A remoção parcial imediata de complexos cumulus-oócitos: uma abordagem refinada para observação rápida da fertilização in vitro

Nossa pesquisa se concentra em melhorar os resultados da fertilização in vitro, avaliando se a remoção parcial imediata das compressas de oócitos do cumulus aumenta a fertilização. A eficiência da observação afeta a raça de fertilização e a qualidade do embrião e otimiza os procedimentos laboratoriais. Nosso objetivo é refinar as técnicas de fertilização in vitro para obter melhores resultados clínicos.

Estabelecemos que na remoção parcial medial do cumulus o oócito se comprime significativamente, aumenta a eficiência da observação da fertilização na fertilização in vitro. Isso leva a melhorar o tempo na avaliação de eventos de fertilização e potencialmente otimizar a qualidade do embrião e os resultados da fertilização in vitro. Nosso protocolo aumenta a eficiência da fertilização in vitro, reduzindo o tempo e minimizando a exposição ambiental e potencialmente melhorando a qualidade do embrião.

Ele oferece uma abordagem simplificada e eficaz em comparação com as técnicas tradicionais. Para começar, coloque os pratos de coleta de oócitos na incubadora a 37 graus Celsius durante a noite. Incube 12 mililitros de meio manipulador de folículos em tubos de ensaio de fundo redondo de 14 mililitros a 37 graus Celsius durante a noite.

Em seguida, transfira os tubos para o suporte de tubo de ensaio pré-aquecido 30 minutos antes da coleta do oócito. Em seguida, adicione nove mililitros de meio manipulador de folículo a um tubo de ensaio redondo de fundo de 14 mililitros e incube a 37 graus Celsius durante a noite. No dia da coleta do oócito, transfira 4,5 mililitros do meio para uma placa de coleta de oócitos pré-incubada coberta com dois mililitros de óleo de parafina 100%.

Em seguida, adicione 4,5 mililitros de meio de fertilização a um prato de coleta de oócitos e incube a 37 graus Celsius durante a noite. Depois, adicione um mililitro de meio de fertilização a um prato de seis centímetros coberto com óleo de parafina 100%. Para embotar e arredondar as pontas das pipetas de pasteur de vidro, queime-as em uma lâmpada de álcool por cerca de cinco segundos.

Prenda uma cabeça de sucção na ponta das pipetas pasteur para que ela possa tocar o fundo do prato sem arranhar. Enxágue o copo passando por suas pipetas em pratos de 10 centímetros com meio de manipulação de folículos. Resumidamente, use uma agulha de calibre 17 para recuperar os oócitos sob orientação por ultrassom transvaginal.

Despeje o fluido folicular coletado no tubo de ensaio de fundo redondo de 14 mililitros em um prato de 10 centímetros. Coloque o prato em uma plataforma de temperatura constante. Observe o OCCC sob um microscópio estéreo para confirmar a presença de oócitos e avaliar sua maturidade.

Confirme se há oócitos no OCCC e faça uma avaliação preliminar da maturidade do oócito. Pré-prepare uma pipeta de aspiração de silicone com uma pipeta pasteur polida de chama redonda. Aspire o OCCC enquanto levanta suavemente o prato de cultura na posição das nove às 10:00 com o dedo anelar esquerdo e inclina-o cerca de 15 graus para a esquerda.

Enquanto cuspia o OCCC aspirado na posição 11:00 do prato, suavemente alongado horizontalmente para a direita. Em seguida, observe o tamanho das células da granulosa ao redor do OCCC expandido. Agora, use uma pipeta pasteur para remover suavemente o excesso de células da granulose com um corte rápido para baixo no local apropriado no OCCC alongado.

Transfira o OCCC cortado para um prato de coleta, contendo a solução de lavagem OCCC. Despeje o fluido folicular restante em um recipiente de amostra estéril. Para começar, avalie a concentração, motilidade e morfologia dos espermatozoides da amostra de sêmen coletada sob um microscópio óptico.

Em seguida, transfira o pellet de esperma para um novo tubo de centrífuga e lave-o duas vezes no meio de fertilização. Incube-os a 6% de dióxido de carbono e 37 graus Celsius até que seja necessário. Depois de remover o excesso de células de granulose, adicione seis a oito OCCC e um mililitro de meio de fertilização ao prato de fertilização.

Inseminar OCCCs com espermatozóides modais em uma única gota, aproximadamente duas a três horas após a recuperação na placa de fertilização. Para fertilização de curto prazo, co-incube OCCCs com espermatozóides por quatro a seis horas. Após a incubação, remova mecanicamente as células do cumulus, ao redor dos oócitos.

Aspire os ovócitos usando uma pipeta com um diâmetro interno ligeiramente menor que os oócitos para garantir a remoção completa das células. Para confirmar a fertilização, observe a presença de dois corpos polares. Os oócitos, mostrando um segundo corpo polar, são considerados fertilizados.

Para fertilização regular, remova as células do cumulus usando as pipetas após 18 a 20 horas de co-incubação para avaliação da fertilização. Cultive os oócitos fertilizados por três a cinco dias após a coleta do oócito. Avalie a fertilização 20 horas após a inseminação para determinar o número de pronúcleos.

Posteriormente, cultive cada zigoto individualmente em uma gota média e transfira os embriões após a fertilização para um meio de clivagem. Transfira os embriões do terceiro dia para o meio blastócito e avalie no quinto dia. Relate dados contínuos como média e desvio padrão e expresse dados ordinais como proporções.

Das 47 pacientes que receberam inseminação de curto prazo, não foram observadas diferenças significativas em termos de idade das pacientes e número de oócitos recuperados. O tempo médio do procedimento foi significativamente menor na remoção parcial do grupo CCO, em comparação com o grupo controle, apesar de não terem sido encontradas diferenças significativas na taxa de clivagem, taxa ótima de embriões e taxa ótima de blastócitos. Em pacientes submetidas à fertilização in vitro tradicional, foram observadas semelhanças na idade das pacientes e no número de oócitos recuperados entre os dois grupos.

Embora tenha sido observado um tempo médio de operação ligeiramente menor na remoção parcial do grupo CCO, nenhuma diferença estatisticamente significativa foi evidente. Como no grupo anterior, não foram identificadas discrepâncias significativas na taxa de clivagem, taxa ideal de embriões e taxa ideal de blastócitos.