Name: Técnica de cultivo in vitro para estudo da dinâmica celular em escamas de peixe-zebra (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-01-10T12:10:00.000+00:00
Duration: 2 min 30 s
Description: Aprenda uma técnica de cultivo in vitro para estudar dinâmica celular em escamas de peixe-zebra. Este método permite visualizar núcleos fluorescentes e células apoptóticas, auxiliando pesquisadores a compreender processos de homeostase óssea.

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<meta charset="utf8"></head><body>Remoção de escamas de peixe-zebra para cultura e estudos de biologia óssea

<ol><li>Nusslein-Volhard, C., Dahm, R. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aNusslein-Volhard%2C+C+%22Zebrafish%22">Zebrafish</a>. , Oxford University Press. New York. (2002).</li>
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<li>Pasqualetti, S., Banfi, G., Mariotti, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteoblast+and+osteoclast+behavior+in+zebrafish+cultured+scales%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Tissue+Res%22%5BJournal%5D)">Osteoblast and osteoclast behavior in zebrafish cultured scales.</a> Cell Tissue Res. 350, 69-75 (2012).</li>
<li>Pasqualetti, S., Banfi, G., Mariotti, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+zebrafish+scale+as+model+to+study+the+bone+mineralization+process%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Histol%22%5BJournal%5D)">The zebrafish scale as model to study the bone mineralization process.</a> J Mol Histol. 43, 589-595 (2012).</li>
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<li>Iwasaki, M., Kuroda, J., Kawakami, K., Wada, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidermal+regulation+of+bone+morphogenesis+through+the+development+and+regeneration+of+osteoblasts+in+the+zebrafish+scale%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Epidermal regulation of bone morphogenesis through the development and regeneration of osteoblasts in the zebrafish scale.</a> Dev Biol. 437 (2), 105-119 (2018).</li>
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<li>Carnovali, M., Luzi, L., Banfi, G., Mariotti, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+hyperglycemia+affects+bone+metabolism+in+adult+zebrafish+scale+model%5BTitle%5D)+AND+%22Endocr%22%5BJournal%5D)">Chronic hyperglycemia affects bone metabolism in adult zebrafish scale model.</a> Endocr. 54, 808-817 (2016).</li>
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<li>Eletta, O. A. A., Ighalo, J. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+review+of+fish+scales+as+a+source+of+biosorbent+for+the+removal+of+pollutants+from+industrial+effluents%5BTitle%5D)+AND+%22J+Res+Inf+Civ+Eng%22%5BJournal%5D)">A review of fish scales as a source of biosorbent for the removal of pollutants from industrial effluents.</a> J Res Inf Civ Eng. 16 (1), 2479-2510 (2019).</li>
<li>Hill, A. J., Teraoka, H., Heideman, W., Peterson, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+as+a+model+vertebrate+for+investigating+chemical+toxicity%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol.+Sci%22%5BJournal%5D)">Zebrafish as a model vertebrate for investigating chemical toxicity.</a> Toxicol. Sci. 86 (1), 6-19 (2005).</li>
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<li>Hutchinson, J. J., Trueman, C. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stable+isotope+analyses+of+collagen+in+fish+scales%3A+Limitations+set+by+scale+architecture%5BTitle%5D)+AND+%22J+Fish+Biol%22%5BJournal%5D)">Stable isotope analyses of collagen in fish scales: Limitations set by scale architecture.</a> J Fish Biol. 69 (6), 1874-1880 (2006).</li>
<li>Kumari, S., Rath, P. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extraction+and+characterization+of+chitin+and+chitosan+from+%28Labeo+rohit%29+fish+scales%5BTitle%5D)+AND+%22Procedia+Mater+Sci%22%5BJournal%5D)">Extraction and characterization of chitin and chitosan from (Labeo rohit) fish scales.</a> Procedia Mater Sci. 6, 482-489 (2014).</li>
<li>Stepnowski, P., Ólafsson, G., Helgason, H., Jastorff, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preliminary+study+on+chemical+and+physical+principles+of+astaxanthin+sorption+to+fish+scales+towards+applicability+in+fisheries+waste+management%5BTitle%5D)+AND+%22Aquac%22%5BJournal%5D)">Preliminary study on chemical and physical principles of astaxanthin sorption to fish scales towards applicability in fisheries waste management.</a> Aquac. 232 (1-4), 293-303 (2004).</li>
<li>Ghods, S., Murcia, S., Ossa, E. A., Arola, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Designed+for+resistance+to+puncture%3A+The+dynamic+response+of+fish+scales%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mech+Behav+Biomed+Mater%22%5BJournal%5D)">Designed for resistance to puncture: The dynamic response of fish scales.</a> J Mech Behav Biomed Mater. 90, 451-459 (2019).</li>
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<li>Zhu, D., Zhang, C., Liu, P., Jawad, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+the+morphology%2C+structures+and+mechanical+properties+of+teleost+fish+scales+collected+from+New+Zealand%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Bionic+Eng%22%5BJournal%5D)">Comparison of the morphology, structures and mechanical properties of teleost fish scales collected from New Zealand.</a> J. Bionic Eng. 16, 328-336 (2019).</li>
<li>Witzmann, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphological+and+histological+changes+of+dermal+scales+during+the+fish-to-tetrapod+transition%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Zool%22%5BJournal%5D)">Morphological and histological changes of dermal scales during the fish-to-tetrapod transition.</a> Acta Zool. 92 (3), 281-302 (2011).</li>
<li>Ibañez, A. L., Cowx, I. G., O'Higgins, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Geometric+morphometric+analysis+of+fish+scales+for+identifying+genera%2C+species%2C+and+local+populations+within+the+Mugilidae%5BTitle%5D)+AND+%22Can+J+Fish+Aquat+Sci%22%5BJournal%5D)">Geometric morphometric analysis of fish scales for identifying genera, species, and local populations within the Mugilidae.</a> Can J Fish Aquat Sci. 64 (8), 1091-1100 (2007).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Tubos de 0,2 mL</td><td>n/a</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>37% HCl&nbsp;</td><td>EMD</td><td>HX0603-4</td><td>Para estabilização de pH e preparação de</td></tr><tr><td>PRS Lâmina côncava</td><td>n/a</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Vectashield</td><td>H-1200</td><td>Para visualização de núcleos celulares</td></tr><tr><td>Sal de diazônio (Fast Blue B)</td><td>Sigma</td><td>D9805</td><td>Para solução de substrato AP</td></tr><tr><td>Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) em pó&nbsp;</td><td>Sigma&nbsp;</td><td>D5523</td><td>Para meios de cultura em escala&nbsp;</td></tr><tr><td>3-aminobenzoato de etilo metanossulfonato (MS222)&nbsp;</td><td>Sigma&nbsp;</td><td>E10521</td><td>Para preparação de soro fetal bovino MS222 0,1%</td></tr><tr><td></td><td>Sigma&nbsp;</td><td>F4135</td><td>Para meios de cultura em escala</td></tr><tr><td>Microscópio de fluorescência</td><td>n/a</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>Ácido acético glacial&nbsp;</td><td>Fisher</td><td>A38 212</td><td>Para tampão de acetato</td></tr><tr><td>Glicerol</td><td>VWR</td><td>BDH1172-4LP</td><td>Para 80% de glicerol - balanças de armazenamento</td></tr><tr><td>HEPES&nbsp;</td><td>ThermoFisher&nbsp;</td><td>15630106</td><td>Para meios de cultura em escala</td></tr><tr><td>Placa quente</td><td>n/a</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>KCl&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>P217-10</td><td>Para preparação de PBS</td></tr><tr><td>Lysotracker</td><td>ThermoFisher</td><td>L7528</td><td>Para visualização de lisossomos&nbsp;</td></tr><tr><td>Ácido maleico</td><td>Sigma</td><td>M0375</td><td>Para tampão Tris-maleato&nbsp;</td></tr><tr><td>Micropipeta</td><td>n/a</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>N,N-dimetilformamida</td><td>Sigma</td><td>319937</td><td>Para solução de substrato AP</td></tr><tr><td>N,N-dimetilformamida&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>319937</td><td>Para Solução de Substrato Enzimático</td></tr><tr><td>Na2HPO4&nbsp;</td><td>EMD</td><td>SX0720-1</td><td>Para preparação de</td></tr><tr><td>PBS NaCl&nbsp;</td><td>Sigma&nbsp;</td><td>S9888</td><td>Para preparação de PBS</td></tr><tr><td>NaNO2</td><td>Sigma</td><td>S-2252</td><td>Para 4% NaNO2</td></tr><tr><td>NaOH&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>S5881</td><td>Para preparação de 4% de PFA</td></tr><tr><td>NaOH&nbsp;</td><td>Sigma&nbsp;</td><td>S5881</td><td>Para fixação de incrustações e estabilização de pH</td></tr><tr><td>Napthol-AS-TR-fosfato</td><td>Sigma</td><td>N6125</td><td>Para solução de substrato AP</td></tr><tr><td>Napthol-AS-TR-fosfato&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>N6125</td><td>Para Solução de Substrato Enzimático</td></tr><tr><td>Cloridrato de Pararosanilina&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>P3750</td><td>Para PRS</td></tr><tr><td>Penicilina-estreptomicina 5000 unidades de penicilina e 5mg de estreptomiocina/ml</td><td>ThermoFisher&nbsp;</td><td>15140122</td><td>Para meios de cultura em escala</td></tr><tr><td>Equipamento de proteção individual (EPI): luvas descartáveis de nitrilo, óculos de segurança/óculos de proteção e jaleco.</td><td>n/a</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>PFA&nbsp;</td><td>Sigma&nbsp;</td><td>P6148</td><td>Para fixação de escala</td></tr><tr><td>Acetato de sódio&nbsp;</td><td>Sigma&nbsp;</td><td>S2889</td><td>Para tampão de acetato</td></tr><tr><td>Microscópio composto padrão</td><td>n/a</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>Placa de agitação</td><td>n/a</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>Ácido tartárico</td><td>Sigma</td><td>T6521</td><td>Para tampão Tartarato</td></tr><tr><td>Base Tris</td><td>Roche</td><td>03 118 142 001</td><td>Para tampão Tris-Maleato&nbsp;</td></tr></tbody></table>

técnica de cultivo in vitro para estudo da dinâmica celular em escamas de peixe-zebra

In Vitro Culturing Technique for Studying Cellular Dynamics in Zebrafish Scales

Recentemente, esse protocolo de cultura em escala foi usado para estudar a homeostase óssea11. As escamas podem sobreviver no meio de cultura por pelo menos 2 dias. O número de células apoptóticas foi analisado em cada dia de cultivo, até um máximo de três dias, por meio da contagem das células marcadas. Esses resultados mostraram que as células apoptóticas aumentaram significativamente no terceiro dia de cultivo, indicando que o tempo de cultivo deve ser limitado a dois dias usando o método aqui ...

Técnica de cultivo in vitro para estudo da dinâmica celular em escamas de peixe-zebra

Zebrafish scales offer a variety of advantages for use in standard laboratories for teaching and research purposes. Scales are easily collected without ...

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Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Biologia do Desenvolvimento

Somitogenesis é um processo de desenvolvimento rítmico que espacialmente padrões do eixo do corpo de embriões vertebrados. Anteriormente, desenvolvemos linhas de zebrafish transgênicos que usam repórteres fluorescentes para observar os genes cíclicos que impulsionam esse processo. Aqui, a cultura dispersas células destas linhas e imagem suas oscilações ao longo do tempo in vitro.

Geração de Disperso Presomitic mesoderme culturas de células for Imaging da Segmentação Relógio Zebrafish em células individuais

Ceratócitos Zebrafish migrar em folhas de células a partir de explantes e proporcionam um modelo in vitro para o estudo dos mecanismos de migração celular colectiva no contexto da reparação epitelial. Estes protocolos detalhe uma maneira eficaz para estabelecer culturas de explantes primários para utilização em ensaios de migração de células coletivas.

Zebrafish queratinócitos explantes para estudar migração celular Collective e reepitelização na cicatrização de feridas cutâneas

Apresentamos um protocolo eficiente e fácil de usar para a preparação de culturas de células primárias de zebrafish embriões para transfeccao e imagens de células vivas, bem como um protocolo para preparar as células primárias do cérebro adulto zebrafish.

Cultura e transfecção de células primárias de Zebrafish

Aqui, apresentamos um protocolo de cultura 3D eficaz, fácil e rápido para a formação de esferoides de duas linhagens celulares de zebrafish (Danio rerio): ZEM2S (embrião) e ZFL (hepatócito normal).

Método de Cultura 3D de Esferoides de Linhagens Celulares de Zebrafish Embrionárias e Hepáticas

Este protocolo descreve a coleta e visualização de escamas elasmoides de zebrafish durante a regeneração in vivo . Além disso, é apresentado o cultivo ex vivo dessas cochonilhas por até 7 dias após a colheita.

Regeneração de Escamas de Zebrafish em Toto e Cultura Ex Vivo de Escamas

Neste estudo, descrevemos um método simples para realizar a análise do Corante Azul de Evans (EBD) em larvas de peixe-zebra.  Esta técnica é uma ferramenta poderosa para a caracterização da integridade do músculo esquelético e delineamento de modelos de distrofia muscular de peixe-zebra, e é um método valioso para o desenvolvimento de novas terapêuticas.

Análise de Zebrafish larvas Músculo Esquelético Integrity com Evans Blue Dye

Aqui, apresentamos um protocolo para usar mapas de destino e traçadores de linhagem para direcionar injeções em blastômeros individuais que dão origem ao rim de embriões de Xenopus laevis.

Técnica ao Target microinjeção para o desenvolvimento<em&gt; Xenopus</em&gt; Kidney

A mitose é crítica para todos os organismos vivos e os defeitos geralmente levam ao câncer e distúrbios do desenvolvimento. Usando este protocolo de imagem e o peixe-zebra como sistema modelo, os pesquisadores podem visualizar a mitose em um organismo vertebrado vivo e a infinidade de defeitos que surgem quando os processos mitóticos são defeituosos.

Observando mitótico Division e Dinâmica em um embrião de peixe-zebra ao vivo

Os protocolos descritos aqui permitem o estudo das propriedades elétricas de células excitáveis nas condições fisiológicas mais não invasivas, empregando embriões de peixe-zebra em um sistema in vivo, juntamente com um indicador de voltagem geneticamente codificado (GEVI) baseado em transferência de energia de ressonância de fluorescência (FRET) seletivamente expresso no tipo de célula de interesse.

Potencial de membrana de neurônio motor biossensível em embriões vivos de peixe-zebra

Este trabalho apresenta um novo modelo in vivo de lesão renal segmentar usando peixe zebra transgênico GFP renal. O modelo permite a indução da ablação direcionada de células epiteliais renais para mostrar os mecanismos celulares de lesão e reparação de néphron.

Abordagem precisa de ablação celular para modelagem de lesão renal aguda no desenvolvimento de peixe-zebra

Aprenda uma técnica de cultivo in vitro para estudar dinâmica celular em escamas de peixe-zebra. Este método permite visualizar núcleos fluorescentes e células apoptóticas, auxiliando pesquisadores a compreender processos de homeostase óssea.

Técnica de cultivo in vitro para estudo da dinâmica celular em escamas de peixe-zebra

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