Isolamento da medula óssea de camundongos neonatais e preparação de macrófagos derivados da medula óssea
May 24th, 2024
Este protocolo descreve um método não enzimático e direto para isolar células da medula óssea de camundongos neonatais de 7 a 9 dias de idade e gerar macrófagos diferenciados usando um sobrenadante de células L929 como fonte de fator estimulador de colônias de granulócitos (M-CSF). Os macrófagos derivados da medula óssea foram posteriormente analisados quanto aos antígenos de superfície F4/80, CD206, CD11b e competência funcional.
O escopo deste estudo é entender algumas das limitações na resposta imune no início da vida à infecção bacteriana. Para isso, precisamos desenvolver e utilizar modelos de pesquisa específicos para neonatos. O isolamento da medula óssea de um filhote de um dia de sete anos é desafiador e não está bem estabelecido.
Os macrófagos derivados da medula óssea neonatal são sensíveis e propensos ao estresse quando comparados a outros BMDM. A técnica utilizada neste protocolo é simples e reprodutível. Este método orienta os usuários no isolamento da medula óssea de camundongos neonatais de sete a nove dias de idade sem o uso de nenhuma enzima.
Este estudo fornece uma estratégia padronizada para gerar macrófagos derivados da medula óssea de camundongos neonatais que podem ser usados para abordar questões sobre imunologia neonatal. Este método reprodutível fornece um modelo específico de idade para o progresso da pesquisa imunológica neonatal em muitas áreas de especialização.
Visão Geral
Este protocolo descreve um método não enzimático para isolar células da medula óssea de camundongos neonatais e gerar macrófagos diferenciados. O estudo concentra-se nos desafios de trabalhar com camundongos neonatais de 7-9 dias de idade e na sensibilidade de seus macrófagos derivados da medula óssea.
Componentes Principais do Estudo
Área da Ciência
- Neurociência
- Imunologia
- Biologia Celular
Fundo
- Compreender as respostas imunes iniciais a infecções bacterianas.
- Desafios no isolamento da medula óssea de camundongos neonatais.
- Macrófagos derivados da medula óssea neonatal são sensíveis e propensos ao estresse.
- Necessidade de técnicas reprodutíveis na pesquisa neonatal.
Propósito do Estudo
- Desenvolver um método confiável para isolar a medula óssea de camundongos neonatais.
- Gerar macrófagos funcionais para estudos de resposta imune.
- Aprimorar a compreensão das respostas imunes neonatais.
Métodos Utilizados
- Isolamento da medula óssea de camundongos neonatais de 7-9 dias.
- Técnica não enzimática para isolamento de células.
- Uso do supernadante de células L929 como fonte de M-CSF.
- Análise de antígenos de superfície e competência funcional dos macrófagos.
Principais Resultados
- Isolamento bem-sucedido de macrófagos derivados da medula óssea neonatal.
- Caracterização dos macrófagos usando os antígenos de superfície F4/80, CD206 e CD11b.
- Demonstração de competência funcional nos macrófagos gerados.
- Validação do método como simples e reprodutível.
Conclusões
- O protocolo fornece um método confiável para estudar respostas imunes neonatais.
- Os macrófagos isolados podem ser usados para mais pesquisas imunológicas.
- Esta técnica pode facilitar avanços em estudos de saúde neonatal.
Perguntas Frequentes
Chapters in this video
0:00
Introduction
1:10
Non‐Enzymatic Method for Isolating Neonatal Mouse Bone Marrow Cells
2:42
Differentiation of Neonatal Bone Marrow‐Derived Macrophages Using a Supernatant of L929 Cells
4:37
Assessing Phagocytic Function of Neonatal Bone Marrow‐Derived Macrophages Using a Fluorescent Bacterial Uptake Assay
