Um método modificado para cateterismo intratecal em ratos

O cateterismo intratecal tem sido amplamente aplicado em experimentos com animais, especialmente aqueles sobre dor neuropática. No entanto, os métodos tradicionais ainda apresentam várias limitações. Embora alguns pesquisadores tenham tentado melhorar os métodos tradicionais, os métodos disponíveis ainda precisam ser modificados.

Aqui, apresentamos um método modificado para cateterismo intratecal em ratos que representa uma abordagem simples, conveniente e confiável para a administração intratecal repetitiva de drogas. Prepare um tubo PE10 de 15 centímetros de comprimento. Insira um fio de aço inoxidável de 20 centímetros de comprimento com duas extremidades polidas no tubo PE10 como suporte e marque o tubo a dois centímetros de uma extremidade.

Corte a ponta afiada de uma agulha 22G e sele a extremidade distal com uma pinça. Corte um cateter peridural em fragmentos de um centímetro. Em seguida, insira esses fragmentos na agulha 22G sem ponta afiada e sele a extremidade distal com um par de pinças retas aquecidas.

Este aparelho foi chamado de tampa de vedação do tubo. Prepare uma faixa antialérgica de 0,3 centímetro vezes 0,5 centímetro com uma tesoura. Prepare os instrumentos para o cateterismo intratecal, que foi esterilizado antes da cirurgia.

Incluía pinça dentada, tesoura, aparelho de gavagem, cabo de bisturi e lâminas número 10. Esterilize o tubo PE10 e o fio-guia com etanol por aproximadamente duas horas. Anestesiar ratos com isoflurano a 3% na vazão de três litros por minuto.

Coloque um rato na mesa de operação e a pata traseira foi cortada com uma pinça. A ausência de movimento do polo posterior em resposta à estimulação confirmou o sucesso da anestesia. A analgesia adequada foi administrada por injeção intramuscular de um miligrama por quilograma de meloxicam antes do cateterismo intratecal.

Remove os pelos na região da coluna lombar das costas e na área entre duas orelhas com um barbeador. Coloque um tubo de centrífuga sob o abdômen do rato na junção cintura-quadril. Esterilize os locais cirúrgicos com solução de povidoniodo e solução de etanol três vezes.

Cubra o rato com curativo asséptico e exponha os locais cirúrgicos. E depois lave com solução salina normal antes da cirurgia. Determine a localização do espaço intervertebral entre L5 e L6, localizando o processo espinhal de L6 no ponto médio entre as cristas ilíacas bilaterais esquerda e direita.

Fixe a pele com o polegar esquerdo e o dedo indicador do operador e, em seguida, faça uma incisão na linha média de três a quatro centímetros de comprimento logo acima do processo espinhoso entre L4 e S1. Separe sem rodeios os tecidos subcutâneos com uma tesoura. Localize o espaço intervertebral entre L5 e L6 novamente. Clamp e levante o processo dorsal L5 com um par de pinças dentadas para expandir o espaço intervertebral.

Em seguida, separa sem rodeios os músculos ao redor do corpo vertebral com uma tesoura na parte superior do processo dorsal L6 foi completamente exposto. Quando o processo dorsal L5 é levantado com um par de pinças dentadas e o espaço intervertebral é expandido por outro par de pinças, limpe o espaço intervertebral L5 a seis com uma bola de algodão até que a área em V invertido esteja completamente exposta. Perfure a coluna com uma agulha 23G na área em V invertido, logo abaixo do topo do processo dorsal L6.

Insira cuidadosamente o tubo PE10 contendo fio de aço inoxidável em um canal espinhal no local da punção sendo inclinado 30 graus em direção à cauda. O ângulo de inserção foi ajustado até que o tubo PE10 pudesse ser inserido com sucesso sem qualquer resistência. Quando a área marcada do tubo PE10 atinge o músculo posterior, o cateterismo é interrompido.

Remove lentamente o fio inoxidável do tubo PE10 e, em seguida, conecta o tubo PE10 a uma seringa, através da qual são injetados 20 microlitros de solução salina normal. Após a remoção da seringa, a solução salina pode ter fluído continuamente para fora do tubo PE10, indicando que o tubo PE10 foi inserido com sucesso no espaço subaracnóideo. Uma vez que o PE10 dois foi confirmado como desobstruído, suture os músculos de um lado do corpo vertebral com uma sutura de quatro zero e faça um nó.

Em seguida, amarre a sutura ao redor do tubo PE10 e faça outro nó. Não corte a sutura e a sutura os músculos do outro lado. Amarre a sutura ao redor do tubo PE10 novamente.

Faça um terceiro nó e corte a sutura. Faça uma incisão de 0,5 centímetro de comprimento em um centímetro logo abaixo do ponto médio entre as orelhas. Separe sem rodeios os tecidos subcutâneos com uma tesoura.

E insira o tubo de gavagem de metal através da incisão em direção à cauda. Até que a ponta fique visível na incisão lombar. Insira a extremidade distal do tubo PE10 no tubo de gavagem até que o tubo PE10 saia da outra extremidade do tubo de gavagem.

Em seguida, retira suavemente a gavagem. Quando o tubo PE10 for confirmado como desobstruído novamente, suture os músculos restantes ao redor da incisão lombar com uma sutura de quatro zeros. Amarra a sutura ao redor do tubo PE10 e faz outro nó.

Fixe o tubo PE10 novamente. Suturar a pele, evitando danos ao tubo PE10, Em seguida, suturar a pele do pescoço com uma sutura de quatro zeros. Amarre a sutura ao redor do tubo PE10 e faça um nó para fixar o tubo PE10.

Assim que o tubo PE10 for confirmado como desobstruído novamente, sele a extremidade extracorpórea do tubo PE10 com uma tampa de vedação. O tubo PE10 foi seco com um pedaço de tecido e uma banda antialérgica foi amarrada ao redor do tubo PE10 várias vezes para evitar a retração do tubo PE10 durante o movimento do rato. Após a cirurgia, o rato voltou para sua gaiola e monitorou-o de perto durante a recuperação da anestesia até que ele recupere a consciência.

Depois que o rato estiver totalmente acordado, remova a tampa de vedação e injete 20 microlitros de lidocaína a 2% no tubo PE10 a uma taxa de 0,2 microlitros por segundo via seringa Hamilton, seguida pela injeção de 10 microlitros de solução salina normal. Sele o tubo PE10 com uma tampa de vedação. Coloque um rato sobre a mesa e observe com atenção.

Paralisia dos membros inferiores após injeção intratecal de lidocaína indica cateterismo bem-sucedido. A paralisia dos membros posteriores geralmente dura aproximadamente 30 minutos. Monitore de perto o rato durante o período de recuperação até a recuperação completa da função do membro.

A paraplegia completa de ambos os membros inferiores dos ratos após a injunção intratecal de lidocaína indicou um cateterismo bem-sucedido. Comparação da taxa de cateterismo bem-sucedido entre nossos métodos modificados e o método relatado anteriormente. A taxa de cateterismo intratecal bem-sucedido para nosso método modificado foi de 95%, maior do que a taxa de 88% alcançada com o método relatado por Hou et al.

Comparação da taxa de cateter de longa permanência entre nosso método modificado e o método relatado anteriormente. A taxa de cateter de longa permanência nos dias dois, cinco e sete após o cateterismo intratecal foi de 94%, 81% e 65%, respectivamente, em um estudo de Storkson et al. A taxa de cateter de longa permanência em dois, cinco e sete dias após o cateterismo intratecal foi de 95%, 90% e 85%, respectivamente, para o nosso método.

Em conclusão, o método modificado para cateterismo intratecal pode servir como uma ferramenta útil para a administração intratecal e repetitiva de drogas e representa uma maneira simples, conveniente e confiável de encurtar a duração dos experimentos.