14 de junho de 2024
Aqui, descrevemos um sistema de nucleofecção projetado para aumentar a eficiência da entrega de genes em células-tronco neurais expandidas (NSCs) isoladas da zona subventricular murina adulta. Os resultados demonstram que este método melhora significativamente a perturbação gênica em NSCs, superando a eficácia dos protocolos tradicionais de transfecção e aumentando a taxa de sobrevivência celular.
Nossa pesquisa está focada em estudar como a população de células-tronco neurais é regulada no cérebro de mamíferos adultos. Compreender os mecanismos moleculares intrínsecos e extrínsecos que regulam as células-tronco neurais dentro dos nichos neurogênicos é importante para compreender a biologia e desenvolver futuras aplicações terapêuticas potenciais. Para estudar o comportamento das células-tronco neurais, abordagens in vivo e in vitro são amplamente utilizadas.
As culturas de células-tronco neurais in vitro oferecem ambientes controlados e a possibilidade de manipular e monitorar facilmente essa população de células. Técnicas para preservação da expressão gênica in vitro são uma abordagem versátil para estudar os mecanismos moleculares que governam a biologia celular. No entanto, um método eficiente e reprodutível para superexpressar e derrubar genes candidatos em células-tronco neurais ainda é um desafio no campo.
Os métodos tradicionais de transfecção para entrega de genes provaram ser eficazes em células do sistema nervoso central. Além disso, esses métodos afetam a viabilidade e a funcionalidade celular. Assim, o refinamento de abordagens alternativas é crucial para manipular a expressão gênica em células-tronco neurais.
Com este protocolo, apresentamos um sistema de nucleofecção aprimorado que atinge alta eficiência de entrega de genes em culturas de células-tronco neurais da zona subventricular murina adulta, juntamente com taxas de sobrevivência superiores a 80%
Este estudo apresenta um sistema de nucleofecção inovador destinado a aumentar a eficiência de entrega de genes em células-tronco neurais (NSCs) derivadas da zona subventricular murina adulta. Os resultados demonstram melhorias significativas na perturbação gênica e nas taxas de sobrevivência celular em comparação com os métodos tradicionais de transfecção.
Efficient gene delivery and manipulation in adult neural stem cells (NSCs) is a critical bottleneck for neurobiology-focused drug discovery and target validation. The improved nucleofection protocol for NSCs from the adult murine subventricular zone enables robust gene perturbation with high cell viability, directly supporting mechanistic de-risking and predictive confidence in early discovery. This capability strengthens translational continuity for CNS target exploration and functional genomics in preclinical pipelines.
This nucleofection protocol integrates into the discovery-to-preclinical continuum, enabling gene function studies from early target validation through lead identification in CNS research.