Name: Técnica para administração intranasal de agregados de α-sinucleína (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-11-08T13:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 49 s
Description: Aprenda a técnica de administração intranasal de agregados de α-sinucleína em modelo murino para estudar a propagação prion-like da patologia da doença de Parkinson. Este método não cirúrgico permite avaliar a progressão da patologia do bulbo olfatório.

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<meta charset="utf8"></head><body>Propagação de α-sinucleína: administração intranasal na doença de Parkinson

<ol><li>Tysnes, O. B., Storstein, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidemiology+of+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neural+Transm+%28Vienna%29%22%5BJournal%5D)">Epidemiology of Parkinson's disease.</a> J Neural Transm (Vienna). 124 (8), 901-905 (2017).</li>
<li>Goedert, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alpha-synuclein+and+neurodegenerative+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Alpha-synuclein and neurodegenerative diseases.</a> Nature Rev Neurosci. 2, 492-501 (2001).</li>
<li>Conway, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acceleration+of+oligomerization%2C+not+fibrillization%2C+is+a+shared+property+of+both+alpha-synuclein+mutations+linked+to+early-onset+Parkinson%27s+disease%3A+implications+for+pathogenesis+and+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Acceleration of oligomerization, not fibrillization, is a shared property of both alpha-synuclein mutations linked to early-onset Parkinson's disease: implications for pathogenesis and therapy.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 97 (2), 571-576 (2000).</li>
<li>Braak, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Staging+of+brain+pathology+related+to+sporadic+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol+Aging%22%5BJournal%5D)">Staging of brain pathology related to sporadic Parkinson's disease.</a> Neurobiol Aging. 24 (2), 197-211 (2003).</li>
<li>Braak, H., Rüb, U., Gai, W. P., Del Tredici, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Idiopathic+Parkinson%27s+disease%3A+possible+routes+by+which+vulnerable+neuronal+types+may+be+subject+to+neuroinvasion+by+an+unknown+pathogen%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neural+Transm+%28Vienna%29%22%5BJournal%5D)">Idiopathic Parkinson's disease: possible routes by which vulnerable neuronal types may be subject to neuroinvasion by an unknown pathogen.</a> J Neural Transm (Vienna). 110 (5), 517-536 (2003).</li>
<li>Kordower, J. H., Chu, Y., Hauser, R. A., Freeman, T., Olanow, C. W. Lewy body-like pathology in long-term embryonic nigral transplants in Parkinson's disease. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKordower%2C+JH+%22Nat+Med%22">Nat Med</a>. 14 (5), 504-506 (2008).</li>
<li>Li, J. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lewy+bodies+in+grafted+neurons+in+subjects+with+Parkinson%27s+disease+suggest+host-to-graft+disease+propagation%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Lewy bodies in grafted neurons in subjects with Parkinson's disease suggest host-to-graft disease propagation.</a> Nat Med. 14 (5), 501-503 (2008).</li>
<li>Luk, K. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathological+%CE%B1-synuclein+transmission+initiates+Parkinson-like+neurodegeneration+in+nontransgenic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Pathological α-synuclein transmission initiates Parkinson-like neurodegeneration in nontransgenic mice.</a> Science. 338, 949-953 (2012).</li>
<li>Desplats, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inclusion+formation+and+neuronal+cell+death+through+neuron-to-neuron+transmission+of+alpha-synuclein%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Inclusion formation and neuronal cell death through neuron-to-neuron transmission of alpha-synuclein.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 106 (31), 13010-13015 (2009).</li>
<li>Sawamura, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lewy+body+disease+primate+model+with+%CE%B1-Synuclein+propagation+from+the+olfactory+bulb%5BTitle%5D)+AND+%22Mov+Disord%22%5BJournal%5D)">Lewy body disease primate model with α-Synuclein propagation from the olfactory bulb.</a> Mov Disord. 37 (10), 2033-2044 (2022).</li>
<li>Uemura, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inoculation+of+%CE%B1-synuclein+preformed+fibrils+into+the+mouse+gastrointestinal+tract+induces+Lewy+body-like+aggregates+in+the+brainstem+via+the+vagus+nerve%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Neurodegener%22%5BJournal%5D)">Inoculation of α-synuclein preformed fibrils into the mouse gastrointestinal tract induces Lewy body-like aggregates in the brainstem via the vagus nerve.</a> Mol Neurodegener. 13 (1), 21(2018).</li>
<li>Rey, N. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Widespread+transneuronal+propagation+of+alpha-synucleinopathy+triggered+in+olfactory+bulb+mimics+prodromal+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Widespread transneuronal propagation of alpha-synucleinopathy triggered in olfactory bulb mimics prodromal Parkinson's disease.</a> J Exp Med. 213 (9), 1759-1778 (2016).</li>
<li>Rey, N. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spread+of+aggregates+after+olfactory+bulb+injection+of+%CE%B1-synuclein+fibrils+is+associated+with+early+neuronal+loss+and+is+reduced+long+term%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathol%22%5BJournal%5D)">Spread of aggregates after olfactory bulb injection of α-synuclein fibrils is associated with early neuronal loss and is reduced long term.</a> Acta Neuropathol. 135 (1), 65-83 (2018).</li>
<li>Uemura, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%CE%B1-Synuclein+spread+from+olfactory+bulb+causes+hyposmia%2C+anxiety%2C+and+memory+loss+in+BAC-SNCA+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Mov+Disord%22%5BJournal%5D)">α-Synuclein spread from olfactory bulb causes hyposmia, anxiety, and memory loss in BAC-SNCA mice.</a> Mov Disord. 36 (9), 2036-2047 (2021).</li>
<li>Saito, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lewy+body+pathology+involves+the+olfactory+cells+in+Parkinson%27s+disease+and+related+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Mov+Disord%22%5BJournal%5D)">Lewy body pathology involves the olfactory cells in Parkinson's disease and related disorders.</a> Mov Disord. 31 (1), 135-138 (2016).</li>
<li>De Luca, C. M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+RT-QuIC+seeding+activity+for+%CE%B1-synuclein+in+olfactory+mucosa+samples+of+patients+with+Parkinson%27s+disease+and+multiple+system+atrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Transl+Neurodegener%22%5BJournal%5D)">Efficient RT-QuIC seeding activity for α-synuclein in olfactory mucosa samples of patients with Parkinson's disease and multiple system atrophy.</a> Transl Neurodegener. 8, 24(2019).</li>
<li>Stefani, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alpha-synuclein+seeds+in+olfactory+mucosa+of+patients+with+isolated+REM+sleep+behaviour+disorder%5BTitle%5D)+AND+%22Brain%22%5BJournal%5D)">Alpha-synuclein seeds in olfactory mucosa of patients with isolated REM sleep behaviour disorder.</a> Brain. 144 (4), 1118-1126 (2021).</li>
<li>Ucciferri, C. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scoring+central+nervous+system+inflammation%2C+demyelination%2C+and+axon+injury+in+experimental+autoimmune+encephalomyelitis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Scoring central nervous system inflammation, demyelination, and axon injury in experimental autoimmune encephalomyelitis.</a> J Vis Exp. (204), e65738(2024).</li>
<li>Masuda-Suzukake, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prion-like+spreading+of+pathological+%CE%B1-synuclein+in+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Brain%22%5BJournal%5D)">Prion-like spreading of pathological α-synuclein in brain.</a> Brain. 136 (Pt 4), 1128-1138 (2013).</li>
<li>Sawamura, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-dose+intranasal+administration+of+%CE%B1-syn+PFFs+induce+lewy+neurite-like+pathology+in+olfactory+bulbs%5BTitle%5D)+AND+%22Parkinsonism+Relat+Disord%22%5BJournal%5D)">Single-dose intranasal administration of α-syn PFFs induce lewy neurite-like pathology in olfactory bulbs.</a> Parkinsonism Relat Disord. 112, 105440(2023).</li>
<li>Guo, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intranasal+administration+of+%CE%B1-synuclein+preformed+fibrils+triggers+microglial+iron+deposition+in+the+substantia+nigra+of+Macaca+fascicularis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+Dis%22%5BJournal%5D)">Intranasal administration of α-synuclein preformed fibrils triggers microglial iron deposition in the substantia nigra of Macaca fascicularis.</a> Cell Death Dis. 12 (1), 81(2021).</li>
<li>Macdonald, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assembly+of+%CE%B1-synuclein+and+neurodegeneration+in+the+central+nervous+system+of+heterozygous+M83+mice+following+the+peripheral+administration+of+%CE%B1-synuclein+seeds%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathol+Commun%22%5BJournal%5D)">Assembly of α-synuclein and neurodegeneration in the central nervous system of heterozygous M83 mice following the peripheral administration of α-synuclein seeds.</a> Acta Neuropathol Commun. 9 (1), 189(2021).</li>
<li>Abdelmotilib, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%CE%B1-Synuclein+fibril-induced+inclusion+spread+in+rats+and+mice+correlates+with+dopaminergic+Neurodegeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol+Dis%22%5BJournal%5D)">α-Synuclein fibril-induced inclusion spread in rats and mice correlates with dopaminergic Neurodegeneration.</a> Neurobiol Dis. 105, 84-98 (2017).</li>
<li>Tarutani, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+fragmented+pathogenic+%CE%B1-Synuclein+seeds+on+prion-like+propagation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">The effect of fragmented pathogenic α-Synuclein seeds on prion-like propagation.</a> J Biol Chem. 291 (36), 18675-18688 (2016).</li>
<li>Taguchi, T., Ikuno, M., Yamakado, H., Takahashi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+model+for+prodromal+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Animal model for prodromal Parkinson's disease.</a> Int J Mol Sci. 21 (6), 1961(2020).</li>
<li>Bousset, L., Brundin, P., Böckmann, A., Meier, B., Melki, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+efficient+procedure+for+removal+and+inactivation+of+alpha-Synuclein+assemblies+from+laboratory+materials%5BTitle%5D)+AND+%22J+Parkinsons+Dis%22%5BJournal%5D)">An efficient procedure for removal and inactivation of alpha-Synuclein assemblies from laboratory materials.</a> J Parkinsons Dis. 6 (1), 143-151 (2016).</li>
<li>Fenyi, A., Coens, A., Bellande, T., Melki, R., Bousset, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+the+efficacy+of+different+procedures+that+remove+and+disassemble+alpha-synuclein%2C+tau+and+A-beta+fibrils+from+laboratory+material+and+surfaces%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Assessment of the efficacy of different procedures that remove and disassemble alpha-synuclein, tau and A-beta fibrils from laboratory material and surfaces.</a> Sci Rep. 8, 10788(2018).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Microscópio de fluorescência tudo-em-um BZ-X710</td><td>KEYENCE</td><td>N/A</td><td>Microscópio tudo-em-um</td></tr><tr><td>Ampicilina Sal de sódio</td><td>Nacalai tesque</td><td>02739-32</td><td></td></tr><tr><td>Bioruptor II</td><td>Sonicbio</td><td>BR2006A</td><td>Sonicbio Sonicador tipo banho-maria.</td></tr><tr><td>Tartarato de butorfanol</td><td>Meiji Seika Pharma</td><td>WAK-52850</td><td></td></tr><tr><td>Tubo de celulose</td><td>MISUMI</td><td>UC20-32-100</td><td></td></tr><tr><td>DeepWellMaximizer</td><td>TAITEC</td><td>MBR-022UP</td><td>Shaker</td></tr><tr><td>DynaCompetent Cells Zip BL21(DE3)</td><td>BioDynamics Laboratory Inc.</td><td>DS255</td><td>Célula competente</td></tr><tr><td>Entellan</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>107961</td><td>Meio de montagem rápida para microscopia</td></tr><tr><td>Fórceps Graefe Extra Fino Curvo Serrilhado</td><td>FST</td><td>11152-10&nbsp;</td><td>fórceps</td></tr><tr><td>Tesoura Fina Endurecida</td><td>FST</td><td>14090-09</td><td></td></tr><tr><td>tesoura Histofine Camundongo de coloração simples MAX-PO (R)</td><td>Nichirei Bioscience</td><td>414341</td><td>Polímero Universal de Imunoperoxidase, anti-Coelho</td></tr><tr><td>ImageJ ver 1.52p</td><td>NA</td><td>NA</td><td>https://imagej.net/</td></tr> <tr><td>innova4200</td><td>New Brunswick scientific</td><td>9105085</td><td>Incubadora agitador</td></tr><tr><td>Isopropil-&beta;- D-tiogalactopiranosídeo</td><td>Nacalai tesque</td><td>19742-94</td><td></td></tr><tr><td>LB caldo, Lennox</td><td>Nacalai tesque</td><td>20066-24</td><td></td></tr><tr><td>Leica EG 1150 H</td><td>Leica</td><td>14 0388 86 108</td><td>Centro Modular de Incorporação de Tecidos</td></tr><tr><td>Leica TP 1020</td><td>Leica</td><td>14 0422 85108</td><td>Processador Automático de Tecidos&nbsp;</td></tr><tr><td>Micrótomo giratório do micrótomo do microm HM325</td><td></td> do filme 135-17473 <td></td> de Medetomidine Fuji Thermo científico 902100 <td></td></tr><tr><td>Midazolam</td><td>Maruishi Seiyaku</td><td>4987-211-76210-0</td><td></td></tr><tr><td>Tipo novo da hematoxilina Tipo G</td><td>Muto</td><td>65-9197-38</td><td></td></tr><tr><td>Agulha alada normal da solução da hematoxilina para o tipo da veia D, agulha de 25G</td><td>TERUMO</td><td>NN2332R</td><td>25G</td></tr> <tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Optima TLX Ultracentrifuge</td><td>Beckman Couler</td><td>8043-30-1197</td><td>Ultracentrifuge</td></tr><tr><td>P10 pipeta</td><td>Gilson</td><td>FA10002P</td><td></td></tr><tr><td>Parafina</td><td>Leica</td><td>39601095</td><td></td></tr><tr><td>paraformaldeído</td><td>Nacalai tesque</td><td>30525-89-4</td><td></td></tr><tr><td>Peroxidase Stain DAB Kit</td><td>Nacalai tesque</td><td>25985-50</td><td></td></tr><tr><td>Pirece BCA Kits de Ensaio de Proteína</td><td>Thermo Scientific</td><td>23225</td><td>BCA assay</td></tr><tr><td>pRK172</td><td>Addgene</td><td>#134504</td><td>Plasmídeo</td></tr><tr><td>Q-Sepharose Fast Flow.&nbsp;</td><td>cytiva</td><td>17051001</td><td>resina de troca iônica</td></tr></tbody></table>

técnica para administração intranasal de agregados de α-sinucleína

Technique for Intranasal Administration of &#945;-Synuclein Aggregates

A Figura 3 mostra vários exemplos de agregados α-Syn no OB. No presente estudo, administramos agregados de α-Syn na narina unilateral. As duas cavidades nasais são separadas pelo septo nasal, e cada OB projeta os neurônios sensoriais olfativos para cada cavidade nasal separadamente. Portanto, o OB no lado contralateral pode ser usado como controle.
A patologia P-α-Syn não foi observada no BO no lado tratado após 1 e 3 meses (Figura 3A, B). Agregados de p-α-Syn semelhantes a neuritos de Lewy foram observados nos glomérulos do lado tratado após 6 e 12 meses. (Figura 3C, D, F, G). Esses agregados não foram observados no OB do lado controle (Figura 3E).
Podemos estimar a patologia α-Syn contando agregados de α-Syn ou examinando o tamanho, etc., usando ImageJ (Tabela de Materiais). Por exemplo, contamos e relatamos anteriormente o número de agregados α-Syn neste modelo20. No OB do lado tratado, os agregados semelhantes a neuritos de Lewy no OB aumentaram significativamente ao longo de 12 meses (ANOVA unidirecional, seguida pelo teste de Dunnett, p &lt; 0,01; Figura 3H). No OB do lado do controle, existem poucos agregados α-Syn.
Um estudo anterior mostrou que os PFFs injetados no cérebro de camundongos foram degradados em uma semana, e o α-Syn endógeno de camundongos foi convertido em agregados de α-Syn19. No presente estudo, o aumento da patologia α-Syn ao longo do tempo indica que a α-Syn endógena de camundongo foi convertida em agregados de α-Syn pela administração intranasal de dose única de PFFs. Esses resultados indicaram que a patologia α-Syn pode se espalhar da mucosa olfatória para a OB.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66943/66943fig01.jpg"> 
Figura 1: Método de administração da cavidade nasal do camundongo. (A) O camundongo é posicionado em decúbito dorsal com a cabeça ligeiramente inclinada para baixo. (B) As narinas do camundongo são indicadas por pontas de setas amarelas. (C, D) A solução de fibrila α-Syn é colocada na narina do camundongo (C, seta vermelha) e rapidamente inalada (D, setas vermelhas). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66943/66943fig01large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66943/66943fig02.jpg"> 
Figura 2: Esboço das etapas para obter os bulbos olfatórios intactos. (A) Usando uma tesoura, faça uma incisão no osso craniano sagital e lateralmente (linha tracejada amarela). (B) Remova completamente o osso craniano dos bulbos olfatórios (OBs). (C) Vire a cabeça e remova cuidadosamente o cérebro. Corte os nervos do cérebro. (D) Corte os nervos olfatórios ligados ao osso craniano. (E) Todo o cérebro com os OBs intactos. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66943/66943fig02large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66943/66943fig03.jpg"> 
Figura 3: Agregados de P-α-Syn nos glomérulos do bulbo olfatório. (A-G) Imuno-histoquímica de P-α-Syn (EP1536Y) do OB no lado tratado 1, 3, 6 e 12 meses (1 m, 3 m, 6 m e 12 m, respectivamente) após a administração intranasal e (E) no lado controle 12 meses após a administração intranasal. (C, D) Agregados de α-Syn semelhantes a neuritos de Lewy aparecem ao redor dos glomérulos. (F, G) Imagens ampliadas são imagens de alta ampliação de p-α-Syn semelhantes a neurite de Lewy 6 e 12 meses após a administração intranasal. (H) A quantidade de deposição de p-α-Syn semelhante a neurite de Lewy no OB nos lados tratado e controle (n = 4-5). Os gráficos mostram a média ± EPM. ANOVA de uma via seguida do teste de Dunnett; **&lt;0,01. Este número foi modificado de um relatório anterior20. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66943/66943fig03large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>

Técnica para administração intranasal de agregados de α-sinucleína

Parkinson's disease (PD) is a neurodegenerative disorder characterized by the presence of Lewy bodies, which are aggregates of &#945;-synuclein ...

technique-for-intranasal-administration-of-synuclein-aggregates

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurociência

A doença de Parkinson tem sido relacionada à exposição a pesticidas. Aqui nós mostramos um método para entregar pesticidas usando uma sonda gástrica, na concentração desejada e um método para analisar seu efeito em alfa-sinucleína acumulação no sistema nervoso entérico.

Administração oral de rotenona usando um Gavage e Análise de Imagem de Alpha-sinucleína Inclusões no sistema nervoso entérico

Um método para administrar medicamentos por via intranasal aos ratinhos acordado para o objectivo de atingir o cérebro é descrito. Este método permite doses repetidas durante longos períodos, utilizando a administração intranasal de droga sem anestesia, e nariz ao cérebro de entrega com a exposição sistémica mínima.

A administração intranasal de Terapêutica do SNC para Ratos Awake

Este vídeo demonstra a imunomarcação de neurônios tratados com agregados de alfa-sinucleína (αS). Os neurônios são tratados primeiro com agregados αS. Eles são então fixados, permeabilizados e tratados com uma solução de bloqueio. Anticorpos primários são adicionados, seguidos por anticorpos secundários marcados com fluorescência e uma coloração nuclear. A amostra é então montada e observada ao microscópio.

Imunomarcação de neurônios tratados com agregados de alfa-sinucleína

Este vídeo demonstra a injeção de fibrilas de alfa-sinucleína em um camundongo para induzir neuroinflamação. As fibrilas são injetadas intraperitonealmente em um camundongo transgênico que expressa proteínas alfa-sinucleína mutadas. Ao atingir o sistema nervoso central, as fibrilas entram nos neurônios e induzem a agregação das proteínas mutadas. Os agregados se espalham para neurônios, micróglias e astrócitos vizinhos. O reconhecimento dos agregados desencadeia a micróglia para induzir...

Indução de neuroinflamação em camundongos por injeção de fibrilas de alfa-sinucleína

Fonte: Ullah, I., et.al. Um dispositivo de posicionamento para a colocação de camundongos durante a entrega intranasal de siRNA ao sistema nervoso central. J. Vis. Exp. (2019)Este vídeo demonstra uma técnica de administração intranasal precisa para fornecer complexos peptídeo-siRNA direcionados a neurônios ao cérebro de camundongos usando um dispositivo de posicionamento especializado. Os camundongos anestesiados são fixados em uma posição de cabeça para baixo e para frente para otimizar a...

Entrega intranasal de siRNA ao cérebro de camundongo usando um dispositivo de posicionamento

Fonte: Kanazawa, T., et al. Novos métodos para administração intranasal sob anestesia inalatória para avaliar a administração de medicamentos nariz-cérebro. J. Vis. Exp. (2018)Este vídeo demonstra a administração intranasal de medicamentos radiomarcados em um camundongo anestesiado para obter a entrega de medicamentos nariz ao cérebro. Ele explica como as drogas atravessam o epitélio nasal e viajam por vias neuronais para chegar ao cérebro, bem como como o movimento ciliar influencia a retenção...

Administração de medicamentos intranasais em camundongos via pipeta e canulação reversa para administração de medicamentos nariz-cérebro

Injecção periférica de fibrilas-sinucleína alfa no peritoneu ou língua de Tg (M83 +/-: GFAP -Luc +/-) ratos, que expressam alfa-sinucleína humana com a mutação A53T familiar e a luciferase do pirilampo, pode induzir a neuropatologia, incluindo neuroinflamao , em seu sistema nervoso central.

Imagem de bioluminescência de Neuroinflammation em Ratinhos Transgénicos Após inoculação periférica de alfa-sinucleína fibrilas

O objetivo do presente protocolo é fornecer um sistema celular que Replica a formação do alfa-synuclein agrega na vivo. Inclusões intracelulares alfa-synuclein são semeados nos neurônios primários pela internalização e propagação de exógeno administrado agregados nativo associado microssomas alfa-synuclein, isolados de ratos transgênicos doentes alfa-synuclein.

Administração exógena de agregados de microssomas associados alfa-synuclein para os neurônios primários como um modelo de célula poderosos de formação de fibrilas

Aqui, nós apresentamos um protocolo usando um dispositivo de posicionamento do rato que permita a colocação apropriada dos ratos para a administração intranasal de uma formulação do peptide-siRNA do cérebro-alvejando permitindo o silenciamento de gene eficaz no sistema nervoso central.

Um dispositivo de posicionamento para a colocação de camundongos durante a entrega de siRNA intranasal ao sistema nervoso central

O objetivo deste artigo é delinear as etapas necessárias para a geração de fibrilas de alfa-synucleina monomérica, controle de qualidade subsequente e uso das fibrilas pré-formadas in vivo.

Geração de fibrilas pré-formadas Alpha-synuclein de monômeros e uso in vivo

Esse protocolo apresenta a fragmentação de Rayleigh como um processo leve para aerossolizar vetores de mRNA não virais. A deposição regional para vetores de mRNA aerossolizados é avaliada pelo modelo de Entrada Nasal Idealizada de Alberta (AINI). A expressão da proteína de fluorescência verde (GFP) em células pulmonares humanas representa a manutenção das funções fisicoquímicas e biológicas dos vetores de mRNA pós-aerossolizados.

Administração intranasal de poliplexos de mRNA via aerossóis de quebra de Rayleigh: Um método in vitro para deposição nasal e testes funcionais

Aprenda a técnica de administração intranasal de agregados de α-sinucleína em modelo murino para estudar a propagação prion-like da patologia da doença de Parkinson. Este método não cirúrgico permite avaliar a progressão da patologia do bulbo olfatório.

Técnica para administração intranasal de agregados de α-sinucleína

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