Desenvolvimento e aplicação de tirosina fosfatases reguladas por rapamicina

Nosso trabalho se concentra no desenvolvimento de ferramentas que regulam a atividade das tirosina fosfatases. Aplicamos o sistema regulado pela rapamicina a várias fosfatases e mostramos que ele confere regulação específica e temporal de nossa proteína de interesse. Nosso objetivo foi determinar as alterações morfológicas induzidas pela ativação da fosfatase SHIP-2.

A ferramenta RapR nos permitiu determinar os efeitos transitórios da ativação da fosfatase nas células e determinamos efeitos complexos específicos a jusante de uma fosfatase envolvida na disseminação e migração celular. Além disso, determinamos comportamentos orientados por domínio da mesma fosfatase. Isso contribuiu para nossa compreensão dos mecanismos da fosfatase na regulação da morfodinâmica celular e na sinalização a jusante.

Nossa ferramenta RapR oferece a capacidade de regular específica e temporalmente uma fosfatase de interesse. Uma vez inserido na fosfatase, o domínio iFKBP atua como um interruptor alostérico que, uma vez ligado à rapamicina, restaura a atividade da fosfatase, atuando como um interruptor de ligação. Também podemos usar o sistema regulado por rapamicina para reconstruir complexos de sinalização.

Nossas descobertas usando a ferramenta RapR abriram a porta para determinar os efeitos do interactoma do SHIP-2 em sua capacidade de regular a atividade celular. Descobrimos que os SHIP-2s na ligação ao domínio SH2 são cruciais na retração celular. Usando a ferramenta RapR, podemos investigar mais a fundo quais parceiros vinculativos podem ser responsáveis por esta regulamentação.