Name: Revelando o transporte e os efeitos xenobióticos em mitocôndrias isoladas: insights de ensaios respirométricos e enzimáticos (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-03-07T12:20:00.000+00:00
Duration: 8 min 3 s
Description: Descubra ensaios respirométricos e enzimáticos para avaliar efeitos de xenobióticos em mitocôndrias isoladas de ratos, mosquitos e carrapatos. Este método computacional acelera o desenvolvimento de biopesticidas seguros e específicos.

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<meta charset="utf8"></head><body>Alterando a função mitocondrial para aplicações terapêuticas e bioinseticidas

<ol><li>Javadov, S., Kozlov, A. V., Camara, A. K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondria+in+health+and+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">Mitochondria in health and diseases.</a> Cells. 9 (5), 1177(2020).</li>
<li>Kummer, E., Ban, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+and+regulation+of+protein+synthesis+in+mitochondria%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Mechanisms and regulation of protein synthesis in mitochondria.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 22 (5), 307-325 (2021).</li>
<li>Bock, F. J., Tait, S. W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondria+as+multifaceted+regulators+of+cell+death%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Mitochondria as multifaceted regulators of cell death.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 21 (2), 85-100 (2019).</li>
<li>Fulda, S., Galluzzi, L., Kroemer, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+mitochondria+for+cancer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Drug+Discov%22%5BJournal%5D)">Targeting mitochondria for cancer therapy.</a> Nat Rev Drug Discov. 9 (6), 447-464 (2010).</li>
<li>Liu, Y., Shi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondria+as+a+target+in+cancer+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22MedComm%22%5BJournal%5D)">Mitochondria as a target in cancer treatment.</a> MedComm. 1 (2), 129-139 (2020).</li>
<li>Duque, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insecticidal+activity+of+essential+oils+from+American+native+plants+against+Aedes+aegypti+%28Diptera%3A+Culicidae%29%3A+an+introduction+to+their+possible+mechanism+of+action%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Insecticidal activity of essential oils from American native plants against Aedes aegypti (Diptera: Culicidae): an introduction to their possible mechanism of action.</a> Sci Rep. 13 (1), 2989(2023).</li>
<li>Kesari, K. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plant-derived+natural+biomolecule+picein+attenuates+Menadione+induced+oxidative+stress+on+neuroblastoma+cell+mitochondria%5BTitle%5D)+AND+%22Antioxidants+%28Basel%2C+Switzerland%29%22%5BJournal%5D)">Plant-derived natural biomolecule picein attenuates Menadione induced oxidative stress on neuroblastoma cell mitochondria.</a> Antioxidants (Basel, Switzerland). 9 (6), 552(2020).</li>
<li>Vanegas-Estévez, T., Duque, F. M., Urbina, D. L., Vesga, L. C., Mendez-Sanchez, S. C., Duque, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Design+and+elucidation+of+an+insecticide+from+natural+compounds+targeting+mitochondrial+proteins+of+Aedes+aegypti%5BTitle%5D)+AND+%22Pestic+Biochem+Physiol%22%5BJournal%5D)">Design and elucidation of an insecticide from natural compounds targeting mitochondrial proteins of Aedes aegypti.</a> Pestic Biochem Physiol. 198, 105721(2024).</li>
<li>Hao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondria-targeted+nanocarriers+doubled+the+toxicity+of+oxidative+phosphorylation+and+ATP+synthesis+disruptive+insecticides+against+Spodoptera+frugiperda%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Sci+Nano%22%5BJournal%5D)">Mitochondria-targeted nanocarriers doubled the toxicity of oxidative phosphorylation and ATP synthesis disruptive insecticides against Spodoptera frugiperda.</a> Environ Sci Nano. 9 (10), 3873-3884 (2022).</li>
<li>Lees, R. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+insecticide+screening+platforms+indicate+that+Mitochondrial+Complex+I+inhibitors+are+susceptible+to+cross-resistance+by+mosquito+P450s+that+metabolise+pyrethroids%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">New insecticide screening platforms indicate that Mitochondrial Complex I inhibitors are susceptible to cross-resistance by mosquito P450s that metabolise pyrethroids.</a> Sci Rep. 10 (1), 16232(2020).</li>
<li>Leung, M. C. K., Meyer, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondria+as+a+target+of+organophosphate+and+carbamate+pesticides%3A+Revisiting+common+mechanisms+of+action+with+new+approach+methodologies%5BTitle%5D)+AND+%22Reprod+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Mitochondria as a target of organophosphate and carbamate pesticides: Revisiting common mechanisms of action with new approach methodologies.</a> Reprod Toxicol. 89, 83-92 (2019).</li>
<li>Al-Harbi, N. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+insecticidal+effects+of+plants+essential+oils+extracted+from+basil%2C+black+seeds+and+lavender+against+Sitophilus+oryzae%5BTitle%5D)+AND+%22Plants%22%5BJournal%5D)">Evaluation of insecticidal effects of plants essential oils extracted from basil, black seeds and lavender against Sitophilus oryzae.</a> Plants. 10 (5), 829(2021).</li>
<li>Kim, S. -I., Roh, J. -Y., Kim, D. -H., Lee, H. -S., Ahn, Y. -J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insecticidal+activities+of+aromatic+plant+extracts+and+essential+oils+against+Sitophilus+oryzae+and+Callosobruchus+chinensis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Stored+Prod+Res%22%5BJournal%5D)">Insecticidal activities of aromatic plant extracts and essential oils against Sitophilus oryzae and Callosobruchus chinensis.</a> J Stored Prod Res. 39 (3), 293-303 (2003).</li>
<li>Kielkopf, C. L., Bauer, W., Urbatsch, I. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bradford+assay+for+determining+protein+concentration%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb+Protoc%22%5BJournal%5D)">Bradford assay for determining protein concentration.</a> Cold Spring Harb Protoc. 2020 (4), 102269(2020).</li>
<li>Zor, T., Selinger, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Linearization+of+the+Bradford+protein+assay+increases+its+sensitivity%3A+theoretical+and+experimental+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Biochem%22%5BJournal%5D)">Linearization of the Bradford protein assay increases its sensitivity: theoretical and experimental studies.</a> Anal Biochem. 236 (2), 302-308 (1996).</li>
<li>Voss, D. O., Campello, A. P., Bacila, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+respiratory+chain+and+the+oxidative+phosphorylation+of+rat+brain+mitochondria%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Biophys+Res+Commun%22%5BJournal%5D)">The respiratory chain and the oxidative phosphorylation of rat brain mitochondria.</a> Biochem Biophys Res Commun. 4, 48-51 (1961).</li>
<li>Gonçalves, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Composition+and+biological+activity+of+the+essential+oil+from+Thapsia+minor%2C+a+new+source+of+geranyl+acetate%5BTitle%5D)+AND+%22Ind+Crops+Prod%22%5BJournal%5D)">Composition and biological activity of the essential oil from Thapsia minor, a new source of geranyl acetate.</a> Ind Crops Prod. 35 (1), 166-171 (2012).</li>
<li>Somlo, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+des+lactico-cytochrome+c+reductases+%28d-et+l-%29+de+la+levure+aerobie+par+les+lactates+%28d-+et+l%29%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys+Acta+-+Gen+Subj%22%5BJournal%5D)">Induction des lactico-cytochrome c reductases (d-et l-) de la levure aerobie par les lactates (d- et l).</a> Biochim Biophys Acta - Gen Subj. 97 (2), 183-201 (1965).</li>
<li>Mason, T. L., Poyton, R. O., Wharton, D. C., Schatz, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytochrome+c+Oxidase+from+Bakers%27+Yeast%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Cytochrome c Oxidase from Bakers' Yeast.</a> J Biol Chem. 248 (4), 1346-1354 (1973).</li>
<li>Nelson, D. L., Cox, M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aNelson%2C+DL+%22Lehninger+Principles+of+Biochemistry%3A+International+Edition%22">Lehninger Principles of Biochemistry: International Edition</a>. , Macmillan Learning. https://play.google.com/store/books/details?id=wZqp0AEACAAJ (2021).</li>
<li>Djafarzadeh, S., Jakob, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-resolution+respirometry+to+assess+mitochondrial+function+in+permeabilized+and+intact+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">High-resolution respirometry to assess mitochondrial function in permeabilized and intact cells.</a> J Vis Exp. 120, e54985(2017).</li>
<li>Maxwell, J. T., Tsai, C. -H., Mohiuddin, T. A., Kwong, J. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analyses+of+mitochondrial+calcium+influx+in+isolated+mitochondria+and+cultured+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Analyses of mitochondrial calcium influx in isolated mitochondria and cultured cells.</a> J Vis Exp. (134), e57225(2018).</li>
<li>Vesga, L. C., Silva, A. M. P., Bernal, C. C., Mendez-Sánchez, S. C., Romero Bohórquez, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tetrahydroquinoline%2F4%2C5-dihydroisoxazole+hybrids+with+a+remarkable+effect+over+mitochondrial+bioenergetic+metabolism+on+melanoma+cell+line+B16F10%5BTitle%5D)+AND+%22Med+Chem+Res%22%5BJournal%5D)">Tetrahydroquinoline/4,5-dihydroisoxazole hybrids with a remarkable effect over mitochondrial bioenergetic metabolism on melanoma cell line B16F10.</a> Med Chem Res. 30, 2127-2143 (2021).</li>
<li>Vesga, L. C., Bueno, Y., Stashenko, E., Mendez Sánchez, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efecto+del+aceite+esencial+de+Eucalyptus+citriodora+sobre+el+metabolismo+energ%C3%A9tico+mitocondrial%5BTitle%5D)+AND+%22Rev+Colomb+Qu%C3%ADm%22%5BJournal%5D)">Efecto del aceite esencial de Eucalyptus citriodora sobre el metabolismo energético mitocondrial.</a> Rev Colomb Quím. 43 (2), 10-17 (2015).</li>
<li>Borrero-Landazabal, M. A., Duque, J. E., Mendez-Sanchez, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Model+to+design+insecticides+against+Aedes+aegypti+using+in+silico+and+in+vivo+analysis+of+different+pharmacological+targets%5BTitle%5D)+AND+%22Comp+Biochem+Physiol+C+Toxicol+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Model to design insecticides against Aedes aegypti using in silico and in vivo analysis of different pharmacological targets.</a> Comp Biochem Physiol C Toxicol Pharmacol. 229, 108664(2020).</li>
<li>Valmas, N., Zuryn, S., Ebert, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+uncouplers+act+synergistically+with+the+fumigant+phosphine+to+disrupt+mitochondrial+membrane+potential+and+cause+cell+death%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicology%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial uncouplers act synergistically with the fumigant phosphine to disrupt mitochondrial membrane potential and cause cell death.</a> Toxicology. 252 (1-3), 33-39 (2008).</li>
<li>Slocińska, M., Rosinski, G., Jarmuszkiewicz, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+mitochondrial+uncoupling+protein+4+and+ATP-sensitive+potassium+channel+cumulatively+decreases+superoxide+production+in+insect+mitochondria%5BTitle%5D)+AND+%22Protein+Pept+Lett%22%5BJournal%5D)">Activation of mitochondrial uncoupling protein 4 and ATP-sensitive potassium channel cumulatively decreases superoxide production in insect mitochondria.</a> Protein Pept Lett. 23 (1), 63-68 (2016).</li>
<li>Borrero Landazabal, M. A., Carreño Otero, A. L., Kouznetsov, V. V., Duque Luna, J. E., Mendez-Sanchez, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alterations+of+mitochondrial+electron+transport+chain+and+oxidative+stress+induced+by+alkaloid-like+%CE%B1-aminonitriles+on+Aedes+aegypti+larvae%5BTitle%5D)+AND+%22Pestic+Biochem+Physiol%22%5BJournal%5D)">Alterations of mitochondrial electron transport chain and oxidative stress induced by alkaloid-like α-aminonitriles on Aedes aegypti larvae.</a> Pestic Biochem Physiol. 144, 64-70 (2018).</li>
<li>Castillo-Morales, R. M., Carreño Otero, A. L., Mendez-Sanchez, S. C., Da Silva, M. A. N., Stashenko, E. E., Duque, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+affectation%2C+DNA+damage+and+AChE+inhibition+induced+by+Salvia+officinalis+essential+oil+on+Aedes+aegypti+larvae%5BTitle%5D)+AND+%22Comp+Biochem+Physiol+C+Toxicol+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial affectation, DNA damage and AChE inhibition induced by Salvia officinalis essential oil on Aedes aegypti larvae.</a> Comp Biochem Physiol C Toxicol Pharmacol. 221, 29-37 (2019).</li>
<li>Montagut, D. C., Bueno, Y., Vesga, L. C., Stashenko, E. E., Mendez-Sanchez, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cymbopogon+flexuosus+%28nees+ex+steud.%29+w.+watson+essential+oil+effect+on+mitochondrial+bioenergetics%5BTitle%5D)+AND+%22J+Essent+Oil+Res%22%5BJournal%5D)">Cymbopogon flexuosus (nees ex steud.) w. watson essential oil effect on mitochondrial bioenergetics.</a> J Essent Oil Res. 34 (3), 233-239 (2022).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>2,6-diclorofenolindofenol</td><td>Merck</td><td>119814</td><td>Prepare no mesmo dia de uso.</td></tr><tr><td>Reagente de Bradford</td><td>Merck</td><td>B6916</td><td></td></tr><tr><td>BSA</td><td>Merck</td><td>A7030</td><td></td></tr><tr><td>Carvacrol</td><td>Merck</td><td>W224511</td><td></td></tr><tr><td>Citocromo c</td><td>Merck</td><td>C2506</td><td>Conversor fotossensível cobri-lo com folha de alumínio. Em solução, deve ser armazenado no freezer.</td></tr><tr><td>D-manitol</td><td>Merck</td><td>M4125</td><td></td></tr><tr><td>EGTA</td><td>Merck</td><td>>E3889</td><td></td></tr><tr><td>Ácido etilenodiaminotetracético sal tetrassódico di-hidratado</td><td>Merck</td><td>E6511</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Merck</td><td>H3375</td><td></td></tr><tr><td>KCN</td><td>Merck</td><td>60178</td><td>Em solução funciona por 2 semanas.</td></tr><tr><td>KH2PO4</td><td>Merck</td><td>P5655</td><td></td></tr><tr><td>Multiskan FC Microplate</td><td>Photometer Thermo Scientific&nbsp;</td><td></td><td></td>51119100</tr><tr><td>Na2HPO4</td><td>Merck</td><td>567550</td><td></td></tr><tr><td>Oroboros O2k&nbsp;</td><td>Oroboros Instruments</td><td>10203-03</td><td>https://www.oroboros.at/index.php/product/o2k-startup/</td></tr> <tr><td>Fenazina metossulfato&nbsp;</td><td>Merck</td><td>P9625</td><td>Prepare no mesmo dia de uso.</td></tr><tr><td>Ferricianeto de potássio</td><td>Merck</td><td>244023</td><td>Prepare no mesmo dia de uso.</td></tr><tr>Tubo <td></td><td></td><td></td><td>homogeneizador de tecidos Potter Elvehjem</td></tr><tr><td>Rotenona</td><td>Merck</td><td>557368</td><td>Solúvel em etanol. Conver fotossensível cobri-lo com folha de alumínio. Em solução, deve ser armazenado no freezer.</td></tr><tr><td>Succinato de sódio</td><td>Merck</td><td>S9637</td><td>Em solução, deve ser armazenado no freezer.</td></tr><tr><td>Sacarose</td><td>Merck</td><td>S0389</td><td></td></tr><tr><td>&beta;-Nicotinamida adenina dinucleotídeo, hidrato de sal dissódico reduzido</td><td>Merck</td><td>N8129</td><td>Conversor fotossensível cobri-lo com folha de alumínio. Em solução, deve ser armazenado no freezer.</td></tr></tbody></table>

revelando o transporte e os efeitos xenobióticos em mitocôndrias isoladas: insights de ensaios respirométricos e enzimáticos

Unveiling Xenobiotic Transport and Effects in Isolated Mitochondria: Insights from Respirometric and Enzymatic Assays

Antes de analisar os resultados obtidos com este protocolo, é fundamental lembrar um pouco sobre a bioquímica da cadeia de transporte de elétrons nas mitocôndrias. Primeiro, o NADH fornece um par de elétrons para os centros de oxidorredução localizados no complexo I. Lá, inicia-se o transporte de elétrons que passam do complexo I para a ubiquinona, posteriormente para o complexo III, que os doa para o citocromo c, e finalmente para o complexo IV, onde o oxigênio é o aceptor final de elétrons, reduzindo-o a água. Por outr...

Revelando o transporte e os efeitos xenobióticos em mitocôndrias isoladas: insights de ensaios respirométricos e enzimáticos

Mitochondria are often referred to as the cell's powerhouse due to their crucial role in energy production through the electron transport chain (ETC). ...

unveiling-xenobiotic-transport-effects-isolated-mitochondria-insights

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Bioquímica

A comparação do potencial da membrana mitocondrial entre as amostras produz informações valiosas sobre o status celular. São descritas etapas detalhadas para isolar mitocôndrias e avaliar a resposta a inibidores e desacopladores usando fluorescência. O método e a utilidade deste protocolo são ilustrados pelo uso de uma cultura de células e modelo animal de estresse celular.

Isolamento e Análise Funcional de mitocôndrias de células cultivadas e mouse Tissue

Métodos para biópsia de vasto lateral, a preparação de mitocôndrias purificada e profiling respirométrico são descritos. O uso de volume muscular pequeno torna esta técnica adequada para aplicações de pesquisa clínica.

Preparação e Avaliação respirométrico de mitocôndrias isoladas de tecido muscular esquelético Obtido por meio de agulha de biópsia percutânea

Os métodos apresentados fornecem instruções passo a passo para a realização de uma coleção de ensaios respirométricos baseados em microplacas usando mitocôndrias isoladas de quantidades mínimas de músculo esquelético de camundongo. Esses ensaios são capazes de medir mudanças/adaptações mecanicistas no consumo de oxigênio mitocondrial em um modelo animal comumente usado.

Usando mitocôndrias isoladas de quantidades mínimas de Rato Músculo Esquelético para alta taxa de transferência de microplacas respiratórias Medições

Aqui, apresentamos uma modificação de um método relatado anteriormente que permite o isolamento de mitocôndrias purificadas e de alta qualidade de quantidades menores de músculo esquelético de camundongo. Este procedimento resulta em mitocôndrias altamente acopladas que respiram com alta função durante ensaios respiratórios baseados em microplacas.

Isolamento de mitocôndrias de quantidades mínimas de Rato Músculo Esquelético para medições High Throughput Microplate respiratórias

respirometria de alta resolução é usado para determinar o consumo de oxigênio mitocondrial. Esta é uma técnica simples para determinar mitocondrial complexos da cadeia respiratória "(I-IV) taxa respiratória, capacidade mitocondrial máxima do sistema de transporte de elétrons e de integridade mitocondrial externa da membrana.

De alta resolução Respirometria para avaliar a função mitocondrial em permeabilizadas e células intactas

Aqui, uma amostra de músculo quadríceps é retirada de um porco anestesiado e as mitocôndrias são isoladas por centrifugação diferencial. Em seguida, as frequências respiratórias dos complexos I, II e IV da cadeia respiratória mitocondrial são determinadas por meio de respirometria de alta resolução.

Isolamento de mitocôndrias intactas de Músculo Esquelético por centrifugação diferencial para medições Respirometria de alta resolução

Neste trabalho, descrevemos um protocolo modificado para testar o flux de substrato respiratório mitocondrial usando perfringolysina recombinante O em combinação com respirometria à base de microplato. Com este protocolo, mostramos como a metformina afeta a respiração mitocondrial de duas linhas diferentes de células tumorais.

Medindo flux de substrato mitocondrial em células o-permeabilizadas de permeabilized recombinante

Avaliar a fosforilação oxidativa usando respirômetros de alta resolução tornou-se parte integrante da análise funcional das mitocôndrias e do metabolismo de energia celular. Aqui, apresentamos protocolos para a análise do metabolismo de energia celular usando respirômetros de alta resolução baseados em câmara e microplatos e discutimos os principais benefícios de cada dispositivo.

Respirometria de alta resolução para avaliar bioenergésicos em células e tecidos usando respirômetros baseados em câmara e placas

Aqui, descrevemos um método detalhado para o isolamento das mitocôndrias do músculo esquelético do camundongo e a análise subsequente da respiração pela Taxa de Consumo de Oxigênio (OCR) usando assins respirométricos à base de microplacas. Este gasoduto pode ser aplicado para estudar os efeitos de múltiplas intervenções ambientais ou genéticas no metabolismo mitocondrial.

Isolamento das Mitocôndrias do Músculo Esquelético do Rato para Ensaios Respirométricos

Esses protocolos ajudarão os usuários a sondar o metabolismo de energia mitocondrial em esferoides derivados de células cancerígenas 3D usando a análise de fluxo extracelular do Seahorse.

Explorando o metabolismo de energia mitocondrial de spheróides microtissue 3D únicos usando análise de fluxo extracelular

A respiração mitocondrial em células inteiras de levedura é um indicador valioso da bioenergética celular. Aqui, apresentamos um protocolo para quantificar esse fenótipo aplicável a diferentes espécies de leveduras.

Quantificação da respiração mitocondrial em células inteiras de levedura

Descubra ensaios respirométricos e enzimáticos para avaliar efeitos de xenobióticos em mitocôndrias isoladas de ratos, mosquitos e carrapatos. Este método computacional acelera o desenvolvimento de biopesticidas seguros e específicos.

Revelando o transporte e os efeitos xenobióticos em mitocôndrias isoladas: insights de ensaios respirométricos e enzimáticos

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