Um modelo de pancreatite crônica obstrutiva estabelecido por eletrocoagulação
31 de outubro de 2025
O presente protocolo descreve uma nova abordagem para modelar a pancreatite obstrutiva crônica, que envolve a visualização do ducto pancreático e a eletrocoagulação do ducto pancreático para causar obstrução do ducto pancreático.
Existem muitos métodos para a construção de modelos animais de pancreatite crônica, incluindo injeção intraperitoneal de sódio e ligadura do ducto pancreático, que têm suas limitações. Nossa equipe desenvolveu recentemente um novo modelo de eletrocoagulação de pancreatite crônica em camundongos, que tem a vantagem de não exigir drogas de injeção prolongada ou método difícil de dominar. E eles podem facilmente estabelecer um modelo de pancreatite crônica.
O uso de coagulação elétrica para induzir pancreatite crônica em camundongos fornece um modelo mais conveniente e experimental, oferecendo um caminho promissor para futuras pesquisas neste campo. Para começar, coloque o mouse anestesiado em uma almofada de aquecimento para manter a temperatura corporal. Usando um aparador, raspe o cabelo entre o peito e a parte inferior do abdômen.
Em seguida, use uma tesoura para fazer uma incisão de dois centímetros de comprimento no abdômen central, seguida de uma incisão de um centímetro entre o abdômen superior e o apêndice xifóide. Use um expansor abdominal para localizar a área do pâncreas para eletrocoagulação. Usando um cotonete estéril, identifique o duodeno pela parte traseira do abdômen superior esquerdo e gire-o para visualizar o ducto biliar que conecta o fígado.
Oclua temporariamente o ducto colédoco proximal usando um clipe microvascular para evitar a infusão retrógrada no fígado. Conecte o tubo de polietileno de 0,25 por 0,35 milímetros a uma agulha de 0,25 milímetros e perfure a área circundante da ampola, visando a grande papila duodenal. Insira o tubo na papila e passe-o até a metade do ducto biliar e, em seguida, interrompa a entrada.
Inicie a bomba de infusão e infunda solução de azul de metileno a 0,2% até que o ducto pancreático fique azul. Após a infusão, puxe o tubo de polietileno para fora e remova o clipe microvascular. Use cotonetes estéreis para fixar o pâncreas e direcione a faca de eletrocoagulação para a área azulada.
Depois de definir os parâmetros operacionais da eletrocoagulação, use cobre puro como material do eletrodo e aplique o tratamento no pâncreas por dois a três segundos, evitando os vasos sanguíneos. Continue a eletrocoagulação até que a região manchada de azul de metileno mude de cor para amarelo ou marrom. Quando a solução de coloração azul não estiver mais visível no pâncreas, interrompa a eletrocoagulação.
Após a cirurgia, coloque o mouse em uma caixa de polietileno forrada com material de cama. Após a eletrocoagulação do ducto pancreático, anestesiar o mouse e colocá-lo em uma plataforma de operação. Para coletar sangue através do plexo orbital, segure suavemente a pele nas costas para criar uma leve saliência do globo ocular.
Em seguida, coloque a extremidade de um tubo capilar no canto do olho e insira-o suavemente sob o globo ocular em um ângulo de 30 a 45 graus. Gire o capilar até que o sangue comece a fluir. Após a coleta de sangue, feche as pálpebras aplicando uma leve pressão com gaze.
Centrifugar o sangue a 1.200 g durante 15 minutos e recolher o sobrenadante num novo tubo. Meça amilase, bilirrubina e ácido hialurônico usando kits disponíveis comercialmente, seguindo as recomendações do fabricante. Em seguida, coloque o mouse sacrificado na mesa de operação ajustada a quatro graus Celsius.
Usando tesouras e pinças, faça uma incisão em V na parede abdominal para expor a cavidade abdominal. Remova o pâncreas e divida-o em três partes para colorir. Fixe o pâncreas em solução de poliformaldeído a 4% e, em seguida, incorpore o pâncreas fixo à parafina para seccionamento.
Corte os blocos de parafina em seções de 0,5 milímetro de espessura e core-os com hematoxilina e eosina, bem como com a coloração de Masson para análise imuno-histoquímica. Observe o tecido pancreático corado sob um microscópio óptico. A coloração de hematoxilina-eosina mostrou células acinares pancreáticas dispersas e evidência de pancreatite crônica no grupo de eletrocoagulação no dia 14.
No dia 28, foram observados sinais de recuperação tecidual e reversão da patologia nas células acinares pancreáticas. A coloração de Masson revelou significativamente mais fibrose no grupo de eletrocoagulação em comparação com o grupo simulado. A coloração imuno-histoquímica mostrou níveis elevados de alfa um, colágeno tipo um e actina de músculo liso alfa no grupo de eletrocoagulação, indicando maior grau de pancreatite crônica.
Os níveis de ácido hialurônico aumentaram no grupo de eletrocoagulação, atingindo o pico por volta do dia 21, enquanto permaneceram estáveis no grupo simulado. Os níveis de bilirrubina aumentaram significativamente no dia 14 no grupo de eletrocoagulação, mostrando um pico por volta do dia 21, enquanto o grupo simulado não apresentou alterações. Os níveis de amilase no grupo de eletrocoagulação aumentaram no dia 14, seguidos por um declínio no dia 28, com o grupo simulado mostrando pouca variação.
Visão Geral
Este protocolo descreve um método novo para modelar pancreatite obstrutiva crônica em camundongos através da eletrocoagulação do ducto pancreático. Esta abordagem simplifica o processo de indução de pancreatite crônica em comparação com métodos tradicionais.
Componentes Principais do Estudo
Área da Ciência
- Neurociência
- Biologia
- Pesquisa em Pancreatite Crônica
Fundo
- A pancreatite crônica é uma condição debilitante com métodos de modelagem eficazes limitados.
- Modelos tradicionais frequentemente requerem procedimentos complexos ou administração de medicamentos a longo prazo.
- A eletrocoagulação apresenta uma alternativa menos invasiva para induzir pancreatite crônica.
- Este estudo visa refinar o modelo para melhor reprodutibilidade e facilidade de uso.
Propósito do Estudo
- Desenvolver um modelo de eletrocoagulação confiável para pancreatite crônica em camundongos.
- Avaliar as mudanças patológicas no tecido pancreático após a eletrocoagulação.
- Avaliar os marcadores bioquímicos associados à pancreatite crônica.
Métodos Utilizados
- Eletrocoagulação do ducto pancreático em camundongos anestesiados.
- Infusão de azul de metileno para visualizar o ducto pancreático.
- Análise histológica do tecido pancreático usando coloração hematoxilina-eosina e Masson.
- Medição dos níveis séricos de amilase, bilirrubina e ácido hialurônico.
Principais Resultados
- Evidência histológica de pancreatite crônica foi observada em camundongos eletrocoagulados.
- Fibrose aumentada foi observada em comparação com o grupo controle.
- Os marcadores bioquímicos mostraram mudanças significativas, indicando a gravidade da condição.
- Sinais de recuperação nas células acinares pancreáticas foram notados ao longo do tempo.
Conclusões
- O modelo de eletrocoagulação induz efetivamente pancreatite crônica em camundongos.
- Este método oferece uma abordagem mais simples e reprodutível para pesquisas futuras.
- Os achados contribuem para a compreensão da fisiopatologia da pancreatite crônica.
Perguntas Frequentes
Executive Industry Relevance
Robust preclinical models of chronic pancreatitis are essential for target validation and mechanistic de-risking in early-stage drug discovery. The electrocoagulation-based mouse model offers a reproducible and operationally accessible platform for evaluating disease mechanisms and candidate interventions. This model addresses key limitations of traditional approaches, supporting predictive confidence and translational continuity in pancreatic disease research portfolios.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Enables interrogation of fibrotic and inflammatory pathways relevant to chronic pancreatitis.
- Supports functional target validation by recapitulating hallmark pathological features.
- Facilitates mechanistic de-risking through quantitative biochemical and histological outputs.
Screening & Assay Development
- Provides a standardized in vivo system for evaluating candidate therapeutics targeting pancreatic fibrosis and inflammation.
- Delivers reproducible quantitative readouts, including serum amylase, bilirubin, and hyaluronic acid levels.
- Enables histological assay development using HE and Masson staining for fibrosis assessment.
Translational & Preclinical Research
- Aligns with disease-relevant endpoints observed in human chronic pancreatitis.
- Supports continuity from discovery through preclinical validation by modeling progressive and reversible pathology.
- Facilitates risk-adjusted advancement decisions based on biomarker and histopathological alignment.
Pipeline & Workflow Integration
This electrocoagulation model integrates into the discovery-to-preclinical continuum for pancreatic disease research and therapeutic evaluation.
- Discovery Biology: Enables hypothesis testing of fibrotic and inflammatory mechanisms in a controlled in vivo context.
- Screening: Provides a reproducible platform for quantitative assessment of candidate interventions.
- Analytics: Supports comparative analysis of biochemical and histological markers across experimental conditions.
- Translational Research: Models disease progression and partial recovery, mirroring clinical trajectories.
- Enterprise Reuse: Offers a scalable and accessible model for cross-program application in pancreatic research portfolios.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Increases predictive confidence and reduces mechanistic ambiguity in target and pathway evaluation.
- Operational Value: Streamlines model establishment and standardizes data outputs for cross-study comparability.
- Strategic Value: Improves go/no-go decision quality and capital allocation by providing robust preclinical evidence.
- Portfolio Impact: Enables risk-adjusted prioritization of pancreatic disease programs based on translationally relevant data.
Implementation Considerations
- Requires surgical proficiency and familiarity with small animal handling.
- Necessitates access to electrocoagulation instrumentation and histological analysis infrastructure.
- Demands standardized protocols for reproducibility across research teams.
- Adaptation to other rodent strains or disease models may require protocol optimization.
- Model outputs are limited to chronic pancreatitis features and may not capture all aspects of human disease heterogeneity.
