Name: Transplante de células de alta resolução em peixe-zebra embrionário e larval (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-07-05T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 8 s
Description: Aprenda o protocolo de transplante celular de alta resolução em embriões e larvas de peixe-zebra. Este método permite rastrear neurônios diferenciados em Danio rerio de 1 a 7 dias pós-fertilização, ampliando estudos sobre desenvolvimento neural e regeneração.

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<meta charset="utf8"></head><body>Transplante robusto de células de peixe-zebra para pesquisa de regeneração e desenvolvimento

<ol><li>Solini, G. E., Dong, C., Saha, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Embryonic+transplantation+experiments%3A+Past%2C+present%2C+and+future%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Embryonic transplantation experiments: Past, present, and future.</a> Trends Dev Biol. 10, 13-30 (2017).</li>
<li>Gilbert, S. F. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aGilbert%2C+SF+%22A+Conceptual+History+of+Modern+Embryology%22">A Conceptual History of Modern Embryology</a>. , Springer. New York, NY. (1991).</li>
<li>Spemann, H., Mangold, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+embryonic+primordia+by+implantation+of+organizers+from+a+different+species.+1923%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Induction of embryonic primordia by implantation of organizers from a different species. 1923.</a> Int J Dev Biol. 45 (1), 13-38 (2001).</li>
<li>Kretzschmar, K., Watt, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lineage+Tracing%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Lineage Tracing.</a> Cell. 148 (1), 33-45 (2012).</li>
<li>Gansner, J. M., Dang, M., Ammerman, M., Zon, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chapter+22+-+Transplantation+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Chapter 22 - Transplantation in zebrafish.</a> Methods in Cell Biol. 138, 629-647 (2017).</li>
<li>Le Douarin, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Details+of+the+interphase+nucleus+in+Japanese+quail+%28Coturnix+coturnix+japonica%29%5BTitle%5D)+AND+%22Bull+Biol+Fr+Belg%22%5BJournal%5D)">Details of the interphase nucleus in Japanese quail (Coturnix coturnix japonica).</a> Bull Biol Fr Belg. 103 (3), 435-452 (1969).</li>
<li>Ho, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+movements+and+cell+fate+during+zebrafish+gastrulation%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Suppl%22%5BJournal%5D)">Cell movements and cell fate during zebrafish gastrulation.</a> Dev Suppl. , 65-73 (1992).</li>
<li>Le Douarin, N. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developmental+patterning+deciphered+in+avian+chimeras%5BTitle%5D)+AND+%22Development%2C+Growth+%26+Differentiation%22%5BJournal%5D)">Developmental patterning deciphered in avian chimeras.</a> Development, Growth & Differentiation. 50, S11-S28 (2008).</li>
<li>Wagner, D. E., Wang, I. E., Reddien, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clonogenic+neoblasts+are+pluripotent+adult+stem+cells+that+underlie+planarian+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Clonogenic neoblasts are pluripotent adult stem cells that underlie planarian regeneration.</a> Science. 332 (6031), 811-816 (2011).</li>
<li>Balaban, E., Teillet, M. A., Le Douarin, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+the+quail-chick+chimera+system+to+the+study+of+brain+development+and+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Application of the quail-chick chimera system to the study of brain development and behavior.</a> Science. 241 (4871), 1339-1342 (1988).</li>
<li>Carmany-Rampey, A., Moens, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modern+mosaic+analysis+in+the+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Modern mosaic analysis in the zebrafish.</a> Methods. 39 (3), 228-238 (2006).</li>
<li>Kragl, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cells+keep+a+memory+of+their+tissue+origin+during+axolotl+limb+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Cells keep a memory of their tissue origin during axolotl limb regeneration.</a> Nature. 460 (7251), 60-65 (2009).</li>
<li>Rojo-Laguna, J. I., Garcia-Cabot, S., Saló, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+transplantation+in+planarians%3A+A+useful+tool+for+molecular+analysis+of+pattern+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Tissue transplantation in planarians: A useful tool for molecular analysis of pattern formation.</a> Semin Cell Dev Biol. 87, 116-124 (2019).</li>
<li>Tanaka, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+molecular+and+cellular+choreography+of+appendage+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">The molecular and cellular choreography of appendage regeneration.</a> Cell. 165 (7), 1598-1608 (2016).</li>
<li>Hu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Muscles+are+barely+required+for+the+patterning+and+cell+dynamics+in+axolotl+limb+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Genet%22%5BJournal%5D)">Muscles are barely required for the patterning and cell dynamics in axolotl limb regeneration.</a> Front Genet. 13, 1036641(2022).</li>
<li>Wells, K. M., Kelley, K., Baumel, M., Vieira, W. A., McCusker, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+control+of+growth+and+size+in+the+axolotl+limb+regenerate%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">Neural control of growth and size in the axolotl limb regenerate.</a> Elife. 10, e68584(2021).</li>
<li>Otsuki, L., Tanaka, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Positional+memory+in+vertebrate+regeneration%3A+a+century%27s+insights+from+the+salamander+limb%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb+Perspect+Biol%22%5BJournal%5D)">Positional memory in vertebrate regeneration: a century's insights from the salamander limb.</a> Cold Spring Harb Perspect Biol. 14 (6), e040899(2022).</li>
<li>de Abreu, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+as+a+model+of+neurodevelopmental+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Zebrafish as a model of neurodevelopmental disorders.</a> Neuroscience. 445, 3-11 (2020).</li>
<li>Alper, S. R., Dorsky, R. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unique+advantages+of+zebrafish+larvae+as+a+model+for+spinal+cord+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Mol+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Unique advantages of zebrafish larvae as a model for spinal cord regeneration.</a> Front Mol Neurosci. 15, 983336(2022).</li>
<li>Blader, P., Strähle, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+developmental+genetics+and+central+nervous+system+development%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Mol+Genet%22%5BJournal%5D)">Zebrafish developmental genetics and central nervous system development.</a> Hum Mol Genet. 9 (6), 945-951 (2000).</li>
<li>Kemp, H. A., Carmany-Rampey, A., Moens, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generating+chimeric+zebrafish+embryos+by+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Generating chimeric zebrafish embryos by transplantation.</a> J Vis Exp. (29), e1394(2009).</li>
<li>Boulanger-Weill, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+interactions+between+newborn+and+mature+neurons+leading+to+integration+into+established+neuronal+circuits%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Functional interactions between newborn and mature neurons leading to integration into established neuronal circuits.</a> Curr Biol. 27 (12), 1707-1720 (2017).</li>
<li>Dong, J., Stuart, G. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transgene+manipulation+in+zebrafish+by+using+recombinases%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Transgene manipulation in zebrafish by using recombinases.</a> Methods Cell Biol. 77, 363-379 (2004).</li>
<li>Kawakami, K., Shima, A., Kawakami, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+a+functional+transposase+of+the+Tol2+element%2C+an+Ac-like+element+from+the+Japanese+medaka+fish%2C+and+its+transposition+in+the+zebrafish+germ+lineage%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Identification of a functional transposase of the Tol2 element, an Ac-like element from the Japanese medaka fish, and its transposition in the zebrafish germ lineage.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 97 (21), 11403-11408 (2000).</li>
<li>Hwang, W. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+genome+editing+in+zebrafish+using+a+CRISPR-Cas+system%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Efficient genome editing in zebrafish using a CRISPR-Cas system.</a> Nat Biotechnol. 31 (3), 227-229 (2013).</li>
<li>Elsen, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+primary+motoneuron+identity+in+developing+zebrafish+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Determination of primary motoneuron identity in developing zebrafish embryos.</a> Science. 252 (5005), 569-572 (1991).</li>
<li>Elsen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chapter+5+-+Cellular+methods%3A+detailed+procedure+for+transplanting+single+cells%5BTitle%5D)+AND+%22The+Zebrafish+Book%22%5BJournal%5D)">Chapter 5 - Cellular methods: detailed procedure for transplanting single cells.</a> The Zebrafish Book. , (2000).</li>
<li>Poulain, F. E., Gaynes, J. A., Stacher Hörndli, C., Law, M. -Y., Chien, C. -B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analyzing+retinal+axon+guidance+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Analyzing retinal axon guidance in zebrafish.</a> Methods Cell Biol. 100, 3-26 (2010).</li>
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<li>Raible, D. W., Elsen, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulative+interactions+in+zebrafish+neural+crest%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Regulative interactions in zebrafish neural crest.</a> Development. 122 (2), 501-507 (1996).</li>
<li>White, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transparent+adult+zebrafish+as+a+tool+for+in+vivo+transplantation+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Transparent adult zebrafish as a tool for in vivo transplantation analysis.</a> Cell Stem Cell. 2 (2), 183-189 (2008).</li>
<li>Barsh, G. R., Isabella, A. J., Moens, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vagus+motor+neuron+topographic+map+determined+by+parallel+mechanisms+of+hox5+expression+and+time+of+axon+initiation%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Vagus motor neuron topographic map determined by parallel mechanisms of hox5 expression and time of axon initiation.</a> Curr Biol. 27 (24), 3812-3825 (2017).</li>
<li>Isabella, A. J., Stonick, J. A., Dubrulle, J., Moens, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intrinsic+positional+memory+guides+target-specific+axon+regeneration+in+the+zebrafish+vagus+nerve%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Intrinsic positional memory guides target-specific axon regeneration in the zebrafish vagus nerve.</a> Development. 148 (18), 199706(2021).</li>
<li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chapter+1%3A+General+methods+for+zebrafish+care%5BTitle%5D)+AND+%22The+Zebrafish+Book%22%5BJournal%5D)">Chapter 1: General methods for zebrafish care.</a> The Zebrafish Book. , (2000).</li>
<li>Grant, P. K., Moens, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+neuroepithelial+basement+membrane+serves+as+a+boundary+and+a+substrate+for+neuron+migration+in+the+zebrafish+hindbrain%5BTitle%5D)+AND+%22Neural+Dev%22%5BJournal%5D)">The neuroepithelial basement membrane serves as a boundary and a substrate for neuron migration in the zebrafish hindbrain.</a> Neural Dev. 5 (1), 9(2010).</li>
<li>Konantz, J., Antos, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reverse+genetic+morpholino+approach+using+cardiac+ventricular+injection+to+transfect+multiple+difficult-to-target+tissues+in+the+zebrafish+larva%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Reverse genetic morpholino approach using cardiac ventricular injection to transfect multiple difficult-to-target tissues in the zebrafish larva.</a> J Vis Exp. (88), e51595(2014).</li>
<li>Novoa, B., Figueras, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish%3A+model+for+the+study+of+inflammation+and+the+innate+immune+response+to+infectious+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Exp+Med+Biol%22%5BJournal%5D)">Zebrafish: model for the study of inflammation and the innate immune response to infectious diseases.</a> Adv Exp Med Biol. 946, 253-275 (2012).</li>
<li>Speirs, Z. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((What+can+we+learn+about+fish+neutrophil+and+macrophage+response+to+immune+challenge+from+studies+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Fish+Shellfish+Immunol%22%5BJournal%5D)">What can we learn about fish neutrophil and macrophage response to immune challenge from studies in zebrafish.</a> Fish Shellfish Immunol. 148, 109490(2024).</li>
<li>Trede, N. S., Langenau, D. M., Traver, D., Look, A. T., Zon, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+zebrafish+to+understand+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">The use of zebrafish to understand immunity.</a> Immunity. 20 (4), 367-379 (2004).</li>
<li>Lam, S. H., Chua, H. L., Gong, Z., Lam, T. J., Sin, Y. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+maturation+of+the+immune+system+in+zebrafish%2C+Danio+rerio%3A+a+gene+expression+profiling%2C+in+situ+hybridization+and+immunological+study%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Comp+Immunol%22%5BJournal%5D)">Development and maturation of the immune system in zebrafish, Danio rerio: a gene expression profiling, in situ hybridization and immunological study.</a> Dev Comp Immunol. 28 (1), 9-28 (2004).</li>
<li>Wienholds, E., Schulte-Merker, S., Walderich, B., Plasterk, R. H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Target-selected+inactivation+of+the+zebrafish+rag1+gene%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Target-selected inactivation of the zebrafish rag1 gene.</a> Science. 297 (5578), 99-102 (2002).</li>
<li>Petrie-Hanson, L., Hohn, C., Hanson, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+rag1+mutant+zebrafish+leukocytes%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Immunol%22%5BJournal%5D)">Characterization of rag1 mutant zebrafish leukocytes.</a> BMC Immunol. 10, 8(2009).</li>
<li>Roh-Johnson, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophage-dependent+cytoplasmic+transfer+during+melanoma+invasion+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Cell%22%5BJournal%5D)">Macrophage-dependent cytoplasmic transfer during melanoma invasion in vivo.</a> Dev Cell. 43 (5), 549-562 (2017).</li>
<li>Bukrinsky, A., Griffin, K. J. P., Zhao, Y., Lin, S., Banerjee, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Essential+role+of+spi-1-like+%28spi-1l%29+in+zebrafish+myeloid+cell+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Essential role of spi-1-like (spi-1l) in zebrafish myeloid cell differentiation.</a> Blood. 113 (9), 2038-2046 (2009).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>10 mL "seringa de reservatório"</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-955-459</td><td></td></tr><tr><td>Filtro de vácuo descartável de 150 mL, .2 &micro; m, PES</td><td>Corning</td><td>431153</td><td></td></tr><tr><td>bloco de aquecimento de 20 x 12 mm</td><td>Corning</td><td>480122</td><td></td></tr><tr><td>torneira de 3 vias</td><td>Braun Medical Inc.</td><td></td><td></td>455991</tr><tr><td>3 x 1 Corrediça de vidro fosco</td><td>VWR</td><td>48312-004</td><td></td></tr><tr><td>40x objetiva de imersão em água</td><td>Nikon</td><td>MRD07420</td><td></td></tr><tr><td>Cloreto de cálcio di-hidratado</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C3306</td><td></td></tr><tr><td>Manipulador grosseiro</td><td>Narishige</td><td>MN-4</td><td></td></tr><tr><td>Bomba de microsseringa personalizada</td><td>Universidade de Oregon</td><td>N / A</td><td>Fabricado pela oficina mecânica da Universidade de Oregon (tsa.uoregon@gmail.com). Uma alternativa comercialmente disponível está listada abaixo.</td></tr><tr><td>Dumont #5 Fórceps</td><td>Fine Science Tools</td><td>1129500</td><td></td></tr><tr><td>Eclipse FN1 "Microscópio de Transplante"</td><td>Nikon</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>cabo de eletrodo</td> World <td>Precision Instruments</td><td>5444</td><td></td></tr><tr><td>Lâmina Cirúrgica Estéril de Penas, #11</td><td>VWR</td><td>21899-530</td><td></td></tr><tr><td>Micromanipulador fino, Hidráulico de óleo de três eixos&nbsp;</td><td>Narishige</td><td>MMO-203</td><td></td></tr><tr><td>HEPES pH 7.2</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H3375-100G</td><td></td></tr><tr><td>Cabo de bisturi de alta precisão #3</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-000-163</td><td></td></tr><tr><td>Pipeta Pasteur de Borosilicato Descartável Kimble, Ponta Larga, 5.75 in</td><td>DWK Life Sciences</td><td>63A53WT</td><td></td></tr><tr><td>Adaptador de Cromatografia KIMBLE&nbsp;</td><td>DWK Life Sciences</td><td>420408-0000</td><td></td></tr><tr><td>Kimwipes</td><td>Kimberly-Clark Professional</td><td>34120</td><td></td></tr><tr><td>Óleo Mineral Leve</td> Aquecedor de banho seco digital <td>Sigma-Aldrich</td><td>M3516-1L</td><td></td></tr><tr><td>LSE, 1 bloco, 120 V</td><td>Bomba</td> de microsseringa manual Corning <td>6875SB</td><td></td></tr><tr><td></td><td>World Precision Instruments</td><td>MMP</td><td>Alternativa comercial à bomba de microsseringa personalizada</td></tr><tr><td>Suporte de Microeletrodo</td><td>World Precision Instruments</td><td>MPH310</td><td></td></tr><tr><td>MicroFil Pipeta Filler</td><td>World Precision Instruments</td><td>MF28G67-5</td><td></td></tr><tr><td>Esmalte</td> de <td>Unhas Eletrônica Microscopia Sciences</td><td>72180</td><td></td></tr><tr><td>Água livre de nuclease</td><td>VWR</td><td>82007-334</td><td></td></tr><tr><td>P-97 Tipo Flamejante/Marrom Micropipeta Extrator</td><td>Sutter Instruments</td><td>P-97</td><td></td></tr><tr><td>Penicilina-estreptomicina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>p4458-100ML</td><td>5.000 unidades de penicilina e 5 mg de estreptomicina/mL</td></tr><tr><td>bomba de pipeta 10 mL</td><td>Bel-Art</td><td>37898-0000</td><td></td></tr><tr><td>Cloreto de potássio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P3911</td><td></td></tr><tr><td>Professional Super Glue</td><td>Loctite</td><td>LOC1365882</td><td></td></tr><tr><td>Tubos</td> <td>de ensaio de poliestireno de fundo redondoFalcon</td><td>352054</td><td></td></tr><tr><td>Cloreto de sódio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S9888</td><td></td></tr><tr><td>Micrômetro de estágio</td><td>Meiji Techno America</td><td>MA285</td><td></td></tr><tr><td>Seringas sem agulha, 50 mL</td><td>BD Medical</td><td>309635</td><td></td></tr><tr><td>Tricaine Methanosulfonate</td><td>Syndel USA</td><td>SYNCMGAUS03</td><td></td></tr><tr><td>Trilene XL linha de pesca de fundição suave</td><td>Berkley</td><td>XLFS6-15</td><td></td></tr><tr><td>Tubos, polietileno nº 205</td><td>BD Medical</td><td>427445</td><td></td></tr><tr><td>UltraPure Low Melting Point Agarose</td><td>Invitrogen</td><td>16520050</td><td></td></tr><tr><td>Micropipetas calibradas Wiretrol II</td><td>Drummond</td><td>50002010</td><td></td></tr></tbody></table>

transplante de células de alta resolução em peixe-zebra embrionário e larval

High-resolution Cell Transplantation in Embryonic and Larval Zebrafish

Os resultados dos experimentos de transplante são observados diretamente pela visualização de células doadoras marcadas com fluorescência em animais hospedeiros em pontos apropriados após o transplante usando um microscópio de fluorescência. Aqui, transplantamos neurônios vagos anteriores individuais a 3 dpf. Os animais hospedeiros foram então incubados por 12 ou 48 h, anestesiados, montados em ML em uma lamínula de vidro e fotografados com um microscópio confocal (Figura 5). Às 12 h após o transplante (hpt), observamos um neurônio doador transplantado com sucesso (Figura 5A). Podemos confirmar o posicionamento correto da célula, pois ela está situada entre os neurônios vagos do hospedeiro na região anterior do núcleo motor vago do hospedeiro; a célula também parece intacta e saudável, conforme indicado pela extensão de várias saliências curtas de neuritos (Figura 5A). Aos 2 dias após o transplante (dpt), podemos confirmar novamente que um único neurônio foi transplantado com sucesso para a posição correta do núcleo do hospedeiro (Figura 5B). Neste ponto, observamos que o neurônio estendeu um novo axônio para o 4º arco faríngeo (Figura 5B). A observação direta também revela quando o procedimento falhou. Neste exemplo, observamos um hospedeiro de 2 dpt no qual nenhum neurônio doador está presente; em vez disso, uma pequena mancha verde, provavelmente um fragmento de um neurônio doador que morreu após o transplante, é aparente (Figura 5C). Embora as taxas de sucesso do transplante variem de acordo com a experiência do usuário e o número e tipo de células transplantadas, experimentamos uma taxa de sucesso (definida como a presença de um neurônio sobrevivente que estendeu um axônio no hospedeiro a 2-3 dpt) de 66% (n = 453 transplantes) para transplantes de neurônios motores vagos realizados a 3-4 dpf33.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67218/67218fig01.jpg"> Figura 1: Visão geral do aparelho de transplante. (A) Microscópio de fluorescência vertical; (B) Objetivo de imersão em água 40x; (C) micromanipulador grosseiro; (D) micromanipulador fino; (E) suporte de microeletrodo; (F) cabo do eletrodo; (G) torneira de três vias; (H) bomba de microsseringa; (I) tubos de polietileno; J) Adaptadores de cromatografia; (K) Seringa reservatório de 10 mL. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67218/67218fig01large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67218/67218fig02.jpg"> Figura 2: Montagem de animais para transplante. (A) Uma lâmina de vidro fosco de 3 polegadas x 1 polegada com esmalte transparente aplicado em um contorno retangular (linha tracejada). (B) Animais doadores (seta) e hospedeiros (cabeça de seta) montados em gotas de agarose, alinhados verticalmente com o local alvo do transplante (rombencéfalo) orientado para a direita. (C) Agarose com borda direita e cunhas cortadas para expor o local alvo do transplante. Inserção: zoom da região encaixotada. (D) Lâmina de transplante inundada com solução de Ringer com penicilina-estreptomicina e tricaína. Barras de escala = 5 mm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67218/67218fig02large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67218/67218fig03.jpg"> Figura 3: Preparação da agulha de transplante. (A) Agulha de transplante quebrada em cima de um micrômetro de estágio. (B) Enchimento de pipeta (1) inserido na agulha de transplante (2) para encher a agulha com óleo mineral. (C) Lâmina de transplante preparada e agulha no microscópio de transplante. 1: Menisco aquático entre a objetiva de imersão 40x e a lâmina inundada 2: Agulha de transplante 3: Suporte de microeletrodo. (D) Ponta de uma agulha de transplante quebrada com menisco de óleo estável (ponta de seta) vista através do microscópio de transplante com ampliação de 40x. Barras de escala = 100 μm <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67218/67218fig03large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67218/67218fig04.jpg"> Figura 4: O processo de transplante ao microscópio. (A) Agulha posicionada fora do animal doador, direcionada aos neurônios motores vagos (verde, ponta de seta). (B) Agulha posicionada dentro do animal doador após a captação de neurônios doadores marcados com fluorescência (pontas de setas). (C) Agulha contendo vários neurônios doadores (pontas de setas) posicionados fora do animal hospedeiro, voltados para os neurônios motores vagos do hospedeiro anterior (vermelho, asterisco). (D) Animal hospedeiro pós-transplante com agulha retirada. Um grupo de neurônios doadores transplantados expressando GFP (ponta de flecha) foi expelido para o hospedeiro. Barras de escala = 30 μm <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67218/67218fig04large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67218/67218fig05.jpg"> Figura 5: Resultados representativos. (A, B) Transplantes bem-sucedidos. (A) A região anterior de um núcleo motor vago do hospedeiro de 12 hpt (magenta) contendo um neurônio doador (verde, preto em A'). O neurônio doador estendeu vários neurites (setas em A'). (B) O núcleo motor vago (B-B') e os ramos do axônio faríngeo (B''-B''', ramos do axônio marcados) de um hospedeiro de 2 dpt (magenta) contendo um neurônio doador (verde, preto em B', B'''). O neurônio doador estendeu um novo axônio para o ramo 4 (pontas de setas). A Figura 5A, B representa diferentes animais. (C) Transplante malsucedido. O núcleo motor vago de um hospedeiro de 2 dpt (magenta). Nenhum neurônio doador está presente; em vez disso, uma pequena mancha (verde, preta em C '), provavelmente representando um fragmento de um neurônio doador morto (ponta de seta), está presente. Barras de escala = 20 μm. Abreviaturas: dpt = dias pós-transplante; HPT = horas pós-transplante. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67218/67218fig05large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>

Transplante de células de alta resolução em peixe-zebra embrionário e larval

Development and regeneration occur by a process of genetically encoded spatiotemporally dynamic cellular interactions. The use of cell transplantation ...

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