação à amostra de 2 semanas. Imagens capturadas com ampliação de 20x. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66450/66450fig03large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66450/66450fig04.jpg"> 
Figura 4: Análise quantitativa de fibrose. (A) Seção de masseter de rato corado com tricrômico de Masson para quantificação da deposição de tecido conjuntivo como proxy para fibrose da ferida após lesão de VML em 12 semanas. (B) A imagem J foi usada para deconvoluir o canal azul correspondente ao tecido conjuntivo. (C) A imagem foi convertida em tons de cinza para análise. (D) A área correspondente à cicatriz fibrótica foi isolada e (E) a área de secção transversa e as porcentagens do campo correspondente ao branco (fundo) e preto (tecido conjuntivo) foram calculadas. Imagens capturadas usando microscopia de luz com ampliação de 10x. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66450/66450fig04large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>

Modelo de roedores de perda muscular volumétrica masseter para estudo de materiais de bioengenharia

Craniofacial volumetric muscle loss (VML) injuries can occur as a result of severe trauma, surgical excision, inflammation, and congenital or other ...

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Aprenda a criar um modelo de perda muscular volumétrica no masseter de ratos para estudar regeneração de músculos craniofaciais. Este método permite avaliar biomateriais como hidrogéis para terapias regenerativas.

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