Name: Medição do teor de carbono em macrófagos das vias aéreas expostos a partículas contendo carbono (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-07-12T14:15:00.000+00:00
Duration: 5 min 18 s
Description: Aprenda a medir o teor de carbono em macrófagos das vias aéreas usando escarro induzido. Este método não invasivo oferece um biomarcador direto e confiável para avaliar a exposição individual à matéria particulada.

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<meta charset="utf8"></head><body>Quantificando o carbono em macrófagos pulmonares por meio da análise de escarro induzido

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</ol>

<table><tbody><tr><td>Canudos estéreis de 3 mL</td><td>Shanghai YEASEN Biotechnology Co., LTD</td><td>84202ES03</td><td></td></tr><tr><td>Tubo de centrífuga de 50 mL</td><td>Thermo Fisher Scientific, EUA</td><td>339652</td><td></td></tr><tr><td>Álcool etílico absoluto</td><td>Sinopharm Group Chemical Reagent Co.</td><td>LTD 64-17-5</td><td></td></tr><tr><td>Óleo de cedro</td><td>Shanghai McLean Biochemical Technology Co., LTD</td><td>C805296</td><td></td></tr><tr><td>Coloração Diff-quick solução</td><td>Shanghai YEASEN Biotechnology Co., LTD</td><td>40748ES76</td><td></td></tr><tr><td>Ditiotreitol</td><td>Solebo Bio Co., LTD</td><td>D8220</td><td></td></tr><tr><td>Tampão de fosfato Duchenne (DPBS)</td><td>Thermo Fisher Scientific, EUA</td><td>14190144</td><td></td></tr><tr><td>Câmera de microscópio</td><td>Olympus Corporation of Japan</td><td>DP72</td><td></td></tr><tr><td>Goma de árvore</td><td>neutra Solebo Bio Co., LTD</td><td>G8590</td><td></td></tr><tr><td>Membrana de filtro de nylon 70um</td><td>BD Falcon Bioscience, EUA</td><td>211755</td><td></td></tr><tr><td>Microscópio óptico</td><td>Olympus Corporation do Japão</td><td>BX60</td><td></td></tr><tr><td>Polietilenoglicol</td><td>Sinopharm Group Chemical Reagent Co. LTD</td><td>25322-68-3</td><td></td></tr><tr><td>Ultracentrifuge</td><td>Thermo Fisher Scientific, EUA</td><td>SL40R</td><td></td></tr><tr><td>Corrediça viscosa</td><td>Jiangsu SHitAI EXPERIMENTAL Equipment Co. LTD</td><td></td><td></td>188105</tr></tbody></table>

medição do teor de carbono em macrófagos das vias aéreas expostos a partículas contendo carbono

Measuring Carbon Content in Airway Macrophages Exposed to Carbon-Containing Particulate Matters

O escarro, preservado e processado com a solução fixadora, exibiu morfologia de macrófagos intactos em microscópio óptico durante o exame morfológico. Os macrófagos exibiram núcleos celulares claros, redondos ou em forma de rim, facilmente coráveis. Após a coloração, os núcleos das células pareciam roxo-azulados, enquanto o citoplasma era rosa claro ou azul claro. O campo microscópico mostrou impurezas mínimas, o que facilitou a fácil identificação celular. Dentro das células, as partículas de carbono negro eram distintamente visíveis em pequenos agregados, permitindo a análise quantitativa de partículas de carbono.
Imagens representativas de macrófagos de escarro são apresentadas na Figura 1, representando números variados de partículas de carbono em diferentes células. Por exemplo, a Figura 1A não mostra partículas de carbono, enquanto a Figura 1D exibe a maior concentração. Os valores de MCCC foram medidos como 0,00%, 2,24%, 6,64% e 34,61% para macrófagos (A-D), respectivamente. Durante o processo de determinação dos parâmetros CCAM, foi realizada uma avaliação quantitativa do teor de carbono em cada macrófago para mitigar vieses decorrentes de variações no tamanho dos macrófagos e da sobreposição de partículas de carbono com núcleos celulares. O cálculo e a análise da MACC foram realizados para 50 macrófagos por sujeito do estudo, conforme mostrado na Figura 2.
O estudo selecionou empacotadores de negro de fumo (CBP) de uma fábrica específica de negro de fumo de acetileno como o grupo exposto e recrutou trabalhadores de bombas de água de estações de água locais, que não tinham exposição ocupacional aparente a fatores prejudiciais, como o grupo de controle (não-CBP). Os resultados apresentados na Figura 2 indicam um CCAM maior em trabalhadores de embalagens de negro de fumo em comparação com o grupo controle.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66781/66781fig01.jpg"> 
Figura 1: Imagem microscópica óptica mostrando partículas de carbono dentro dos macrófagos das vias aéreas. A cor preta no citoplasma representa partículas de carbono. Os painéis (AD) retratam imagens representativas de macrófagos das vias aéreas, cada um exibindo níveis variados de CCAM. Os valores de CCAM para macrófagos em (A-D) foram 0,00%, 2,24%, 6,64% e 34,61%, respectivamente. O maior nível de CCAM foi observado em (D). Barras de escala: 10 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66781/66781fig01large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66781/66781fig02.jpg"> 
Figura 2: Níveis quantitativos de MACC na população. Cinquenta macrófagos citoplasmicamente intactos e bem corados foram selecionados aleatoriamente para análise e quantificação por sujeito do estudo. Os dados foram analisados por meio do teste t de Student: *P &lt; 0,05. CBP: empacotadores de negro de fumo; Não-CBP: grupo controle. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66781/66781fig02large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>

Medição do teor de carbono em macrófagos das vias aéreas expostos a partículas contendo carbono

Pulmonary macrophages exhibit a dose-dependent pattern in phagocytizing particles. Following engulfment, these macrophages are subsequently excreted with ...

measuring-carbon-content-airway-macrophages-exposed-to-carbon

Research

JoVE Journal

Environment

Ambiente

Células epiteliais pulmonares podem ser isolados do trato respiratório de camundongos e cultivadas em ar-líquido interface como um modelo de epitélio respiratório diferenciado. Um protocolo é descrito para o isolamento, cultura e expondo essas células à fumaça de cigarro mainstream, a fim de estudar as respostas moleculares para esta toxina ambiental.

Isolamento de rato células epiteliais respiratórias e exposição à fumaça de cigarro Experimental da Air interface líquido

Descrevemos os protocolos para a colheita murinos macrófagos alveolares, que são residentes as células imunes inatas no pulmão, e examinando a sua ativação em resposta a co-cultura com nanopartículas polianidrido.

Colheita Murino macrófagos alveolares e Avaliação de ativação celular induzida por nanopartículas polianidrido

Este vídeo demonstra a imunomarcação de armadilhas extracelulares de macrófagos, METs, em macrófagos broncoalveolares do fluido de lavagem broncoalveolar, e sua visualização usando um microscópio confocal.

Visualização de Armadilhas Extracelulares em Macrófagos de Fluidos de Lavagem Broncoalveolar Humana

Um método para avaliar a capacidade dos isolados macrófagos alveolares do rato para controlar o crescimento de esporos de Aspergillus fagocitados por microscopia confocal.

Avaliar a atividade anti-fúngica isolada de macrófagos alveolares por microscopia confocal

O objetivo deste protocolo é fornecer métodos automatizados para quantificar patologias pulmonares crônicas em um modelo murino de DPOC. O protocolo inclui a exposição de camundongos à fumaça de cigarro (CS), medição da função pulmonar, insuflação dos pulmões e uso de métodos de morfometria para medir o enfisema e a remodelação das pequenas vias aéreas em camundongos.

Automáticos de medição de enfisema pulmonar e das vias aéreas pequenas Reformas em cigarro expostas ao fumo Mice

Este protocolo descreve técnicas para a quantificação e caracterização de aberrações cromossómicas in vitro em macrófagos de camundongos RAW264.7 após o tratamento com partículas do ar ambiente.

Análise da aberrações cromossômicas induzidas Matéria Ambient Particulate Usando um<em&gt; In Vitro</em&gt; Sistema

Macrófago extracelulares armadilhas são uma entidade recentemente descrita. Este artigo se concentrará em métodos de microscopia confocal e como eles são visualizadas in vitro e em vivo de amostras do pulmão.

Visualizando o macrófago armadilhas extracelular usando microscopia Confocal

Nós descrevemos um método para processar o líquido broncoalveolar do lavagem e o sangue periférico combinado dos indivíduos cronicamente HIV-contaminados na terapia antiretroviral para avaliar reservatórios pulmonars do HIV. Estes métodos resultam na aquisição de células T CD4 altamente puras e macrófagos alveolares que posteriormente podem ser utilizados para a imunofenotipagem e quantificações de DNA/RNA do HIV por reação em cadeia da polimerase ultrassensora.

Processamento de fluido de lavagem broncoalveolar e sangue pareado para macrófago alveolar e CD4+ T-Cell immunophenotyping e avaliação do reservatório de HIV

Este manuscrito descreve um protocolo para determinar se a exposição ao ozônio, um critério poluente aéreo, prejudica a efferocitose alveolar do macrófago in vivo. Este protocolo utiliza reagentes e técnicas comumente usados e pode ser adaptado a vários modelos de lesão pulmonar para determinar os efeitos sobre a efferocitose do macrófago alveolar.

In vivo avaliação da Efferocitose de macrófago alveolar após exposição ao ozônio

Descrito é o método de cultura celular e exposição de um modelo brônquico in vitro para exposição realista e repetida de inalação a partículas para testes de toxicidade.

Um modelo epitelial de interface ar-líquido para exposição de inalação realista e repetida a partículas aéreas para testes de toxicidade

Aprenda a medir o teor de carbono em macrófagos das vias aéreas usando escarro induzido. Este método não invasivo oferece um biomarcador direto e confiável para avaliar a exposição individual à matéria particulada.

Medição do teor de carbono em macrófagos das vias aéreas expostos a partículas contendo carbono

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