Name: Avaliação rápida glicoqualitativa de proteínas recombinantes usando um sistema totalmente automatizado (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-06-28T13:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 19 s
Description: Aprenda análise glicoqualitativa automatizada de proteínas recombinantes usando lectinas e microarranjos. Este método reduz o trabalho manual e acelera a descoberta de biomarcadores glicosilados para diagnóstico.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>Perfil automatizado de glicanos à base de lectina usando matriz de esferas em uma única ponta (BIST)

<ol><li>Butler, M., Reichl, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+cell+expression+systems%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Biochem+Eng+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Animal cell expression systems.</a> Adv Biochem Eng Biotechnol. 175, 1-36 (2021).</li>
<li>Silva, M. L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chapter+One+-+Lectin+biosensors+in+cancer+glycan+biomarker+detection%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Clin+Chem%22%5BJournal%5D)">Chapter One - Lectin biosensors in cancer glycan biomarker detection.</a> Adv Clin Chem. 93, 1-61 (2019).</li>
<li>Hiono, T., Nagai-Okatani, C., Kuno, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((4.07+-+Application+of+glycan-related+microarrays%5BTitle%5D)+AND+%22Comprehensive+Glycoscience+%28Second+Edition%29%22%5BJournal%5D)">4.07 - Application of glycan-related microarrays.</a> Comprehensive Glycoscience (Second Edition). , 134-148 (2021).</li>
<li>Shimazaki, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lectin+bead+array+in+a+single+tip+facilitates+fully+automatic+glycoprotein+profiling%29%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Chem%22%5BJournal%5D)">Lectin bead array in a single tip facilitates fully automatic glycoprotein profiling).</a> Anal Chem. 91 (17), 11162-11169 (2019).</li>
<li>Shimazaki, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GlycoBIST%3A+A+System+for+automatic+glycan+profiling+of+a+target+protein+using+milli-bead+array+in+a+tip%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Protein+Sci%22%5BJournal%5D)">GlycoBIST: A System for automatic glycan profiling of a target protein using milli-bead array in a tip.</a> Curr Protoc Protein Sci. 99 (1), e103(2020).</li>
<li>Mahmood, T., Yang, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Western+blot%3A+Technique%2C+theory%2C+and+trouble+shooting%5BTitle%5D)+AND+%22N+Am+J+Med+Sci%22%5BJournal%5D)">Western blot: Technique, theory, and trouble shooting.</a> N Am J Med Sci. 4 (9), 429-434 (2012).</li>
<li>Bojar, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+useful+guide+to+lectin+binding%3A+machine-learning+directed+annotation+of+57+unique+lectin+specificities%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Chem+Biol%22%5BJournal%5D)">A useful guide to lectin binding: machine-learning directed annotation of 57 unique lectin specificities.</a> ACS Chem Biol. 17 (11), 2993-3012 (2022).</li>
<li>Nagai-Okatani, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((2.0%3A+An+integrated+visualization+for+lectin+microarray-based+mouse+tissue+glycome+mapping+data+with+lectin+histochemistry%5BTitle%5D)+AND+%22J+Proteome+Res%22%5BJournal%5D)">2.0: An integrated visualization for lectin microarray-based mouse tissue glycome mapping data with lectin histochemistry.</a> J Proteome Res. 20 (4), 2069-2075 (2021).</li>
<li>Geisler, C., Jarvis, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effective+glycoanalysis+with+Maackia+amurensis+lectins+requires+a+clear+understanding+of+their+binding+specificities%5BTitle%5D)+AND+%22Glycobiology%22%5BJournal%5D)">Effective glycoanalysis with Maackia amurensis lectins requires a clear understanding of their binding specificities.</a> Glycobiology. 21 (8), 988-993 (2011).</li>
<li>Noro, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((N+-glycan+structures+of+Wisteria+floribunda+agglutinin-positive+Mac2+binding+protein+in+the+serum+of+patients+with+liver+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Glycobiology%22%5BJournal%5D)">N -glycan structures of Wisteria floribunda agglutinin-positive Mac2 binding protein in the serum of patients with liver fibrosis.</a> Glycobiology. 31 (10), 1268-1278 (2021).</li>
<li>Rawitch, A. B., Pollock, H. G., Yang, S. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thyroglobulin+glycosylation%3A+Location+and+nature+of+the+N-Linked+oligosaccharide+units+in+bovine+thyroglobulin%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Biochem+Biophys%22%5BJournal%5D)">Thyroglobulin glycosylation: Location and nature of the N-Linked oligosaccharide units in bovine thyroglobulin.</a> Arch Biochem Biophys. 300 (1), 271-279 (1993).</li>
<li>Dang, K., Zhang, W., Jiang, S., Lin, X., Qian, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+lectin+microarrays+for+biomarker+discovery%5BTitle%5D)+AND+%22Chemistry+Open%22%5BJournal%5D)">Application of lectin microarrays for biomarker discovery.</a> Chemistry Open. 9 (3), 285-300 (2020).</li>
<li>Chen, S., Qin, R., Mahal, L. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sweet+systems%3A+Technologies+for+glycomic+analysis+and+their+integration+into+systems+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Crit+Rev+Biochem+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Sweet systems: Technologies for glycomic analysis and their integration into systems biology.</a> Crit Rev Biochem Mol Biol. 56 (3), 301-320 (2021).</li>
<li>Dwivedi-Agnihotri, H., Srivastava, A., Shukla, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reversible+biotinylation+of+purified+proteins+for+measuring+protein-protein+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Enzymol%22%5BJournal%5D)">Reversible biotinylation of purified proteins for measuring protein-protein interactions.</a> Methods Enzymol. 633, 281-294 (2020).</li>
<li>Shimazaki, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Auto-lectin+dotcoding+by+two+octopuses%3A+Rapid+analysis+of+fluorescence-labeled+glycoproteins+by+an+8-channel+fully-automatic+bead+array+scanner+with+a+rolling-circle+detector%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Chem%22%5BJournal%5D)">Auto-lectin dotcoding by two octopuses: Rapid analysis of fluorescence-labeled glycoproteins by an 8-channel fully-automatic bead array scanner with a rolling-circle detector.</a> Anal Chem. 95 (32), 11868-11873 (2023).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>0,2 mL 8 tubos de PCR + tampa plana</td><td>FastGene</td><td>FG-0028FC/SE</td><td>Para dispensação e armazenamento de reagentes de marcação de biotina</td></tr><tr><td>2,0 mL SC Micro Tube protein LB</td><td>SARSTEDT AG&Co. KG</td><td>72.694.600</td><td>Para carregar amostras no software de análise LuBEA-VIII</td></tr><tr><td></td><td>SAS Institute Inc.</td><td>JMP 17</td><td></td></tr><tr><td>Ionizador Antiestático. 110 volts</td><td>Plas-Labs</td><td>800-AS/SPI</td><td>Use ao inserir contas na ponta BIST.</td></tr><tr><td>Pinça antiestática NK2A</td><td>RUBIS&nbsp;</td><td>9-5681-01</td><td>Use ao inserir contas na ponta BATIST.</td></tr><tr><td>Aparelho de medição de reação automatizado</td><td>Precision System Science Co., Ltd.</td><td>LuBEA</td><td>Todos os dados deste estudo foram obtidos usando LuBEA-VIII. Enquanto o LuBEA é comercializado, o LuBEA-VIII está atualmente em fase de desenvolvimento. O website para detalhes do produto LuBEA e LuBEA-VIII pode ser encontrado no seguinte URL (https://www.pss.co.jp/english/technology/apit/bist02.html).</td></tr><tr><td>Biotina-(AC5)2 Sulfo-Osu</td><td>Dojindo</td><td>341-06801</td><td>Como o</td></tr><tr><td>grânulo do espaçador do reagente BIST do biotinilation - V-11</td><td>Ciência Co. do sistema da precisão, Ltd.</td><td>F4938000</td><td>Diâmetro: 1 mm</td></tr><tr><td>BIST ponta e bainha</td><td>Precision System Science Co., Ltd.</td><td>F4930-000</td><td>Encha esta ponta vazia com miçangas.</td></tr><tr><td>Cloreto de cálcio</td><td>Wako</td><td>039-00475</td><td>Para preparar soluções tampão</td></tr><tr><td>Pode obter solução de sinal 2</td><td>TOYOBO</td><td>NKB-301</td><td>Este reagente de bloqueio é bom para este método</td></tr><tr><td>Concentradores de vácuo de bancada CentriVap</td><td>Labconco</td><td>7810010</td><td>Para seco de reagente de biotinilação. A substituição fornecida por outras empresas é possível.</td></tr><tr><td>Substrato de ECL Ocidental Clareza&nbsp;</td><td>Bio-Rad</td><td>1705060</td><td>Para medir as amostras por LuVEA VIII</td></tr><tr><td>Armadilha fria CentriVap série</td><td>Labconco</td><td>7460040</td><td>Para seco de reagente de biotinilação. A substituição fornecida por outras empresas é possível.</td></tr><tr><td>Glicina</td><td>Wako</td><td>077-00735</td><td>Para preparação de soluções tampão</td></tr><tr><td>Cloreto de manganês (II) Tetrahidratado</td><td>Wako</td><td>139-00722</td><td>Para preparação de soluções tampão</td></tr><tr><td>Referência Milli-Q</td><td>MERCK</td><td>ZIQ7000T0C</td><td>Como água deionizada para diluição de reagentes e tampões</td></tr><tr><td>PBS</td><td>Wako</td><td>162-19321</td><td>Para preparação de soluções tampão</td></tr><tr><td>Peroxidase Streptavidin</td><td>Jackson</td><td>016-030-084</td><td>Este anticorpo é bom para análise de GlycoBIST. É útil para a detecção do western blotting, embora as substituições possam ser fornecidas por outras empresas.</td></tr><tr>Fornecedor verificado - <td>Probe Bead</td><td>Precision System Science Co., Ltd.</td><td>FP4936000</td><td>Para preparar grânulos fixados por lectina. Veja Shimazaki, H. et al., Protocolos Atuais em Ciência de Proteínas, 2020 na seção de referência para obter detalhes.</td></tr><tr><td>Tubos Protein LoBind 1,5 mL</td><td>Eppendorf</td><td>0030108442</td><td>Use durante a preparação das amostras, como biotinilação.</td></tr><tr><td>Gel de sílica (para dessecante)</td><td>Kanto chemical</td><td>37039-02</td><td>Use durante o armazenamento da ponta GlycoBIST e do reagente de biotinilação seco.</td></tr><tr><td>Folha de remoção de eletricidade estática M</td><td>TRUSCO NAKAYAMA</td><td>SD5050</td><td>Use ao inserir contas na ponta BIST.</td></tr><tr><td>SV Cartucho II</td><td>Daido Indústria Química</td><td>ED041</td><td>Para medir as amostras por LuVEA VIII</td></tr><tr><td>Tabela Microcentrífuga-CAPSULEFUGE</td><td>TOMY</td><td>PMC-060</td><td>Para spin-down da mistura em cada processo</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Nacalai tesque</td><td>35501-15</td><td>Para preparar soluções tampão</td></tr></tbody></table>

avaliação rápida glicoqualitativa de proteínas recombinantes usando um sistema totalmente automatizado

Rapid Glyco-Qualitative Assessment of Recombinant Proteins Using a Fully Automated System

Avaliação rápida glicoqualitativa de proteínas recombinantes usando um sistema totalmente automatizado

Protein glycosylation, a critical post-translational modification, influences the stability, efficacy, and immunogenicity of recombinant proteins, ...

rapid-glyco-qualitative-assessment-recombinant-proteins-using-fully

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Bioquímica

Neste estudo, nós descrevemos um protocolo melhorado para um microarray anticorpo multiplexado de alto rendimento com o método de detecção de lectina que pode ser usado em perfil de glicosilação de proteínas específicas. Este protocolo apresenta novos reagentes fiáveis ​​e reduz significativamente o tempo, custo e requisitos de equipamento de laboratório, em comparação com o procedimento anterior.

Microarray de anticorpos quimicamente bloqueada para Multiplexed perfil de alta capacidade de glicosilação proteína específica em amostras complexas

Neste estudo, a expressão de uma proteína recombinante humana alvo em diferentes plataformas de produção foi comparada. Focamos em culturas tradicionais baseadas em fermentadores e em plantas, descrevendo a configuração de cada sistema e destacando, com base nos resultados relatados, os limites e vantagens inerentes a cada plataforma.

Uma análise comparativa de Expressão de proteínas recombinantes em Diferentes biofábricas: bactérias, células de insectos e Sistemas de Plantas

Apresentamos um método modular automatizado de alto rendimento para a identificação e caracterização de exopolissacarídeos microbianos em pequena escala. Este método combina uma pré-seleção rápida para analisar a quantidade total de polissacarídeos secretados com uma impressão digital detalhada de carboidratos para permitir a triagem rápida de cepas bacterianas recém-isoladas ou coleções inteiras de cepas.

Automated Modular High Throughput exopolissacï¿½ido Plataforma de Triagem Juntamente com Análise Carboidratos Fingerprint Highly Sensitive

Um protocolo de alto rendimento foi desenvolvido para purificação combinada de proteômica e glicômica e quantificação de LC-MS/MS no plasma. A análise de desamidação de motivos de glicosilação ligados a N foi específica para locais desglicosilados. A quantificação precisa de N-glicanos foi alcançada acoplando a separação de N-glicanos auxiliada por filtro à normalização da individualidade ao marcar com a estratégia de marcadores de hidrazida de glicano.

A Quantitative Glycomics e Proteomics Combinada estratégia de purificação

Este artigo descreve um método para preparar as amostras de tecido para análise MS cardiovasculares que permite (1) a análise da composição de proteínas de ECM, (2) a identificação de locais de glicosilação, e (3) a caracterização da composição de formas de glicano. Esta metodologia pode ser aplicada, com pequenas modificações, para o estudo da ECM em outros tecidos.

Glicoproteômica da matriz extracelular: um método de análise GLICOPï¿½TIDOS Intact Usando Espectrometria de Massa

Este trabalho mostra o potencial da tecnologia de matriz (PGA) glicano impressa para a análise de anticorpos anti-hidrato de carbono em pequenos animais em circulação.

Matriz de glicano impressa: Uma técnica sensível para a análise do repertório de anticorpos anti-hidrato de carbono em pequenos animais em circulação

É apresentado um protocolo detalhado para a operação simultânea de 48 culturas de pilha paralela em variadas condições em um sistema de microbioreactor. Processo de cultura de células, colheita e análise de título de anticorpos subsequentes são descritos.

Uso do elevado-Throughput Microbioreactor sistema automatizado para produção de IgG1 modelo em células CHO

Um protocolo detalhado para a purificação e a análise subseqüente de um anticorpo monoclonal do líquido de cultura de pilha colhido (HCCF) de microbioreactors automatizados foi descrito. O uso de análises para determinar os atributos críticos de qualidade (CQAs) e maximizar o volume de amostra limitado para extrair informações vitais também é apresentado.

Purificação e análise de um anticorpo monoclonal de células de ovário de hamster chinês usando um sistema de Microbioreator automatizado

A imunoglobulina G (IgG) N-glicano é caracterizada por meio de cromatografia de interação hidrofílica UPLC. Além disso, a estrutura do IgG N-glican é claramente separada. Apresentado aqui é uma introdução a este método experimental para que ele possa ser amplamente utilizado em ambientes de pesquisa.

Análise de imunoglobulina G N-Glycan por cromatografia líquida de ultra-desempenho

O padrão de glicosylation de um anticorpo determina seu desempenho clínico, assim persistem os esforços industriais e acadêmicos para controlar a glicosylation. Uma vez que as campanhas típicas de glicoengenia são tempo e trabalhoso, a geração de um protocolo rápido para caracterizar o impacto dos genes de glicosylação usando silenciamento transitório seria útil.

Glicoengenia de anticorpos rápidos em células de ovário de hamster chinês

Este protocolo descreve a produção da ribonuclease humana SLFN14 recombinante e sua análise estequiométrica por fotometria de massa.<br...

Produção Rápida de Ribonuclease Humana SLFN14 Recombinante e Análise Estequiométrica por Fotometria de Massa

Aprenda análise glicoqualitativa automatizada de proteínas recombinantes usando lectinas e microarranjos. Este método reduz o trabalho manual e acelera a descoberta de biomarcadores glicosilados para diagnóstico.

Avaliação rápida glicoqualitativa de proteínas recombinantes usando um sistema totalmente automatizado

Explorar mais vídeos