Quantificação de genomas virais adeno-associados em amostras de vetores purificados por reação em cadeia da polimerase por gotículas digitais

A DD PCR é uma técnica amplamente utilizada para determinar o título do genoma do AAV, mas atualmente falta um protocolo de consenso. Nosso protocolo é um guia passo a passo validado sobre como preparar amostras e realizar DD PCR para titulação precisa do genoma. Comparado com o QPCR, o DD PCR oferece várias vantagens, incluindo maior precisão, maior robustez e uma quantificação mais absoluta e direta das sequências alvo sem a necessidade de curvas padrão.

Além disso, com um conjunto de sondas de primer bem projetado, o DD PCR permite uma tragédia específica na detecção, ao contrário de outras técnicas que detectam todo o DNA. O desenvolvimento de um protocolo de consenso padronizado para quantificação do genoma do vetor melhorará a confiabilidade e a uniformidade no controle de qualidade do AAV recombinante em diferentes laboratórios. Isso facilitará a pesquisa e as aplicações clínicas de vetores AAV recombinantes para a comunidade em geral.