Name: Amostragem de sangue e medição hormonal para determinar o estágio do ciclo ovariano em saguis (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-07-05T13:20:00.000+00:00
Duration: 6 min 17 s
Description: Aprenda a amostragem de sangue e medição hormonal para determinar o estágio do ciclo ovariano em saguis. Este método melhora o acesso venoso e a precisão na predição da ovulação.

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<meta charset="utf8"></head><body>Avaliação do ciclo ovariano em saguis por coleta de sangue e análise hormonal

<ol><li>Kholkute, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plasma+progesterone+levels+throughout+the+ovarian+cycle+of+the+common+marmoset+%28Callithrix+jacchus%29%5BTitle%5D)+AND+%22Primates%22%5BJournal%5D)">Plasma progesterone levels throughout the ovarian cycle of the common marmoset (Callithrix jacchus).</a> Primates. 25 (1), 123-126 (1984).</li>
<li>Harding, R. D., Hulme, M. J., Lunn, S. F., Henderson, C., Aitken, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plasma+progesterone+levels+throughout+the+ovarian+cycle+of+the+common+marmoset+%28Callithrix+jacchus%29%5BTitle%5D)+AND+%22J+Med+Primatol%22%5BJournal%5D)">Plasma progesterone levels throughout the ovarian cycle of the common marmoset (Callithrix jacchus).</a> J Med Primatol. 11 (1), 43-51 (1982).</li>
<li>Gilchrist, R. B., Wicherek, M., Heistermann, M., Nayudu, P. L., Hodges, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+follicle-stimulating+hormone+and+follicle+populations+during+the+ovarian+cycle+of+the+common+marmoset%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Reprod%22%5BJournal%5D)">Changes in follicle-stimulating hormone and follicle populations during the ovarian cycle of the common marmoset.</a> Biol Reprod. 64 (1), 127-135 (2001).</li>
<li>Gromoll, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+subclass+of+the+luteinizing+hormone%2Fchorionic+gonadotropin+receptor+lacking+exon+10+messenger+RNA+in+the+New+World+monkey+%28Platyrrhini%29+lineage%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Reprod%22%5BJournal%5D)">A new subclass of the luteinizing hormone/chorionic gonadotropin receptor lacking exon 10 messenger RNA in the New World monkey (Platyrrhini) lineage.</a> Biol Reprod. 69 (1), 75-80 (2003).</li>
<li>Müller, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chorionic+gonadotrophin+beta+subunit+mRNA+but+not+luteinising+hormone+beta+subunit+mRNA+is+expressed+in+the+pituitary+of+the+common+marmoset+%28Callithrix+jacchus%29%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Chorionic gonadotrophin beta subunit mRNA but not luteinising hormone beta subunit mRNA is expressed in the pituitary of the common marmoset (Callithrix jacchus).</a> J Mol Endocrinol. 32 (1), 115-128 (2004).</li>
<li>Pacchiarotti, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ovarian+stimulation+protocol+in+IVF%3A+an+up-to-date+review+of+the+literature%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Pharm+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Ovarian stimulation protocol in IVF: an up-to-date review of the literature.</a> Curr Pharm Biotechnol. 17 (4), 303-315 (2016).</li>
<li>Ezcurra, D., Humaidan, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+review+of+luteinising+hormone+and+human+chorionic+gonadotropin+when+used+in+assisted+reproductive+technology%5BTitle%5D)+AND+%22Reprod+Biol+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">A review of luteinising hormone and human chorionic gonadotropin when used in assisted reproductive technology.</a> Reprod Biol Endocrinol. 12, 95(2014).</li>
<li>Lopez-Gatius, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ovarian+response+to+prostaglandin+F%282alpha%29+in+lactating+dairy+cows%3A+A+clinical+update%5BTitle%5D)+AND+%22J+Reprod+Dev%22%5BJournal%5D)">Ovarian response to prostaglandin F(2alpha) in lactating dairy cows: A clinical update.</a> J Reprod Dev. 68 (2), 104-109 (2022).</li>
<li>Marini, R. P., Wachtman, L. M., Tardif, S. D., Mansfield, K., Fox, J. G. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMarini%2C+RP+%22The+Common+Marmoset+in+Captivity+and+Biomedical+Research%22">The Common Marmoset in Captivity and Biomedical Research</a>. , Elsevier Science. (2018).</li>
<li>Schultz-Darken, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sample+collection+and+restraint+techniques+used+for+common+marmosets+%28Callithrix+jacchus%29%5BTitle%5D)+AND+%22Comp+Med%22%5BJournal%5D)">Sample collection and restraint techniques used for common marmosets (Callithrix jacchus).</a> Comp Med. 53 (4), 360-363 (2003).</li>
<li>Hopper, J. Common marmosets. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHopper%2C+J+%22Handbook+of+Exotic+Pet%22">Handbook of Exotic Pet</a>. Kubik, M. , 27-42 (2020).</li>
<li>Harlow, C. R., Hearn, J. P., Hodges, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ovulation+in+the+marmoset+monkey%3A+endocrinology%2C+prediction+and+detection%5BTitle%5D)+AND+%22J+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Ovulation in the marmoset monkey: endocrinology, prediction and detection.</a> J Endocrinol. 103 (1), 17-24 (1984).</li>
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<li>Summers, P. M., Wennink, C. J., Hodges, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cloprostenol-induced+luteolysis+in+the+marmoset+monkey+%28Callithrix+jacchus%29%5BTitle%5D)+AND+%22J+Reprod+Fertil%22%5BJournal%5D)">Cloprostenol-induced luteolysis in the marmoset monkey (Callithrix jacchus).</a> J Reprod Fertil. 73 (1), 133-138 (1985).</li>
<li>Takahashi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Birth+of+healthy+offspring+following+ICSI+in+in+vitro-matured+common+marmoset+%28Callithrix+jacchus%29+oocytes%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Birth of healthy offspring following ICSI in in vitro-matured common marmoset (Callithrix jacchus) oocytes.</a> PLoS One. 9 (4), e95560(2014).</li>
<li>Tomioka, I., Takahashi, T., Shimada, A., Yoshioka, K., Sasaki, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Birth+of+common+marmoset+%28Callithrix+jacchus%29+offspring+derived+from+in+vitro-matured+oocytes+in+chemically+defined+medium%5BTitle%5D)+AND+%22Theriogenology%22%5BJournal%5D)">Birth of common marmoset (Callithrix jacchus) offspring derived from in vitro-matured oocytes in chemically defined medium.</a> Theriogenology. 78 (7), 1487-1493 (2012).</li>
<li>Abe, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+marmoset+genome+engineering+by+autologous+embryo+transfer+and+CRISPR%2FCas9+technology%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Efficient marmoset genome engineering by autologous embryo transfer and CRISPR/Cas9 technology.</a> Sci Rep. 11 (1), 20234(2021).</li>
<li>Summers, P. M., Shephard, A. M., Taylor, C. T., Hearn, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+cryopreservation+and+transfer+on+embryonic+development+in+the+common+marmoset+monkey%2C+Callithrix+jacchus%5BTitle%5D)+AND+%22J+Reprod+Fertil%22%5BJournal%5D)">The effects of cryopreservation and transfer on embryonic development in the common marmoset monkey, Callithrix jacchus.</a> J Reprod Fertil. 79 (1), 241-250 (1987).</li>
<li>Thomson, J. A., Kalishman, J., Hearn, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nonsurgical+uterine+stage+preimplantation+embryo+collection+from+the+common+marmoset%5BTitle%5D)+AND+%22J+Med+Primatol%22%5BJournal%5D)">Nonsurgical uterine stage preimplantation embryo collection from the common marmoset.</a> J Med Primatol. 23 (6), 333-336 (1994).</li>
<li>Hanazawa, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Minimally+invasive+transabdominal+collection+of+preimplantation+embryos+from+the+common+marmoset+monkey+%28Callithrix+jacchus%29%5BTitle%5D)+AND+%22Theriogenology%22%5BJournal%5D)">Minimally invasive transabdominal collection of preimplantation embryos from the common marmoset monkey (Callithrix jacchus).</a> Theriogenology. 78 (4), 811-816 (2012).</li>
<li>Ishibashi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+embryo+transfer+in+the+common+marmoset+monkey+%28Callithrix+jacchus%29+with+a+reduced+transfer+volume%3A+a+non-surgical+approach+with+cryopreserved+late-stage+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Reprod%22%5BJournal%5D)">Efficient embryo transfer in the common marmoset monkey (Callithrix jacchus) with a reduced transfer volume: a non-surgical approach with cryopreserved late-stage embryos.</a> Biol Reprod. 88 (5), 115(2013).</li>
<li>Kishimoto, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+novel+common+marmoset+embryonic+stem+cell+lines+under+various+conditions%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Establishment of novel common marmoset embryonic stem cell lines under various conditions.</a> Stem Cell Res. 53, 102252(2021).</li>
<li>Diehl, K. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+good+practice+guide+to+the+administration+of+substances+and+removal+of+blood%2C+including+routes+and+volumes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Toxicol%22%5BJournal%5D)">A good practice guide to the administration of substances and removal of blood, including routes and volumes.</a> J Appl Toxicol. 21 (1), 15-23 (2001).</li>
<li>Daskalaki, M., Drummer, C., Behr, R., Heistermann, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+alfaxalone+for+short-term+anesthesia+can+confound+serum+progesterone+measurements+in+the+common+marmoset%3A+a+case+report%5BTitle%5D)+AND+%22Primate+Biol%22%5BJournal%5D)">The use of alfaxalone for short-term anesthesia can confound serum progesterone measurements in the common marmoset: a case report.</a> Primate Biol. 9 (2), 23-28 (2022).</li>
<li>Hodges, J. K., Cottingham, P. G., Summers, P. M., Liang, Y. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Controlled+ovulation+in+the+marmoset+monkey+%28Callithrix+jacchus%29+with+human+chorionic+gonadotropin+following+prostaglandin-induced+luteal+regression%5BTitle%5D)+AND+%22Fertil+Steril%22%5BJournal%5D)">Controlled ovulation in the marmoset monkey (Callithrix jacchus) with human chorionic gonadotropin following prostaglandin-induced luteal regression.</a> Fertil Steril. 48 (2), 299-305 (1987).</li>
<li>Barrett, J., Abbott, D. H., George, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extension+of+reproductive+suppression+by+pheromonal+cues+in+subordinate+female+marmoset+monkeys%2C+Callithrix+jacchus%5BTitle%5D)+AND+%22J+Reprod+Fertil%22%5BJournal%5D)">Extension of reproductive suppression by pheromonal cues in subordinate female marmoset monkeys, Callithrix jacchus.</a> J Reprod Fertil. 90 (2), 411-418 (1990).</li>
<li>Barrett, J., Abbott, D. H., George, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sensory+cues+and+the+suppression+of+reproduction+in+subordinate+female+marmoset+monkeys%2C+Callithrix+jacchus%5BTitle%5D)+AND+%22J+Reprod+Fertil%22%5BJournal%5D)">Sensory cues and the suppression of reproduction in subordinate female marmoset monkeys, Callithrix jacchus.</a> J Reprod Fertil. 97 (1), 301-310 (1993).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>AIA-360</td><td>Tosoh Corporation</td><td>0019945</td><td>Medição hormonal (P4 / E2)</td></tr> <tr><td>AIA-PACK DILUENTE CONCENTRADO</td><td>Tosoh Corporation</td><td>0020956</td><td>Medição hormonal (P4 / E2)</td></tr> <tr><td>AIA-PACK SUBSTRATE SET II</td><td>Tosoh Corporation</td><td>0020968</td><td>Medição hormonal (P4 / E2)</td></tr> <tr><td>AIA-PACK WASH CONCENTRATE</td><td>Tosoh Corporation</td><td>0020955</td><td>Medição hormonal (P4 / E2)</td></tr> <tr><td>CMS-1</td><td>CLEA Japão</td><td></td><td>Sagui alimento</td></tr><tr><td>Estrumate</td><td>MSD Saúde</td><td></td> Animal <td>PGF2alpha análogo (cloprostenol)</td></tr> <tr><td>Gonal-f Injeção subcutânea 150</td><td>Merck Biopharma Co., Ltd.</td><td></td><td>FSH</td></tr><tr><td>Gonatropin para injeção intramuscular 1000</td><td>ASKA Pharmaceutical Co., Ltd.</td><td>872413</td><td></td></tr><tr><td>solução de injeção de heparina sódica hCG 5.000 unidades / 5 mL</td><td>Mochida Pharmaceutical Co., Ltd.</td><td>224122458</td><td></td></tr><tr><td>Kit de teste imunocromatográfico de coleta de sangue para detecção de gonadotrofina coriônica de sagui comum (verificador duplo)</td><td>CLEA Japan, Inc.</td><td></td><td>Determinando o nível de CG</td></tr><tr><td>Iluminação de microscópio de braço duplo de baixo perfil LPF-SD</td><td>SHIOKAZE GIKEN</td><td></td><td>Lâmpada de mesa para coleta de sangue</td></tr><tr><td>Dispositivo de restrição de coleta de sangue Marmoset</td><td>JIC Japão</td><td>JM-1006</td><td>Coleta de sangue http://www.jic-japan.jp/prd/marmoset/prd016.html e-mail:</td></tr><tr><td>vi@jic-japan.jp Metacam 0,05%</td> <td>Boehringer Ingelheim Animal Health Japan Co., Ltd.</td><td></td><td>Copo de amostra de tratamento de hematoma</td></tr><tr><td>, 3 mL, PS, para Tosoh 360 e AIA-600 II, 1000/saco</td><td>Globe Scientific</td><td>110913</td><td>Medição hormonal (P4/E2)</td></tr><tr><td>ST AIA-PACK iE2</td><td>Tosoh Corporation</td><td>0025224</td><td>Medição hormonal (P4/E2)</td></tr><tr><td>ST AIA-PACK iE2 CALIBRATOR SET</td><td>Tosoh Corporation</td><td>0025324</td><td>Medição hormonal (P4/E2)</td></tr><tr><td>ST AIA-PACK iE2 SAMPLE DILUIÇÃO</td><td>Tosoh Corporation</td><td>0025524</td><td>Medição hormonal (P4/E2)</td></tr><tr><td>ST AIA-PACK PROGIII</td><td>Tosoh Corporation</td><td>0025240</td><td>Medição hormonal (P4/E2)</td></tr><tr><td>ST AIA-PACK PROGIII CALIBRADOR SET</td><td>Tosoh Corporation</td><td>0025340</td><td>Medição hormonal (P4/E2)</td></tr><tr><td>ST AIA-PACK PROGIII SAMPLE DILUTING SOLUTION</td><td>Tosoh Corporation</td><td>&nbsp; 0025540</td><td>Medição hormonal (P4/E2)</td></tr><tr><td>Seringa com agulha de 25 G (0,50 x 25 mm)</td><td>TERUMO</td><td>SS-01T2525</td><td>Colheita de sangue</td></tr><tr><td>Tensolvet 5.000 I.E. gel.</td><td>Dechra Pharmaceuticals</td><td>14033492</td><td>Tratamento de hematoma</td></tr><tr><td>TOSOH MULTI-CONTROL SET</td><td>Tosoh Corporation</td><td>0015965</td><td>Medição hormonal (P4/E2)</td></tr></tbody></table>

amostragem de sangue e medição hormonal para determinar o estágio do ciclo ovariano em saguis

Blood Sampling and Hormone Measurement for Determining the Stage in the Ovarian Cycle in Marmosets

Os detalhes relacionados aos animais utilizados neste estudo estão listados na Tabela 1.
Análise anatômica da veia femoral As análises anatômicas da veia femoral foram realizadas em um sagui-comum macho de 2 anos de idade (I 7713M) submetido à eutanásia. As veias e artérias femorais estão localizadas no triângulo femoral. O triângulo femoral é formado nos limites entre a parede abdominal e os músculos da coxa (Figura 1B-D). Na base da coxa, uma grande veia atravessa o centro do triângulo invertido e uma artéria corre paralelamente fora da veia. Na região inferior, as veias e artérias tornam-se mais finas e se sobrepõem, com as artérias posicionadas no topo das veias (Figura 1D).
Para a coleta de sangue, a veia deve ser direcionada, pois uma lesão arterial pode causar hematoma da artéria femoral, que pode levar ao choque cardiovascular quando a hemorragia é grave13. Embora o sangue possa ser retirado de qualquer parte da veia do triângulo e de sua área distal, a punção venosa do local proximal do triângulo femoral é recomendada devido ao grande tamanho da veia e sua aparente pouca sobreposição com a artéria. Além disso, a veia no local proximal é superficial, permitindo fácil localização com agulha. Por pulsar, a artéria no triângulo femoral às vezes é identificada visualmente ou por palpação, e a veia corre medial a ela. Assim, a observação da pulsação arterial ajuda a predizer a localização da veia.
Além disso, uma coloração azul indicativa da veia é geralmente observada sob a pele no topo do triângulo (Figura 1B, C). No entanto, os gânglios linfáticos no triângulo geralmente estão localizados perto da veia e apresentam uma cor azul escura, portanto, sua aparência é semelhante. Felizmente, eles podem ser distinguidos por sua mobilidade: a veia é estacionária e os gânglios linfáticos são móveis. Assim, a pulsação da artéria e a cor azul da veia são duas pistas principais usadas para localizar a veia, embora possa ser necessário raspar o cabelo para visualizá-las.
Determinação do estágio do ciclo ovariano Os níveis de P4 e E2 foram monitorados em seis saguis fêmeas (variando de 1 a 3 anos de idade) para investigar a duração das fases folicular e lútea. Os resultados mostraram uma duração média de 11,58 dias (n = 6 de quatro saguis) e 16,8 dias (n = 5 de três saguis) para as fases folicular e lútea, respectivamente (Tabela 2). A seguir, a dinâmica P4 e E2 de um (I6751F, 3 anos de idade) dos seis saguis é descrita em detalhes. Amostras de sangue e dosagens hormonais neste animal foram realizadas a cada poucos dias durante 38 dias (Tabela 3).
Fase lútea (dias 1-10) O dia de início da medição foi definido como dia 1. Com base no nível de P4 (21 ng/mL), o animal provavelmente estava na fase lútea. Um alto nível de P4 foi observado dos dias 1 a 10 (≥21 ng/mL), sugerindo a fase lútea. No dia 12, caiu drasticamente para 4 ng/mL. Essa diminuição significativa indicou a transição da fase lútea para a folicular. Uma diminuição no nível de E2 do dia 10 (241 ng/mL) para o 12 (189 ng/mL) também apoiou essa transição.
Fase folicular (dias 12-22) Após a transição para a fase folicular, o nível de P4 permaneceu baixo (4-6 ng/mL) até o dia 19 e depois aumentou ligeiramente do dia 19 ao 24 (dia 19, 6 ng/mL; dia 22, 8 ng/mL; dia 24, 9 ng/mL). Em contraste, o nível de E2 aumentou significativamente do dia 19 (94 ng/mL) para 22 (322 ng/mL) e depois diminuiu do dia 22 para o 24 (158 ng/mL). Com base no aumento dos níveis de P4 e diminuição dos níveis de E2, a ovulação foi prevista para ocorrer entre os dias 22 e 24, passando da fase folicular para a lútea.
Fase lútea (dias 24-36) Após a ovulação, o nível de P4 permaneceu alto até o dia 36 e depois caiu para 3 ng/mL no dia 38. Assim, é provável que a transição da fase lútea para a folicular tenha ocorrido entre os dias 36-38. Consistente com essa transição, o nível de E2 diminuiu durante esse período (dia 36, 2517 ng / mL; dia 38, 73 ng / mL).
Previsão e determinação do momento da ovulação
Para examinar a relação entre o nível de CG na urina e a data de ovulação, sete saguis (nº 1-7) foram preparados. O cloprostenol foi injetado para redefinir o ciclo ovulatório (dia 0). Em seguida, foi realizada a monitorização dos níveis sanguíneos de P4/E2 e do CG urinário a partir do 7º dia. A urina foi coletada imediatamente após o acendimento. A coleta de sangue foi realizada essencialmente no período da manhã. Supôs-se que a ovulação ocorre quando o nível de E2 caiu em grande parte em comparação com o dia anterior, conforme relatado17. Nesse dia, a ruptura folicular foi de fato observada na superfície dos ovários, e a presença de zigotos/oócitos nos ovidutos (Tabela 4).
O GC foi detectado pela primeira vez durante os dias 7 a 11 (dia 7, N = 1; dia 8, N = 2; dia 9, N = 1; dia 10, N = 2; dia 11, N = 1) (Tabela 4). A grande queda nos níveis de E2 (indicação da ovulação) foi observada 0-3 dias após o primeiro sinal do GC. A duração desde a primeira detecção de CG até a diminuição de E2 pareceu ser grande quando a primeira detecção de CG foi mais cedo (Figura 3A). Por exemplo, um animal (nº 1) apresentou queda no sinal E2 3 dias após a primeira detecção de CG no dia 7 (Tabela 4). Em contraste, a co-ocorrência da primeira detecção de CG e a queda do sinal E2 foi observada em um animal (nº 2) no dia 10. Assim, embora a primeira detecção de CG e a ovulação tenham sido observadas no mesmo dia em um dos cinco animais, a ovulação ocorreu poucos dias após a primeira detecção de CG.
O kit de teste imunocromatográfico para saguis CG foi projetado para usar urina para testes. O exame do nível de CG geralmente acompanha a determinação dos níveis de P4/E2 usando plasma sanguíneo. Será útil se o plasma sanguíneo, em vez da urina, puder ser usado para o teste de CG. Para testar isso, o plasma sanguíneo que sobrou após a medição do nível de P4 / E2 nos experimentos acima foi examinado. O plasma sanguíneo e a urina foram coletados dos quatro animais em qualquer um dos dias dos experimentos acima (os dias de exame foram indicados por asteriscos duplos [**] na Tabela 4). Usando a urina, dois dos quatro animais apresentaram resultados positivos (escores 5 e 3) e os outros dois apresentaram resultados negativos (escore 1). O plasma sanguíneo mostrou essencialmente os mesmos resultados que a urina (Figura 3B). O sinal mais forte foi obtido usando plasma sanguíneo. Portanto, ao usar plasma sanguíneo, o julgamento deve ser feito antes de 10 minutos, que é definido para a urina.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66691/66691fig01.jpg"> Figura 1: Coleta de sangue de saguis. (A) Um limitador é usado para coleta de sangue. (B) Parte superior da coxa do sagui. (C) Triângulo femoral e vasos sanguíneos. A artéria femoral no triângulo é frequentemente visível e mostra pulsação. A cor azul da veia femoral às vezes é visível na área proximal do triângulo (indicada como local da flebotomia). Os gânglios linfáticos também apresentam uma cor azul. No entanto, os gânglios linfáticos são móveis, pois os gânglios linfáticos estão ligados à pele. (D) Visão anatômica da coxa do animal sacrificado. A artéria, a veia e o local da flebotomia são indicados. O mesmo animal é mostrado em B-D. (E) Coleta de sangue usando um limitador. A posição de retenção das pernas do sagui e o sangue sendo coletado são mostrados. (F) Coleta de urina de um sagui. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66691/66691fig01large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66691/66691fig02.jpg"> Figura 2: Padrões típicos dos níveis de P4, E2 e CG durante o ciclo ovariano em saguis. Os pontos de tempo das injeções de FSH, hCG e PGF2α são indicados. As linhas tracejadas mostram o padrão hormonal esperado após a injeção de PGF2α. Abreviaturas: P4 = progesterona; E2 = estradiol; GC = gonadotrofina coriônica; FSH = hormônio folículo-estimulante; hCG = gonadotrofina coriônica humana; PGF2α = prostaglandina F2α. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66691/66691fig02large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66691/66691fig03.jpg"> Figura 3: Determinação do nível de CG para predizer a ocorrência de ovulação. (A) A possível relação entre o primeiro dia de detecção do CG (escore &gt; 1) e a duração até a ovulação (queda de E2). (B) O plasma sanguíneo pode ser usado para testes imunocromatográficos de CG. Um resultado representativo de cada pontuação (topo). O escore foi determinado 10 min após o carregamento da amostra. A pontuação 2 não representa nenhuma banda em 5 minutos, mas a aparência de uma banda em 10 minutos. A coleta de sangue foi realizada logo após a coleta da urina. Quatro saguis (nº 1, 2, 3, 5 na Tabela S4) foram examinados. As amostras usadas aqui são indicadas como asteriscos duplos na Tabela 4. O plasma sanguíneo foi diluído a 50% pelo tampão de diluição usado para a medição de E2. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66691/66691fig03large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
Tabela 1: Animais utilizados neste estudo. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66691/66691_Table%201v2.xlsx" target="_blank">Clique aqui para baixar esta tabela.</a>
Tabela 2: Duração das fases folicular e lútea. A fase foi determinada com base no nível de P4 (fase folicular P4 ≤ 8, fase lútea P4 &gt; 8). Quando a mudança de fase foi observada entre as medições, o ponto médio entre as datas de medição foi determinado como o ponto de mudança. A duração entre os dois pontos de mudança foi considerada como fases folicular ou lútea. Para garantir a medição da duração de uma única fase, os dados com intervalo longo (≥7 dias) ou duas vezes de intervalos de ≥6 dias na mesma fase, inclusive quando abrangendo as duas fases, não foram utilizados para as análises. Somente quando duas medições foram realizadas na mesma fase, os dados foram empregados. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66691/66691_240320_Table2_rev.zip" target="_blank">Clique aqui para baixar esta tabela.</a>
Tabela 3: Resultados das medições de P4 e E2 por 38 dias em um sagui.<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66691/66691_240320_Table3_rev.zip" target="_blank">Clique aqui para baixar esta tabela.</a>
Tabela 4: Determinação e previsão dos dias ovulatórios. Os traços de ovulação foram considerados presentes se locais de sangramento ou locais de ruptura fossem observados nos ovários. Oócito/zigoto indica os estágios do oócito/zigoto obtidos dos ovidutos no dia da queda de E2. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66691/66691_Table%204_revv2.xlsx" target="_blank">Clique aqui para baixar esta tabela.</a>

Amostragem de sangue e medição hormonal para determinar o estágio do ciclo ovariano em saguis

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Research

JoVE Journal

Biology

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