Name: Diagnóstico post-mortem de raiva em animais pelo ensaio de reação em cadeia da polimerase com transcrição reversa em tempo real LN34 atualizado e multiplexado (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-05-02T12:35:00.000+00:00
Duration: 9 min 54 s
Description: Aprenda o ensaio LN34 RT-PCR multiplex para diagnóstico post-mortem de raiva em animais. Este protocolo validado melhora a precisão diagnóstica e apoia esforços de prevenção da doença.

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<ol><li>Meechan, P. J., Potts, J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMeechan%2C+PJ+%22Biosafety+in+Microbiological+and+Biomedical+Laboratories%22">Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories</a>. , Centers for Disease Control and Prevention. (2020).</li>
<li>Terrestrial Manual 2023. , World Organization for Animal Health. At
 <a target="_blank" href="https://www.woah.org/en/what-we-do/standards/codes-and-manuals">https://www.woah.org/en/what-we-do/standards/codes-and-manuals</a> (2023).</li>
<li>Laboratory Techniques in Rabies. Volume 1, World Health Organization. At
 <a target="_blank" href="https://iris.who.int/handle/10665/310836">https://iris.who.int/handle/10665/310836</a> (2018).</li>
<li>Laboratory Techniques in Rabies. Volume 2, World Health Organization. At
 <a target="_blank" href="https://iris.who.int/bitstream/handle/10665/310837/9789241515306-eng.pdf?ua=1">https://iris.who.int/bitstream/handle/10665/310837/9789241515306-eng.pdf?ua=1</a> (2019).</li>
<li>Genevie, R., et al. Protocol for postmortem diagnosis of rabies in animals by direct fluorescent antibody testing: A minimum standard for rabies diagnosis in the United States. , At
 <a target="_blank" href="https://www.cdc.gov/rabies/pdf/RabiesDFASPv2.pdf">https://www.cdc.gov/rabies/pdf/RabiesDFASPv2.pdf</a> (2003).</li>
<li>World Health Organization. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22WHO+Expert+Consultation+on+Rabies%3A+Third+Report%22">WHO Expert Consultation on Rabies: Third Report</a>. , World Health Organization. Geneva. (2018).</li>
<li>Gigante, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multi-site+evaluation+of+the+LN34+pan-lyssavirus+real-time+RT-PCR+assay+for+postmortem+rabies+diagnostics%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Multi-site evaluation of the LN34 pan-lyssavirus real-time RT-PCR assay for postmortem rabies diagnostics.</a> PLoS One. 13 (5), e0197074(2018).</li>
<li>Wadhwa, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Pan-Lyssavirus+Taqman+Real-Time+RT-PCR+assay+for+the+detection+of+highly+variable+rabies+virus+and+other+lyssaviruses%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Negl+Trop+Dis%22%5BJournal%5D)">A Pan-Lyssavirus Taqman Real-Time RT-PCR assay for the detection of highly variable rabies virus and other lyssaviruses.</a> PLoS Negl Trop Dis. 11 (1), e0005258(2017).</li>
<li>Gigante, C. M., Wicker, V., Wilkins, K., Seiders, M., Zhao, H., Patel, P., Orciari, L., Condori, R. E., Dettinger, L., Yager, P., Xia, D., Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+pan-lyssavirus+LN34+assay+for+streamlined+rabies+diagnostics+by+real-time+RT-PCR%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+Virological+Methods%22%5BJournal%5D)">Optimization of pan-lyssavirus LN34 assay for streamlined rabies diagnostics by real-time RT-PCR.</a> Journal Virological Methods. , In press (2024).</li>
<li>Rao, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+a+modified+preexposure+prophylaxis+vaccination+schedule+to+prevent+human+rabies%3A+recommendations+of+the+advisory+committee+on+immunization+practices-United+States%2C+2022%5BTitle%5D)+AND+%22Morbidity+and+Mortality+Weekly+Report%22%5BJournal%5D)">Use of a modified preexposure prophylaxis vaccination schedule to prevent human rabies: recommendations of the advisory committee on immunization practices-United States, 2022.</a> Morbidity and Mortality Weekly Report. 71 (18), 619(2022).</li>
<li>Condori, R. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+the+LN34+Pan-Lyssavirus+Real-Time+RT-PCR+assay+for+rabies+diagnosis+and+rapid+genetic+typing+from+formalin-fixed+human+brain+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Viruses%22%5BJournal%5D)">Using the LN34 Pan-Lyssavirus Real-Time RT-PCR assay for rabies diagnosis and rapid genetic typing from formalin-fixed human brain tissue.</a> Viruses. 12 (1), 120(2020).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>7500 Rápido</td><td>Biossistemas Aplicados</td><td>N/A</td><td>Não substitua sem validação</td></tr><tr><td>7500 Fast Dx&nbsp;</td><td>Biossistemas Aplicados</td><td>N/A</td><td>Não substitua sem validação</td></tr><tr><td>ABI VIIA 7</td><td>Biossistemas Aplicados</td><td>N/A</td><td>Não substitua sem validação</td></tr><tr><td>Kit RT-PCR One-Step AgPath-ID &nbsp;</td><td>ThermoFisher Scientific&nbsp;</td><td>AM1005</td><td>Não substitua sem validação</td></tr><tr><td>Beadbug6</td><td>Benchmark Scientific</td><td>D1036</td><td></td></tr><tr><td>Kit Direct-zol RNA MiniPrep &nbsp;</td><td>Zymo Research</td><td>R2052</td><td></td></tr><tr><td>Contas verdes MagNA Lyser&nbsp;</td><td>Roche</td><td>3358941001</td><td></td></tr><tr><td>Microcentrífuga</td><td>Eppendorf&nbsp;</td><td>5425 R</td><td></td></tr><tr><td>Placas de Reação Ópticas de 96 Poços</td><td>ThermoFisher Scientific&nbsp;</td><td>4346907</td><td></td></tr><tr><td>Capas adesivas ópticas</td><td>ThermoFisher Scientific&nbsp;</td><td>4311971</td><td>Alternativa: caps</td></tr><tr><td>Aplicadores com ponta de fibra de poliéster e swap;</td><td>Swab de aplicação com ponta de fibra de poliéster BD BBL</td><td>220690</td><td></td></tr><tr><td>QuantStudio 6Flex</td><td>Biossistemas Aplicados</td><td>4485691</td><td>Não substitua sem validação</td></tr><tr><td>Desinfetante de amônio quaternário (1:256)</td><td>LYSOL</td><td>WBB56939</td><td>Não substitua sem validação</td></tr><tr><td>RNase AWAY</td><td>ThermoFisher Scientific&nbsp;</td><td>7002PK</td><td></td></tr><tr><td>RNaseZap</td><td>ThermoFisher Scientific&nbsp;</td><td>AM9780</td><td></td></tr><tr><td>Bisturi descartável, um bisturi com mecanismo de segurança &nbsp;</td><td>Integra Miltex&nbsp;</td><td>4-510</td><td></td></tr><tr><td>Tubos estéreis de microcentrífuga de polipropileno (1,5 mL), livres de nuclease</td><td>Sarstedt</td><td>72.692.405</td><td></td></tr><tr><td>Tubos estéreis de microcentrífuga de polipropileno (2 mL), livres de nuclease</td><td>Sarstedt</td><td>72.694.600</td><td></td></tr><tr><td>Reagente Trizol</td><td>ThermoFisher Scientific&nbsp;</td><td>15596026</td><td>Não substitua sem validação</td></tr></tbody></table>

diagnóstico post-mortem de raiva em animais pelo ensaio de reação em cadeia da polimerase com transcrição reversa em tempo real ln34 atualizado e multiplexado

Postmortem Diagnosis of Rabies in Animals by the Updated, Multiplexed LN34 Real-Time Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction Assay

Diagnóstico post-mortem de raiva em animais pelo ensaio de reação em cadeia da polimerase com transcrição reversa em tempo real LN34 atualizado e multiplexado

Rabies is a fatal zoonotic disease caused by Lyssavirus rabies (RABV) and related negative strand RNA viruses from the Lyssavirus genus (family ...

postmortem-diagnosis-rabies-animals-updated-multiplexed-ln34-real

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

O teste imunoistoquímico rápido direto (DRIT) oferece uma organização mundial para a saúde animal e organização mundial da saúde (OIE/OMS) reconhecida alternativa ao teste de anticorpo fluorescente direto (DFA) para o diagnóstico de raiva. Este teste permite aplicações baseadas em campo que podem ser executadas em aproximadamente 1 h em cima das impressões do cérebro usando a microscopia de luz.

Vigilância aumentada da raiva usando um teste Imunoistoquímico rápido direto

Um Pan-lyssavirus Nested transcrição reversa da polimerase em cadeia foi desenvolvida para detectar especificamente todos os lissavírus conhecidos. A validação utilizando amostras cerebrais da raiva de diferentes espécies animais mostrou que este método tem sensibilidade e especificidade equivalentes ao teste padrão-ouro de anticorpos fluorescentes e pode ser utilizado para o diagnóstico rotineiro da raiva.

Avaliação de uma reação em cadeia da polimerase de transcrição reversa universal aninhada para a detecção de lissavírus

O objetivo deste protocolo é demonstrar técnicas de necropsia seguras em animais pequenos e grandes para obter amostras de tecido satisfatórias para o teste de raiva.

Técnicas de necropsia da raiva em animais grandes e pequenos

Este RT-PCR tempo real usando a tintura intercalando de dsDNA é apropriado diagnosticar infecções do lyssavirus. O método começa com o RNA extraído da raiva suspeita de amostras ante mortem ou post-mortem, detalhando a preparação da mistura mestra, adição de RNA, configuração da máquina em tempo real e interpretação correta dos resultados.

Tempo real RT-PCR do Pan-lyssavirus para o diagnóstico da raiva

Apresentamos um protocolo completo para o diagnóstico pós-morte da raiva animal em condições de campo usando um teste de diagnóstico imunocromatográfico rápido (RIDT), desde a amostragem da biópsia cerebral até a interpretação final. Também descrevemos outras aplicações usando o dispositivo para análise molecular e genotipagem viral.

Teste de diagnóstico imunocromatográfico rápido pós-morte de campo para configurações limitadas de recursos com outras aplicações moleculares

Aqui, apresentamos um protocolo de teste de imunohistoquímica para a detecção de antígenos do vírus da raiva como um teste de diagnóstico alternativo para tecidos fixos de formalina.

Teste de imunohistoquímica para a detecção de antígenos lyssavírus a partir de tecidos fixos formalina

Este protocolo apresenta uma abordagem baseada em qRT-PCR para determinar o número de cópia genética do vírus da raiva (N) dentro de várias estruturas anatômicas cerebrais bovinas usando transcrição in vitro.

Quantitação do vírus da raiva em várias estruturas cerebrais bovinas

O Solaris qPCR Ensaios Expressão Gênica são novos pré-concebidas qPCR primer / sonda combinações projetado para simplificar o processo de qPCR sem sacrificar a especificidade e robustez do ensaio.

Quantitativas Real-Time PCR usando o Thermo Scientific Solaris qPCR Assay

Quantitativas PCR em tempo real (qRT-PCR) é uma ferramenta eficaz para diagnosticar os níveis de mRNA nos tecidos do inseto e estágios diferentes de desenvolvimento. Neste relatório, nós mostramos o uso de qRT-PCR para verificar os níveis de mRNA em diferentes tecidos e estágios de desenvolvimento larval das espécies de insetos invasivos, esmeralda broca cinzas.

Análise de Expressão Gênica em Emerald Borer Ash ( Agrilus planipennis) Usando Quantitativa em Tempo Real-PCR

PCR emergiu como uma técnica comum em muitos laboratórios de biologia molecular. Desde aqui está um guia rápido para vários protocolos convencionais de PCR. Porque cada reacção é uma experiência única, as condições óptimas necessárias para gerar um produto variar. Compreender as variáveis ​​em uma reação vai aumentar muito a eficiência de resolução de problemas, aumentando assim a chance de obter o resultado desejado.

Reação em Cadeia da Polimerase: Protocolo Basic Plus Estratégias de solução de problemas e otimização

Aprenda o ensaio LN34 RT-PCR multiplex para diagnóstico post-mortem de raiva em animais. Este protocolo validado melhora a precisão diagnóstica e apoia esforços de prevenção da doença.

Diagnóstico post-mortem de raiva em animais pelo ensaio de reação em cadeia da polimerase com transcrição reversa em tempo real LN34 atualizado e multiplexado (Vídeo) | JoVE Journal

Diagnóstico post-mortem de raiva em animais pelo ensaio de reação em cadeia da polimerase com transcrição reversa em tempo real LN34 atualizado e multiplexado

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