Name: Desenvolvimento de Terapêutica Combinatória para Lesão Medular usando Entrega de Células-Tronco (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-06-07T14:50:00.000+00:00
Duration: 5 min 13 s
Description: Aprenda a desenvolver hidrogéis derivados de tecido descelularizado para reparação de lesão medular. Este método utiliza células-tronco adiposas em plataforma 3D para maximizar o comportamento neuro-regenerativo e potencial terapêutico.

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<table><tbody><tr><td>3-(Decildimetilamonio)sulfonato de propano sal interno</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D4266</td><td>Usado durante a descelularização do nervo ciático, SB-10</td></tr><tr><td>3-(N,N-Dimetilpalmitilammonio)sulfonato de propano</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H6883</td><td>Usado durante a descelularização do nervo ciático, SB-16</td></tr><tr><td>Reagente AlamarBlue</td><td>Fisher Scientific</td><td>DAL1100</td><td>Usado durante o teste de viabilidade das células AlamaBlue</td></tr><tr><td>Condroitinase ABC</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C3667</td><td>Usado durante a descelularização do nervo ciático</td></tr><tr><td>Criostato</td><td>Leica</td><td>CM1860</td><td></td></tr><tr><td>Desoxirribonuclásio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D4263</td><td>Usado durante a descelularização do nervo ciático</td></tr><tr><td>Fosfato de hidrogênio dissódico heptahidratado</td><td>VWR</td><td>BDH9296</td><td>Químico para 100 mM Na/50 mM de phos e 50 mM Na/10 mM phos buffer</td></tr><tr><td>DNeasy Blood & Blood Kit de papel de seda</td><td>Qiagen</td><td>69506</td><td>Usado durante a análise de DNA</td></tr><tr><td>Montagem DPX para histologia, meio de montagem do ferrolho</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>6522</td><td>Usado durante H& Coloração por E</td></tr><tr><td>Eosina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>HT110216</td><td>Usado durante H& Coloração por E</td></tr><tr><td>Etanol</td><td>VWR</td><td>89125-172</td><td></td></tr><tr><td>Formaldeído</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>252549</td><td>Usado durante H& Coloração por E</td></tr><tr><td>Glutaraldeído (GA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G6257</td><td>Usado durante a funcionalização da superfície do PDMS</td></tr><tr><td>Mídia de crescimento hASC</td><td>Lonza</td><td>PT-4505</td><td>Usado para cultivar hASCs, contendo soro bovino fetal e penicilina/estreptomicina</td></tr><tr><td>Hematoxilina</td><td>VWR</td><td>26041-06</td><td>Usado durante H& Coloração por E</td></tr><tr><td>Células-tronco humanas derivadas do adiposo</td><td>Lonza</td><td>PT-5006</td><td></td></tr><tr><td>Ácido clorídrico (HCl)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>320331</td><td>Usado para digerir tecidos descelularizados e ajustar soluções de Pregel</td></tr><tr><td>Mídia M199</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M0650</td><td>Usado para diluir pregels até a concentração desejada</td></tr><tr><td>Composto temperatual de corte ótimo</td><td>Tecido-tecido</td><td>4583</td><td></td></tr><tr><td>Pepsina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P7000</td><td>Usado para digerir tecidos descelularizados</td></tr><tr><td>Ácido peracético</td><td>Beco do Laboratório</td><td>PAA1001</td><td>Usado durante a descelularização da medula espinhal</td></tr><tr><td>Soro salino tamponado com fosfato (PBS)</td><td>VWR</td><td>97062-948</td><td></td></tr><tr><td>Leitor de placas</td><td>BioTek Instruments</td><td>Synergy Mx</td><td></td></tr><tr><td>Polietileneimina (PEI)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>181978</td><td>Usado durante a funcionalização da superfície do PDMS</td></tr><tr><td>Nervo ciático suíno</td><td>Tissue Source LLC</td><td></td><td>Porcos vivos, sem informações identificáveis e sem detalhes de rastreabilidade</td></tr><tr><td>Medula espinhal suína</td><td>Tissue Source LLC</td><td></td><td>Porcos vivos, sem informações identificáveis e sem detalhes de rastreabilidade</td></tr><tr><td>Sistema dsDNA QuantiFluor</td><td>Promega</td><td>E2670</td><td>Usado para analisar o conteúdo do DNA</td></tr><tr><td>Reômetro</td><td>TA Instruments</td><td>DHR 2</td><td></td></tr><tr><td>Rotador robusto</td><td>Glas-co</td><td>099A RD4512</td><td>Usado durante a descelularização da medula espinhal</td></tr><tr><td>Cloreto de sódio (NaCl)</td><td>VWR</td><td>BDH9286</td><td>Químico para 100 mM Na/50 mM de phos e 50 mM Na/10 mM phos buffer</td></tr><tr><td>Desoxicolato de sódio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D6750</td><td></td></tr><tr><td>Monohidratado de fosfato de dihidrogênio de sódio</td><td>VWR</td><td>BDH9298</td><td>Químico para 100 mM Na/50 mM de phos e 50 mM Na/10 mM phos buffer</td></tr><tr><td>Solução de hidróxido de sódio (NaOH)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>415443</td><td>Usado para ajustar as soluções de Pregel</td></tr><tr><td>SU-8</td><td>Materiais recomendados por Kayaku</td><td>SU8-100</td><td>Usado para revestir pastilha de silício</td></tr><tr><td>Sacarose</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S8501</td><td>Usado durante a descelularização da medula espinhal</td></tr><tr><td>Kit de elastomer de silicone Sylgard 184</td><td>DOW</td><td>1317318</td><td>Base e agente de cura do polidimetilxiloxano (PDMS)</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>X100</td><td>Usado durante a descelularização da medula espinhal</td></tr><tr><td>Tripsina-EDTA (0,05%), fenol vermelho</td><td>Thermo Fisher</td><td>25300062</td><td>Usado durante trabalhos com hASC e durante a descelularização da medula espinhal</td></tr><tr><td>Rotador de revólver tubular</td><td>Thermo Fisher</td><td>88881001</td><td>Usado durante a descelularização do nervo ciático</td></tr><tr><td>Xileno</td><td>VWR</td><td>MK866816</td><td>Usado durante H& Coloração por E</td></tr></tbody></table>

desenvolvimento de terapêutica combinatória para lesão medular usando entrega de células-tronco

Development of Combinatorial Therapeutics for Spinal Cord Injury using Stem Cell Delivery

Desenvolvimento de Terapêutica Combinatória para Lesão Medular usando Entrega de Células-Tronco

Traumatic spinal cord injury (SCI) induces permanent sensorimotor deficit below the site of injury. It affects approximately a quarter million people in ...

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Research

JoVE Journal

Bioengineering

Bioengenharia

Lesão traumática da medula espinhal interrompe a comunicação com o cérebro. Para restaurar a conectividade perdida nós utilizamos um enxerto de nervo periférico para fornecer um substrato de fibras em regeneração em combinação com fatores neurotróficos e matriz de modulador enzimas para remover moléculas inibidoras para promover o crescimento de longa distância.

Combinando nervos periféricos Enxertia e Modulação Matrix reparar o cabo de Rat feridos Spinal

Transplante precursoras neurais é uma estratégia promissora para a proteção e / ou substituição perdido / cervical disfuncional neurônios motores frênicos em lesão medular (SCI) e do neurônio motor doença, a esclerose amiotrófica laterais (ALS). Nós fornecemos um protocolo para entrega celular para chifre da medula espinhal cervical ventral em modelos de roedores da ALS e SCI.

Intra Transplante de Células de Segmentação Chifre Cervical Ventral em Esclerose Lateral Amiotrófica e lesão medular traumática

Fonte: Zweckberger, K., et al. Uso sinérgico de células precursoras neurais e peptídeos auto-montáveis em lesão experimental da medula espinhal cervical.  J. Vis. Exp. (2015).Este protocolo demonstra uma abordagem de injeção direcionada para reparo de lesão medular em um modelo de rato. Envolve a entrega de peptídeos de automontagem (SAPs) no núcleo da lesão para criar um andaime de suporte, seguido por injeções de células precursoras neurais (NPC) ao redor da lesão para remodelar o tecido.

Injeção de peptídeos automontáveis e células precursoras neurais para reparo da medula espinhal em um modelo de rato

Matrizes de fibrina que contêm factores de crescimento foram utilizados para reter as células estaminais neurais enxertados em locais de completa a transecção da medula espinal. Células enxertadas encheu completamente a cavidade lesão e diferenciado em vários tipos de células neurais, incluindo neurônios que se estenderam axônios em acolhimento medula espinhal através de longas distâncias.

Promoção da sobrevivência e diferenciação de células-tronco neurais com fibrina e Fator de Crescimento Cocktails após Spinal Cord Injury grave

O tratamento da lesão medular cervical com peptídeos de automontagem (SAP) e células precursoras neurais (NPC), juntamente com fatores de crescimento, é uma abordagem promissora para promover a regeneração e a recuperação. Um modelo de rato clipe de aneurisma de contusão/compressão de SCI cervical e tratamento combinado envolvendo injeção de SAP e transplante de NPC é estabelecido.

Use Synergetic de células neuronais precursoras e Peptídeos de auto-montagem em Experimental Cervical Spinal Cord Injury

A lesão medular é uma condição traumática que causa grave morbidade e mortalidade elevada. Neste trabalho, descrever em detalhes um modelo contusão de lesão medular em ratos, seguido por um transplante de células-tronco neurais.

Neural Stem Cell Transplantation em Experimental contusão Model of Spinal Cord Injury

Este estudo descreve uma plataforma experimental para caracterizar rapidamente células-tronco modificadas e seus comportamentos antes de sua aplicação em estudos de transplante in vivo de longo prazo para resgate e reparo do sistema nervoso.

High Throughput caracterização de células-tronco adultas modificadas para liberação de fatores terapêuticos como estratégia de neuroproteção

Lesões graves na medula espinhal geralmente resultam em defeitos teciduais. Duas possibilidades são descritas para preencher com sucesso essas lacunas para promover a adaptação tecidual, respostas regenerativas e melhora funcional em ratos por meio do implante de um sistema de microconectores mecânicos após lesão aguda e cinco semanas após a transecção completa da medula espinhal.

Estratégias experimentais para Ponte grandes lacunas de tecido na medula espinhal ferido após aguda e lesão crônica

Este artigo descreve uma técnica para inserir um canal oco entre os cotos de medula espinhal após a transecção completa e preenchimento com células de Schwann (SCs) e matriz de injetável membrana basal para ponte e promover a regeneração do axônio através da abertura.

Transplante de Schwann células dentro de conduítes de PVDF-TrFE a ponte rato necrosante tocos de medula espinhal para promover a regeneração do axônio através da abertura

Este protocolo descreve a fabricação de um sistema de cultura de células para permitir a propagação de células-tronco em um andaime de polímero condutor para estimulação elétrica em vitro e subsequentes na vivo implantação da célula-tronco-semeado andaime usando um técnica minimamente invasiva.

Eletricamente condutivo Andaime modular e entregar as células-tronco

Neste artigo, fornecemos um método reprodutível para gerar e manter fatias organotípicas da medula espinhal de longo prazo transplantadas com células-tronco neurais como um modelo ex vivo para testar terapias de reposição celular.

Cultura de fatias organotípicas da medula espinhal de camundongo de longo prazo como plataforma para validação de transplante de células em lesão medular

Aprenda a desenvolver hidrogéis derivados de tecido descelularizado para reparação de lesão medular. Este método utiliza células-tronco adiposas em plataforma 3D para maximizar o comportamento neuro-regenerativo e potencial terapêutico.

Desenvolvimento de Terapêutica Combinatória para Lesão Medular usando Entrega de Células-Tronco

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