Estabelecendo um modelo de endométrio fino em camundongos

O endométrio fino tem sido amplamente reconhecido como a causa crítica da infertilidade. Os estudos sobre a patogênese do endométrio fino dependem de modelos animais, tornando crucial a seleção de um modelo apropriado. Aqui, descrevemos um protocolo detalhado que produz um modelo endometrial fino confiável e reprodutível em camundongos.

A operação é traumática, pois precisamos dissecar o camundongo e expor o chifre uterino do camundongo para manipulação. Uma operação inadequada pode causar infecção ou até mesmo levar à morte dos camundongos. De fato, treinamento e experiência cuidadosos são necessários antes da operação experimental.

Desenvolvemos com sucesso um modelo endometrial com tempo de infusão variando de um a três minutos para replicar os vários graus de sintomas endometriais finos observados em casos clínicos. Isso nos permite criar modelos com diferentes níveis de dano, dependendo das necessidades específicas de nossa pesquisa. O método utilizado em nosso protocolo oferece a vantagem de baixo custo, adequação, bem como período experimental.

Estuda o mecanismo patológico e o tratamento em três técnicas iniciais em comparação com outras técnicas. Para começar, posicione o mouse anestesiado em decúbito dorsal na mesa de operação pré-aquecida e, usando fita médica, prenda os membros do mouse. Empregando tesouras e pinças estéreis, faça uma incisão de um centímetro no abdômen, localizada a cerca de um centímetro do orifício uretral, estendendo-se até a cavidade peritoneal.

Mova suavemente as entranhas para o lado com uma pinça estéril para localizar o útero. Exponha o corno uterino direito e aplique pinças hemostáticas na extremidade proximal perto do colo do útero e na extremidade distal perto do ovário. Com uma seringa de calibre 25, instilar aproximadamente 50 microlitros de etanol a 95% na cavidade uterina, segurando a agulha paralela ao corno uterino.

Manter a seringa durante um a cinco minutos, conforme apropriado. Em seguida, retire o etanol da cavidade uterina e lave a cavidade uterina com solução salina estéril cinco vezes para remover o etanol restante. Agora, remova os grampos hemostáticos e retorne o útero e as entranhas à sua posição original.

Usando suturas cirúrgicas absorvíveis 5/0, suturar o peritônio, seguido da epiderme. Para começar, posicione um modelo de camundongo de endométrio fino eutanasiado na mesa de dissecção e corte as suturas usando uma tesoura cirúrgica para expor o útero. Em seguida, usando uma pinça cirúrgica, extraia todo o útero com cuidado e retire o útero das entranhas circundantes.

Remova imediatamente os dois chifres uterinos e divida cada chifre em três a quatro pequenos segmentos. Coloque os tecidos uterinos em um mililitro de paraformaldeído a 4% tomado em um tubo de microcentrífuga de 1,5 mililitro. Coloque as amostras fixadas em formalina em de tecido e transfira os de tecido através de uma série de concentrações de etanol, seguidas de xileno e parafina.

Encha um molde de cera com cera de parafina derretida aquecida a 55 graus Celsius. Use uma pinça aquecida para transferir rapidamente os segmentos de tecido infiltrados do de incorporação para o molde de cera. Uma vez que os segmentos de tecido estejam posicionados corretamente, coloque a parte inferior do de incorporação em cima do molde de histologia.

Em seguida, coloque o molde diretamente em uma placa de resfriamento ajustada para quatro graus Celsius por pelo menos 20 minutos para permitir que a parafina solidifique. Em seguida, remova a amostra do molde e use um aparador de parafina para aparar o excesso de cera ao redor. A espessura endometrial e o número de glândulas endometriais diminuíram significativamente nos grupos de um, dois e três minutos em comparação com o grupo controle.

Adesão uterina severa e cavidade uterina quase invisível foram observadas nos grupos de quatro e cinco minutos, e nenhuma glândula endometrial foi encontrada. A fibrose endometrial aumentou com a duração da infusão de etanol, como demonstrado pela coloração excessiva em grupos de um a cinco minutos em comparação com o controle.