Avaliação em tempo real de Ca2+ absoluto, citosólico, livre e contratilidade correspondente em vasos linfáticos isolados e pressurizados
March 22nd, 2024
Este protocolo descreve um método para medir simultaneamente o diâmetro citosólico, de cálcio livre [Ca2+]i e do vaso em vasos linfáticos em contração em tempo real e, em seguida, calcular as concentrações absolutas de Ca2+ , bem como os parâmetros de contratilidade/ritmidade. Este protocolo pode ser usado para estudar Ca2+ e dinâmica contrátil em uma variedade de condições experimentais.
Estudamos os mecanismos das contrações dos vasos linfáticos e do fluxo linfático para entender melhor a patologia subjacente do linfedema relacionado ao câncer, bem como a conexão entre o sistema linfático e a hipertensão. Nosso objetivo é identificar alvos terapêuticos dentro da vasculatura linfática para que possamos desenvolver novos tratamentos para doenças linfáticas. Descobertas recentes de diferentes canais de angi no músculo linfático e nas células endoteliais, que contribuem para a dinâmica subjacente do cálcio, provaram ser fundamentais para o avanço do campo.
Vasos isolados e microscópio intravital têm sido técnicas cruciais para o estudo das funções dos vasos linfáticos. Mais recentemente, tem havido uma tendência ascendente de usar órgãos em um chip e vasos microfabricados para investigar muitos aspectos da biologia linfática. O tamanho muito pequeno do tecido desafia, estudando a vasculatura linfática, exigindo muito tempo, paciência e o desenvolvimento de novas tecnologias.
A indisponibilidade de marcadores específicos de células musculares linfáticas é outro obstáculo para toda a comunidade científica. A vantagem deste protocolo é a capacidade de medir as contrações linfáticas e as concentrações absolutas de cálcio dentro do mesmo vaso. Isso fornece informações adicionais sobre a sinalização de cálcio, mecanismos de contração, bem como a capacidade de medir comparações de linha de base entre grupos de tratamento.
Em comparação com outras técnicas que talvez dependam de alterações relativas no cálcio ou vasos paralisados.
Visão Geral
Este protocolo descreve um método para medir concentrações de cálcio citosólico e diâmetro de vasos em vasos linfáticos contraindo em tempo real. Ele permite o estudo da dinâmica do cálcio e contrátil sob várias condições experimentais.
Componentes Principais do Estudo
Área da Ciência
- Neurociência
- Biologia Vascular
- Sinalização de Cálcio
Fundo
- Entender as contrações dos vasos linfáticos é crucial para abordar o linfedema relacionado ao câncer.
- Descobertas recentes em canais iônicos avançaram o campo da biologia linfática.
- Técnicas como vasos isolados e microscopia intravital são essenciais para estudar as funções linfáticas.
- Os desafios incluem o pequeno tamanho do tecido e a falta de marcadores específicos para células musculares linfáticas.
Propósito do Estudo
- Identificar alvos terapêuticos dentro da vasculatura linfática.
- Desenvolver novos tratamentos para doenças linfáticas.
- Fornecer insights sobre a sinalização de cálcio e mecanismos de contração.
Métodos Usados
- Isolamento e canulação de vasos linfáticos mesentéricos de ratos eutanasiados.
- Medição do diâmetro do vaso e concentrações de cálcio usando microscopia de fluorescência.
- Uso de reagentes específicos para visualizar a dinâmica do cálcio.
- Aplicação de pressão para manter condições fisiológicas durante os experimentos.
Principais Resultados
- Foi alcançada a medição simultânea das concentrações de cálcio e do diâmetro do vaso.
- O protocolo permite comparações de linha de base entre grupos de tratamento.
- Foram obtidos insights sobre os mecanismos de contração.
- Foi demonstrada uma compreensão aprimorada da sinalização de cálcio em vasos linfáticos.
Conclusões
- Este método fornece uma abordagem robusta para estudar a função dos vasos linfáticos.
- Oferece vantagens sobre técnicas que dependem de mudanças relativas no cálcio.
- O protocolo pode facilitar futuras pesquisas em biologia linfática e doenças relacionadas.
Perguntas Frequentes
Chapters in this video
0:00
Introduction
1:53
Setting Up the Perfusion Chamber to Measure Contractility in Isolated, Pressurized Lymph Vessels
2:34
Isolation and Cannulation of Mesenteric Lymph Vessels to Measure Cytosolic, Free Calcium and Vessel Diameter in Contracting Lymph Vessels
4:29
Measurement of the Absolute Concentrations of [Ca2+i2+]i in Isolated, Pressurized Lymph Vessels
