Name: Eletromiografia de fibra única estimulada (SFEMG) para avaliação da transmissão da junção neuromuscular em modelos de roedores (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-03-08T14:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 30 s
Description: Aprenda eletromiografia de fibra única estimulada em modelos de roedores para avaliar a transmissão da junção neuromuscular. Este protocolo padronizado quantifica jitter e bloqueio de potenciais de ação em ratos.

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Todos os protocolos foram aprovados e realizados de acordo com os regulamentos estabelecidos pelo Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais da Universidade de Missouri.
1. Preparação animal e administração anestésica
<ol><li>Coloque equipamento de proteção individual adequado.</li>
	<li>Antes do procedimento, meça o peso do rato para determinar a dose apropriada para medicamentos baseados no peso e configurações do ventilador.</li>
	<li>Induza a anestesia com isoflurano inalatório a 3% a 5%. Uma vez estabelecido um nível adequado de anestesia, posicione o rato em decúbito ventral e mantenha a anestesia com isoflurano inalatório a 1%-3%.</li>
	<li>Verifique a adequação da profundidade da anestesia pressionando suavemente o coxim do membro posterior com uma pinça para observar a ausência de resposta de retirada.</li>
	<li>Mantenha a temperatura corporal a 37 °C.</li>
	<li>Aplique pomada à base de petróleo aprovada pelo veterinário nos olhos para evitar o ressecamento. Monitore a profundidade da anestesia observando a frequência respiratória e avaliando as respostas de retirada ao aplicar pressão na almofada do pé usando uma pinça.</li>
	<li>Raspe o membro posterior para ser avaliado usando uma tesoura. Após a depilação adequada, com fita adesiva, posicione o membro a ser estudado com o tornozelo fixado em aproximadamente 90° de dorsiflexão, o joelho em extensão e o quadril em abdução.</li>
	<li>Monitore continuamente a respiração e a frequência cardíaca do rato durante todo o experimento. NOTA: Um aumento na frequência cardíaca é comumente usado como um indicador de profundidade anestésica inadequada.</li>
	<li>Administre isoflurano para eutanasiar o rato, com uma dose de 5% ou mais, até que a respiração tenha cessado por pelo menos 3 min. Confirme a eutanásia por decapitação.</li>
</ol>2. Colocação e configuração do eletrodo
NOTA: A transmissão do nervo ciático e do músculo gastrocnêmio pela JNM é avaliada usando o sistema de eletromiografia (EMG). Consulte a Tabela de Materiais.
<ol><li>Insira um par de agulhas monopolares isoladas de 28 G para estimular o nervo ciático com o cátodo na região do membro posterior proximal, enquanto o ânodo está mais proximal dentro do tecido subcutâneo que se sobrepõe ao sacro.</li>
	<li>Certifique-se de que os eletrodos estimulantes não sejam colocados imediatamente próximos ao nervo ciático ou excessivamente profundos para evitar danos diretos ao nervo ciático ou outras estruturas adjacentes.</li>
	<li>Coloque um eletrodo de aterramento descartável no membro posterior ou cauda contralateral.</li>
	<li>Coloque cuidadosamente um eletrodo de agulha de calibre 27 e 25 mm projetado especificamente para EMG de fibra única, com uma superfície de gravação feita de material de platina-irídio no músculo gastrocnêmio direito. Certifique-se de que os eletrodos SFEMG sejam autoclavados antes de cada uso para manter a esterilidade.</li>
	<li>Insira o eletrodo de agulha SFEMG em paralelo com as fibras musculares do gastrocnêmio para capturar potenciais de ação de fibra única (SFAPs).</li>
	<li>Evite danos musculares ao inserir e manobrar a agulha SFEMG dentro do músculo.</li>
</ol>3. Procedimento de eletromiografia de fibra única estimulada (SFEMG)
<ol><li>Aplique estimulação de corrente constante no nervo ciático direito na frequência de 10 Hz usando uma faixa de intensidade de 0,3-10 mA e uma duração de pulso de 0,1 ms.</li>
	<li>Defina as configurações do filtro em um filtro de baixa frequência de 1 kHz e filtro de alta frequência de 10 kHz. Ajuste o ganho de 200 μV a 1000 μV por divisão para facilitar a visualização de potenciais. Defina a velocidade de varredura em 500 μs por divisão.</li>
	<li>Ajuste a intensidade do estímulo para acionar e isolar SFAPs para registro e análise subsequente.<ol><li>Para identificar e analisar uma resposta como um SFAP, certifique-se de que os critérios específicos mencionados abaixo sejam atendidos: Certifique-se de que o tempo de subida do pico da linha de base para a fase negativa seja inferior a 500 μs, a amplitude mínima (pico da linha de base para negativo) seja de pelo menos 200 μV e a resposta exiba consistentemente um comportamento de tudo ou nada (tamanho e forma estáveis entre as respostas). NOTA: É essencial que as respostas recorrentes exibam fases ascendentes consistentes, sem entalhes ou pontos de inflexão. Observe que o último critério é crucial para distinguir um sinal de qualidade da soma de vários sinais.</li>
	</ol></li>
	<li>Calcule o jitter, ou variabilidade da latência do SFAP (tempo entre a estimulação e a fase ascendente do pico negativo do SFAP) entre descargas consecutivas, após pelo menos 50 estímulos (50-100 estímulos), e avalie e quantifique o bloqueio. NOTA: O bloqueio pode ser avaliado como a presença ou ausência em cada sinapse ou como a porcentagem de estímulos que não conseguem desencadear a geração de potencial de ação de uma única fibra. O jitter é calculado usando a seguinte equação7 (o jitter é normalmente calculado automaticamente por sistemas de eletromiografia clínica): <img alt="Diagrama de fórmula de jitter MCD; método para calcular o jitter em microssegundos usando intervalos entre pulsos." src="/files/ftp_upload/66452/66452eq01.jpg" style="margin: auto;" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Equation 1"> MCD = Valor médio da diferença consecutiva IPI = Intervalo Interpotencial</li>
	<li>Repita o processo para respostas SFAP adicionais. Em média, avalie 10 sinapses de cada animal para calcular o jitter e, posteriormente, determine os valores médios por animal.</li>
	<li>Excluir SFAPs com jitter inferior a 4 μs das análises para evitar a inclusão de potenciais que possam ter sido evocados por estimulação muscular direta11.</li>
	<li>Ao registrar potenciais que exibem bloqueio intermitente, aumente a intensidade do estímulo para verificar se a falha do SFAP não é atribuível à estimulação submáxima.</li>
</ol>

<meta charset="utf8"></head><body>SFEMG em roedores: avaliando a função da JNM na saúde e na doença

<ol><li>Stalberg, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Propagation+velocity+in+human+muscle+fibers+in+situ%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Physiol+Scand+Suppl%22%5BJournal%5D)">Propagation velocity in human muscle fibers in situ.</a> Acta Physiol Scand Suppl. 287, 1-112 (1966).</li>
<li>Stålberg, E., Trontelj, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+study+of+normal+and+abnormal+neuromuscular+transmission+with+single+fibre+electromyography%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">The study of normal and abnormal neuromuscular transmission with single fibre electromyography.</a> J Neurosci Methods. 74 (2), 145-154 (1997).</li>
<li>Sanders, D. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Guidelines+for+single+fiber+EMG%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Guidelines for single fiber EMG.</a> Clin Neurophysiol. 130 (8), 1417-1439 (2019).</li>
<li>Chugh, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuromuscular+junction+transmission+failure+is+a+late+phenotype+in+aging+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol+Aging%22%5BJournal%5D)">Neuromuscular junction transmission failure is a late phenotype in aging mice.</a> Neurobiol Aging. 86, 182-190 (2020).</li>
<li>Padilla, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Profiling+age-related+muscle+weakness+and+wasting%3A+Neuromuscular+junction+transmission+as+a+driver+of+age-related+physical+decline%5BTitle%5D)+AND+%22GeroScience%22%5BJournal%5D)">Profiling age-related muscle weakness and wasting: Neuromuscular junction transmission as a driver of age-related physical decline.</a> GeroScience. 43 (3), 1265-1281 (2021).</li>
<li>Selvan, V. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-fiber+EMG%3A+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Indian+Acad+Neurol%22%5BJournal%5D)">Single-fiber EMG: A review.</a> Ann Indian Acad Neurol. 14 (1), 64-67 (2011).</li>
<li>Sanders, D. B., Kouyoumdjian, J. A., Stålberg, E. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single+fiber+electromyography+and+measuring+jitter+with+concentric+needle+electrodes%5BTitle%5D)+AND+%22Muscle+Nerve%22%5BJournal%5D)">Single fiber electromyography and measuring jitter with concentric needle electrodes.</a> Muscle Nerve. 66 (2), 118-130 (2022).</li>
<li>Juel, V. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single+fiber+electromyography%5BTitle%5D)+AND+%22Handb+Clin+Neurol%22%5BJournal%5D)">Single fiber electromyography.</a> Handb Clin Neurol. 160, 303-310 (2019).</li>
<li>Chung, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+for+dying-back+axonal+degeneration+in+age-associated+skeletal+muscle+decline%5BTitle%5D)+AND+%22Muscle+Nerve%22%5BJournal%5D)">Evidence for dying-back axonal degeneration in age-associated skeletal muscle decline.</a> Muscle Nerve. 55 (6), 894-901 (2017).</li>
<li>Iyer, C. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Follistatin-induced+muscle+hypertrophy+in+aged+mice+improves+neuromuscular+junction+innervation+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol+Aging%22%5BJournal%5D)">Follistatin-induced muscle hypertrophy in aged mice improves neuromuscular junction innervation and function.</a> Neurobiol Aging. 104, 32-41 (2021).</li>
<li>Meekins, G. D., Carter, G. T., Emery, M. J., Weiss, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Axonal+degeneration+in+the+trembler-j+mouse+demonstrated+by+stimulated+single-fiber+electromyography%5BTitle%5D)+AND+%22Muscle+Nerve%22%5BJournal%5D)">Axonal degeneration in the trembler-j mouse demonstrated by stimulated single-fiber electromyography.</a> Muscle Nerve. 36 (1), 81-86 (2007).</li>
<li>Gooch, C. L., Mosier, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stimulated+single+fiber+electromyography+in+the+mouse%3A+Techniques+and+normative+data%5BTitle%5D)+AND+%22Muscle+Nerve%22%5BJournal%5D)">Stimulated single fiber electromyography in the mouse: Techniques and normative data.</a> Muscle Nerve. 24 (7), 941-945 (2001).</li>
<li>Chung, T., Tian, Y., Walston, J., Hoke, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+single-fiber+jitter+level+is+associated+with+reduction+in+motor+function+with+aging%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Phys+Med+Rehabil%22%5BJournal%5D)">Increased single-fiber jitter level is associated with reduction in motor function with aging.</a> Am J Phys Med Rehabil. 97 (8), 551-556 (2018).</li>
<li>Sokolow, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impaired+neuromuscular+transmission+and+skeletal+muscle+fiber+necrosis+in+mice+lacking+na%2Fca+exchanger+3%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Investig%22%5BJournal%5D)">Impaired neuromuscular transmission and skeletal muscle fiber necrosis in mice lacking na/ca exchanger 3.</a> J Clin Investig. 113 (2), 265-273 (2004).</li>
<li>Añor, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+jitter+by+stimulated+single-fiber+electromyography+in+normal+dogs%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vet+Intern+Med%22%5BJournal%5D)">Evaluation of jitter by stimulated single-fiber electromyography in normal dogs.</a> J Vet Intern Med. 17 (4), 545-550 (2003).</li>
<li>Mizrachi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NMO-IgG+and+AQP4+peptide+can+induce+aggravation+of+eamg+and+immune-mediated+muscle+weakness%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol+Res%22%5BJournal%5D)">NMO-IgG and AQP4 peptide can induce aggravation of eamg and immune-mediated muscle weakness.</a> J Immunol Res. 2018, 5389282(2018).</li>
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<li>Finley, D. B., Wang, X., Graff, J. E., Herr, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single+fiber+electromyographic+jitter+and+detection+of+acute+changes+in+neuromuscular+function+in+young+and+adult+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pharmacol+Toxicol+Methods%22%5BJournal%5D)">Single fiber electromyographic jitter and detection of acute changes in neuromuscular function in young and adult rats.</a> J Pharmacol Toxicol Methods. 59 (2), 108-119 (2009).</li>
<li>Khan, Z. H., Hajipour, A., Zebardast, J., Alomairi, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Muscle+relaxants+in+anesthesia+practice%3A+A+narrative+review%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Anesthesiol+Crit+Care%22%5BJournal%5D)">Muscle relaxants in anesthesia practice: A narrative review.</a> Arch Anesthesiol Crit Care. 4 (4), 547-552 (2018).</li>
<li>Padua, L., Caliandro, P., Stålberg, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+approach+to+the+measurement+of+motor+conduction+velocity+using+a+single+fibre+emg+electrode%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">A novel approach to the measurement of motor conduction velocity using a single fibre emg electrode.</a> Clin Neurophysiol. 118 (9), 1985-1990 (2007).</li>
<li>Khoo, A., Hay Mar, H., Borghi, M. V., Catania, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrophysiologic+evaluation+of+myasthenia+gravis+and+its+mimics%3A+Real-world+experience+with+single-fiber+electromyography%5BTitle%5D)+AND+%22Hosp+Pract%22%5BJournal%5D)">Electrophysiologic evaluation of myasthenia gravis and its mimics: Real-world experience with single-fiber electromyography.</a> Hosp Pract. 50 (5), 373-378 (2022).</li>
<li>Nannan, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+role+of+lamin+a%2Fc+in+preventing+neuromuscular+junction+decline+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">A role of lamin a/c in preventing neuromuscular junction decline in mice.</a> J Neurosci. 40 (38), 7203(2020).</li>
<li>Alley, D. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Grip+strength+cutpoints+for+the+identification+of+clinically+relevant+weakness%5BTitle%5D)+AND+%22J+Gerontol+A+Biol+Sci+Med+Sci%22%5BJournal%5D)">Grip strength cutpoints for the identification of clinically relevant weakness.</a> J Gerontol A Biol Sci Med Sci. 69 (5), 559-566 (2014).</li>
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<li>Rich, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+control+of+neuromuscular+transmission+in+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscientist%22%5BJournal%5D)">The control of neuromuscular transmission in health and disease.</a> Neuroscientist. 12 (2), 134-142 (2006).</li>
<li>Juel, V. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+neuromuscular+junction+disorders+in+the+electromyography+laboratory%5BTitle%5D)+AND+%22Neurol+Clin%22%5BJournal%5D)">Evaluation of neuromuscular junction disorders in the electromyography laboratory.</a> Neurol Clin. 30 (2), 621-639 (2012).</li>
<li>Arnold, W. D., Clark, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuromuscular+junction+transmission+failure+in+aging+and+sarcopenia%3A+The+nexus+of+the+neurological+and+muscular+systems%5BTitle%5D)+AND+%22Ageing+Res+Rev%22%5BJournal%5D)">Neuromuscular junction transmission failure in aging and sarcopenia: The nexus of the neurological and muscular systems.</a> Ageing Res Rev. 89, 101966(2023).</li>
<li>Kokubun, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reference+values+for+concentric+needle+single+fiber+EMG%5BTitle%5D)+AND+%22Rinsho+Shinkeigaku%22%5BJournal%5D)">Reference values for concentric needle single fiber EMG.</a> Rinsho Shinkeigaku. 52 (11), 1246-1248 (2012).</li>
<li>Testelmans, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rocuronium+exacerbates+mechanical+ventilation-induced+diaphragm+dysfunction+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Crit+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Rocuronium exacerbates mechanical ventilation-induced diaphragm dysfunction in rats.</a> Crit Care Med. 34 (12), 3018-3023 (2006).</li>
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<li>Stålberg, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reference+values+for+jitter+recorded+by+concentric+needle+electrodes+in+healthy+controls%3A+A+multicenter+study%5BTitle%5D)+AND+%22Muscle+Nerve%22%5BJournal%5D)">Reference values for jitter recorded by concentric needle electrodes in healthy controls: A multicenter study.</a> Muscle Nerve. 53 (3), 351-362 (2016).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>&nbsp; Eletrodo de agulha de fibra única reutilizável de 27 G</td><td>Technomed</td><td>202860-000</td><td>eletrodo de gravação de fibra única</td></tr><tr><td>Seringa de vidro de 2 mL</td> Kent <td>Scientific Corporation</td><td>SOMNO-2ML</td><td></td></tr><tr><td>Cabo destacável</td><td>Technomed</td><td>202845-0000</td><td>para conectar o eletrodo do gravador à máquina de eletrodiagnóstico</td></tr><tr><td>Eletrodo de disco descartável de 2" x 2" com leads</td><td>Cadwell</td><td>302290-000</td><td>eletrodo de aterramento</td></tr><tr><td>agulhas monopolares descartáveis 28 G</td><td>Technomed</td><td>202270-000</td><td>eletrodos estimuladores de cátodo e ânodo</td></tr><tr><td>Cabo de agulha EMG (caixa de comutação Amp/stim)</td> <td>Cadwell</td><td>190266-200</td><td>para conectar eletrodos monopolares ao estimulador eletrodiagnóstico</td></tr><tr><td>Helping Hands clipe jacaré com base de ferro</td><td>Radio Shack</td><td>64-079</td><td>Mantendo a colocação do eletrodo de gravação&nbsp;</td></tr><tr><td>Isoflurano (frasco de 250 mL)</td><td>Seringa</td><td></td> de irrigação de ponta curva monoject Piramal Healthcare NA <td></td></tr><tr><td></td><td>Covidien</td><td>81412012</td><td>utilizado para aplicação de gel de eletrodo</td></tr><tr><td>Sistema de Monitoramento Fisiológico PhysioSuite com Aquecimento Homeotérmico RightTemp</td><td>Kent Scientific Corporation</td><td>PS-RT</td><td>Inclui almofada de aquecimento infravermelho, sonda retal e sonda de temperatura da almofada</td></tr><tr><td>Aparador Pro Pet Kit de tosa</td><td>Oster</td><td>078577-010-003</td><td>tosquiadeiras para depilação</td></tr><tr><td>Tubos endotraqueais de rato (16 G)</td><td>Kent Scientific Corporation</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Brometo de rocorônio</td><td>Sigma</td><td>PHR2397-500MG</td> agente <td>bloqueador neuromuscular</td></tr><tr><td>Sierra Summit EMG system</td><td>Cadwell Industries, Inc., Kennewick, WA</td><td>NA</td><td>sistema de eletrodiagnóstico portátil</td></tr><tr><td>SomnoSuite Low-Flow Sistema de Anestesia Digital</td><td>Kent Scientific Corporation</td><td>SOMNO</td><td>Inclui adaptador anti-derramamento e anti-vapor na parte superior da garrafa; Tubulação do adaptador de Y; filtro de limpeza de carvão</td></tr><tr><td>Pomada oftálmica à base de petróleo veterinário</td><td>Puralube</td><td>26870</td><td>aplicado durante a anestesia para evitar lesões na córnea</td></tr></tbody></table>

eletromiografia de fibra única estimulada (sfemg) para avaliação da transmissão da junção neuromuscular em modelos de roedores

Stimulated Single Fiber Electromyography (SFEMG) for Assessing Neuromuscular Junction Transmission in Rodent Models

Para demonstrar aumento do jitter e bloqueio no contexto de falha de transmissão da JNM, o SFEMG estimulado foi realizado com e sem administração intravenosa de rocurônio. O rocurônio é um agente bloqueador neuromuscular de ação intermediária e não despolarizante amplamente utilizado em ambientes clínicos para induzir paralisia muscular durante cirurgias ou procedimentos médicos. Ele opera ligando-se competitivamente aos receptores nicotínicos de acetilcolina na NMJ19. Antes da administração de rocurônio, o rato adulto do tipo selvagem (Sprague Dawley) foi preparado e anestesiado conforme descrito na seção 1. Devido à paralisia induzida pelo rocurônio, o suporte ventilatório invasivo foi usado para obter dados representativos (contrastando com a abordagem típica para anestesia durante os registros do SFEMG descritos acima na seção 1). Um tubo endotraqueal foi colocado e a ventilação foi mantida a 60 respirações/min usando um modo controlado por pressão com pressão de 17 mmHg e pressão expiratória final positiva de 3 cm H2O enquanto fornecia 2%-3% de isoflurano. Uma vez que o suporte ventilatório e a anestesia foram alcançados, os potenciais de ação de fibra única foram registrados com e sem tratamento com rocurônio (bolus de 0,05 mg / kg de brometo de rocurônio intravenoso). A Figura 1 demonstra três registros representativos de potencial de ação de fibra única do mesmo NMJ em um rato adulto. A Figura 1A demonstra a morfologia típica de um potencial de ação de fibra única (após uma única estimulação) com um tempo de subida inferior a 500 μs da linha de base para o pico negativo e uma amplitude mínima (pico a pico) de pelo menos 200 μV. A Figura 1B demonstra características de aumento do jitter e bloqueio intermitente após a injeção de rocurônio. A Figura 1C demonstra a normalização do jitter e do bloqueio da mesma sinapse após a resolução do bloqueio NMJ. Para simplificar a visualização, a Figura 1B,C mostra apenas as respostas após 9 estímulos consecutivos. Além disso, para melhor compreensão, a Figura 2 mostra um exemplo adicional de três potenciais de ação de fibra única sobrepostos observados após 10 estímulos consecutivos, revelando jitter e bloqueio elevados.
Para quantificar o impacto do rocurônio na transmissão da JNM usando SFEMG estimulado, foram feitos registros de 5 JNMs sem qualquer tratamento e de 5 JNMs após a administração do rocurônio e foram analisados quanto a jitter e bloqueio (Figura 3). Após o rocurônio, o jitter (Figura 3A) e o bloqueio (Figura 3B) aumentaram significativamente.
<img alt="Gráficos de potencial de ação de fibra única mostrando tendências de latência e amplitude; Resultados da análise de jitter." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66452/66452fig01.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 1"> Figura 1: Três registros representativos de eletromiografia de fibra única da mesma junção neuromuscular (NMJ). (A) Exemplo de um potencial de ação de fibra única após uma estimulação nervosa única mostrando critérios de amplitude (amplitude de pico negativo a basal de pelo menos 200 μV) e tempo de subida (linha de base a pico negativo inferior a 500 μs) critérios para aceitação como potencial de fibra única. (B) Exemplo de potenciais de ação de fibra única sobrepostos após 9 estímulos consecutivos mostrando aumento do jitter e bloqueio, indicando transmissão prejudicada de NMJ após administração de rocurônio (jitter: 68,35 μs). (C) Exemplo de potenciais de ação de fibra única sobrepostos após 9 estímulos consecutivos mostrando jitter reduzido e sem bloqueio, indicando normalização da transmissão da JNM após a resolução do tratamento com rocurônio (jitter: 21,7 μs). Traços representativos de SFEMG revelam potenciais de ação de fibra muscular única registrados em uma sinapse saudável sem bloqueio e jitter normal em visão sobreposta. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66452/66452fig01large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Gráfico de amplitude do potencial de ação de fibra única; latência vs amplitude; evento de estimulação bloqueado." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66452/66452fig02.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 2"> Figura 2: Três potenciais de ação de fibra única (SFAPs) sobrepostos registrados após estímulos consecutivos durante a administração de rocurônio. Três potenciais de ação de fibra única (SFAPs) sobrepostos foram registrados após 10 estímulos consecutivos durante a administração de rocurônio, indicando aumento do jitter e bloqueio. Os valores de jitter para A, B e C foram 24,3 μs, 46,9 μs e 88,7 μs, respectivamente. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66452/66452fig02large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="jitter NMJ e gráficos de barras de bloqueio de transmissão; atraso médio, porcentagem de estimulação; dados de pesquisa." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66452/66452fig03.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 3"> Figura 3: Avaliação eletromiográfica de fibra única da transmissão da junção neuromuscular (JNM) após tratamento com um agente bloqueador da JNM não despolarizante. (A) Durante a administração de rocurônio (0,05 mg / kg), o SFEMG mostrou aumento da variabilidade da transmissão (jitter) versus condição saudável (não tratado: 12,9 μs, IC 95% [7,2-16,9 μs] versus rocurônio: 40,70 μs, IC 95% [34,7-70,7 μs]) (teste de Mann Whitney: p = 0,0079). (B) A porcentagem de estímulos com bloqueio da JNM de cada sinapse no SFEMG foi aumentada em relação à condição saudável (não tratada: 0%, IC 95% [0-0%] versus rocurônio: 31%, IC 95% [14,0-59,0%]) (teste de Mann Whitney: p = 0,0079). Todas as medidas (jitter e porcentagens de estímulos com bloqueio da JNM) foram obtidas de um único rato, n = 5 sinapses não tratadas e n = 5 sinapses após o tratamento com rocurônio. Dados apresentados como mediana ± intervalo de confiança de 95%. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66452/66452fig03large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>

Eletromiografia de fibra única estimulada (SFEMG) para avaliação da transmissão da junção neuromuscular em modelos de roedores

As the final connection between the nervous system and muscle, transmission at the neuromuscular junction (NMJ) is crucial for normal motor function. ...

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Neuroscience

Neurociência

Um modelo murino de estimulação eléctrica neuromuscular (EENM), uma modalidade segura e barata clínica, para os músculos do compartimento anterior é descrito. Este modelo tem a vantagem de a modificação de um dispositivo facilmente disponível clínica para a finalidade de obter contracções musculares segmentados e específicos em ratos.

Um modelo murino de treinamento muscular por eletroestimulação neuromuscular

Este método novo permite a gravação simultânea intracelular de um motoneurônio único adulto rato e a medição da força produzida por suas fibras musculares. A investigação combinado das propriedades eléctricas e mecânicas das unidades motoras em animais normais e geneticamente modificadas é um avanço para o estudo do sistema neuromuscular.

Gravação Intracelular simultânea de um motoneurônio lombar e a força produzida pelo seu motor no Rato Adulto<em&gt; Em vivo</em

Este vídeo demonstra um método para avaliar as junções neuromusculares funcionais. Usando um biorreator contendo tecido muscular e neurônios motores, juntamente com microscopia fluorescente, os canais sensíveis à luz nos neurônios são estimulados a gerar sinais elétricos, causando contrações nas fibras musculares.

Avaliação de uma junção neuromuscular funcional por meio de estimulação óptica simultânea e gravação de vídeo

Fonte: Marinello, M., et al. Caracterização de junções neuromusculares em camundongos por microscopia confocal e super-resolução combinada. J. Vis. Exp. (2021)Este vídeo demonstra a preparação, imunocoloração e imagem de junções neuromusculares no tecido muscular de ratos usando microscopia confocal e de super-resolução para visualizar e analisar estruturas pré-sinápticas e pós-sinápticas.

Caracterização de junções neuromusculares em camundongos por microscopia combinada confocal e super-resolução

Uma avaliação funcional da junção neuromuscular (JNM) pode fornecer informações essenciais sobre a comunicação entre o músculo e do nervo. Aqui descrevemos um protocolo para avaliar exaustivamente o músculo e o MNJ funcionalidade usando duas preparações diferentes de nervo-músculo, ou seja, sóleo-isquiático e frênico-diafragma.

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Na Vivo Eletrofisiológica medição do potencial de ação muscular composto de membros dianteiros em modelos de Mouse de degeneração do neurônio Motor

A capacidade de detectar com precisão componentes de junção neuromuscular é crucial na avaliação de modificações em sua arquitetura devido a processos patológicos ou de desenvolvimento. Aqui apresentamos uma descrição completa de um método simples para obter imagens de alta qualidade de junções neuromusculares de montagem inteira que podem ser usadas para realizar medições quantitativas.

Dissecção de fibras musculares esqueléticas únicas para análises imunofluorescentes e morfométricas de junções neuromusculares de monte inteiro

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Este artigo detalha como realizar a miografia de impedância elétrica in vivo (usando matrizes de eletrodos de superfície e agulha) e ex vivo (usando uma célula dielétrica) no músculo gastrocnêmio de roedores. Ele demonstrará a técnica em camundongos e ratos e detalhará as modificações disponíveis (ou seja, animais obesos, filhotes).

Realização de Miografia de Impedância Elétrica In Vivo e Ex Vivo em Roedores

Descrevemos um sistema de imagem reprodutível, automatizado e imparcial para caracterizar a função de junção neuromuscular usando tecido muscular esquelético projetado por humanos e motoneurons optogenéticos. Este sistema permite a quantificação funcional da conectividade neuromuscular ao longo do tempo e detecta a função neuromuscular diminuída causada por neurotoxinas e soro do paciente myasthenia gravis.

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Aprenda eletromiografia de fibra única estimulada em modelos de roedores para avaliar a transmissão da junção neuromuscular. Este protocolo padronizado quantifica jitter e bloqueio de potenciais de ação em ratos.

Eletromiografia de fibra única estimulada (SFEMG) para avaliação da transmissão da junção neuromuscular em modelos de roedores

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