Um modelo de camundongo para comprometimento cognitivo vascular e demência baseado em estenose bilateral assimétrica da artéria carótida comum guiada por agulha

Nosso laboratório costumava identificar os novos tratamentos para acidente vascular cerebral isquêmico e comprometimento cognitivo vascular e demência. Neste estudo, criamos um novo modelo de camundongos para estudar o comprometimento cognitivo vascular e a demência.

O principal desafio é que comprometimento cognitivo vascular e demência é um termo complexo que une muitas representações e causas clínicas. E assim os pesquisadores devem sempre ter isso em mente ao selecionar um modelo animal para seus experimentos.

Estabelecemos um novo modelo VCID que permite o monitoramento dinâmico das ondas cerebrais com ressonância magnética na inflamação mais distante e o mecanismo desempenha um papel crítico no VCID.

Nosso modelo é altamente confiável, permite ajustar seus parâmetros dependendo das necessidades do pesquisador, tem custo ultrabaixo e também permite a ressonância magnética em animais vivos. A inflamação desempenha um papel crítico no VCID, e dissecaremos ainda mais o mecanismo de como a inflamação leva à demência e como melhorar a doença modulando a inflamação.

[Narrador] Para começar, coloque os fragmentos de agulha de quatro milímetros de comprimento em uma placa de Petri estéril. Bata suavemente a ponta afiada das agulhas contra uma superfície dura para embotá-las. Usando um porta-agulhas, separe cuidadosamente as agulhas de seus pedaços de plástico e pré-corte suturas de seda 7-0 em pedaços de um a dois centímetros de comprimento. Depois de anestesiar o mouse, posicione-o em uma almofada de aquecimento com o lado ventral para cima. Esterilize o local da cirurgia com solução de Betadine contendo 10% de iodo e desiodize a pele com etanol a 70%. Certifique-se de que o nível de anestesia seja adequado com um teste de pinça do dedo do pé. Agora, faça uma incisão vertical na linha média ao longo da traqueia. Usando micro fórceps, separe suavemente as glândulas tireóides bilaterais e, em seguida, puxe para trás a pele e o tecido subjacente usando pequenos afastadores de pele estéreis. Sob o microscópio, use uma pinça angular para expor cuidadosamente e dissecar sem rodeios um dos CCAs do nervo vago e da bainha circundante. Se o CCA tende a aderir à pinça, umedeça o local da incisão com água estéril ou PBS. Se necessário, coloque uma pequena seringa de plástico sob o pescoço para suporte de postura. Em seguida, usando uma pinça angular, passe três fragmentos de sutura de seda 7-0 pré-cortados sob o CCA, espaçando-os aproximadamente um milímetro. Crie um nó duplo muito frouxo ao redor do CCA em um dos fragmentos de sutura. Posicione o fragmento de agulha preparado paralelamente ao CCA, colocando-o dentro do nó solto. Aperte cuidadosamente o nó primário ao redor da agulha e do CCA até que o fluxo sanguíneo seja interrompido. Em seguida, prenda-o com um nó secundário. Puxe suavemente a agulha para permitir que o fluxo sanguíneo parcial seja retomado e apare as extremidades da sutura. Confirme se todas as três bandas de sutura no CCA estão firmemente amarradas sem serem tão apertadas a ponto de obstruir totalmente o fluxo sanguíneo. Certifique-se de que o CCA não esteja pálido a jusante dos nós e que as suturas estejam espaçadas uniformemente. Repita o isolamento e a ligadura do CCA do outro lado e confirme a distância correta e a restauração do fluxo sanguíneo. A imagem bidimensional do speckle a laser revelou que a hipoperfusão cerebral foi mais pronunciada no hemisfério esquerdo e persistiu por pelo menos 24 semanas após a cirurgia. A taxa de sobrevivência de camundongos machos pós-cirurgia ao longo de seis semanas foi registrada em 81,6%, com maior mortalidade durante a primeira semana. Imagens de ressonância magnética ponderadas em T2 detectaram regiões hipo ou hiperintensas em várias regiões cerebrais em camundongos operados por ABCS, indicando lesão cerebral. Mapas de cores codificados direcionalmente a partir de imagens de tensor de difusão mostraram danos estruturais em camundongos ABCS, em comparação com o grupo Sham. O teste do labirinto aquático de Morris mostrou latência prolongada para escapar em camundongos operados por ABCS, indicando dificuldades de aprendizagem significativas. A redução do tempo gasto no quadrante-alvo durante o teste da sonda confirmou ainda mais o comprometimento da memória. Esses déficits persistiram por pelo menos 24 semanas após a cirurgia.