Identificação de células T raras específicas de antígenos de pulmões de camundongos com peptídeos: tetrâmeros do complexo principal de histocompatibilidade

Fornecemos um protocolo detalhado para isolar e identificar populações raras de células T específicas de antígenos em pulmões de camundongos por meio de enriquecimento de células T baseadas em esferas magnéticas e tetrâmeros peptídicos: complexo principal de histocompatibilidade (MHC).

Nosso laboratório estuda o desenvolvimento de células T CD4 em diferentes contextos de tolerância e imunidade. Em nossos projetos, estamos interessados principalmente em como a exposição ao antígeno impulsiona o desenvolvimento de subconjuntos fenotípicos de células T que estabelecem memória imunológica que pode aumentar a tolerância a si mesma ou a imunidade contra patógenos. Recentemente, nos concentramos no desenvolvimento de subconjuntos de células T reguladoras e de memória que residem no tecido pulmonar.

Essas células T residentes no tecido desempenham um papel importante no reforço da tolerância a autoantígenos durante a lesão tecidual ou na promoção de respostas inflamatórias a patógenos durante a reinfecção. Nosso laboratório é especializado no estudo direto de células T específicas de antígenos, mas reagentes de tetrâmero MHC de peptídeos personalizados. Isso nos permite estudar essas células T sem o uso de modelos transgênicos TCR ou outras manipulações experimentais que são conhecidas por causar artefatos experimentais.

Embora possamos identificar prontamente células T específicas do antígeno com tetrâmeros, essas células T geralmente estão presentes em frequências muito baixas, principalmente quando estão em um estado ingênuo ou de memória. Também é um desafio isolar essas células T de tecidos não linfóides, onde geralmente residem após uma resposta imune. Embora existam vários protocolos estabelecidos para isolar células T de pulmões de camundongos, o protocolo que apresentamos aqui foi otimizado para a detecção subsequente de células T específicas de antígeno de baixa frequência por coloração de tetrâmero.

Dentro deste protocolo, também incluímos duas opções de associação de tecidos para melhor acomodar os recursos da biblioteca. Nosso protocolo ajudará os pesquisadores a expandir o uso de tetrâmeros para células T específicas de antígenos no tecido pulmonar. Isso levará a estudos in vivo mais poderosos sobre o desenvolvimento e a função das células T de memória residentes no tecido, que são tópicos de intenso interesse no campo.