Name: Otimização da preparação do antígeno para ensaio de inibição da hemaglutinação da sorologia do vírus da doença de Newcastle (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-01-24T13:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 4 s
Description: Aprenda a otimizar a preparação do antígeno 4-HAU para ensaios de inibição da hemaglutinação do vírus da doença de Newcastle em aves. Este método melhora a precisão da detecção de anticorpos e a vigilância sanitária.

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A aprovação do protocolo foi concedida pelo comitê institucional local de cuidados e uso de animais. Todos os procedimentos envolvendo antígenos de vírus vivos e amostras de soro clínico foram realizados em laboratório de Nível 2 de Biossegurança, em conformidade com os protocolos de segurança estabelecidos.
1. Preparação de suspensão de hemácias de frango a 1%
<ol>
	<li>Adicione 3 mL de solução de Alserver (anticoagulante) em um tubo de centrífuga cônico estéril de 15 mL.</li>
	<li>Colete 1 mL de sangue da veia da asa de cada uma das três galinhas não imunes (sem anticorpos NDV). Transfira imediatamente o sangue para o tubo que contém o anticoagulante e misture suavemente.</li>
	<li>Encha o tubo com solução salina estéril 1x tamponada com fosfato (PBS, pH 7,2-7,4) até um volume total de 12 mL e misture delicadamente. Centrifugue a 500 × g por 10 min usando um rotor horizontal.</li>
	<li>Remova cuidadosamente o sobrenadante e a camada de glóbulos brancos. Repita as etapas 1.3 e 1.4 2x para obter o pellet RBC.</li>
	<li>Pipete reversa 1 mL do pellet de hemácias em 99 mL de PBS estéril, para preparar uma suspensão de 1% de hemácias. NOTA: O volume necessário da suspensão de hemácias de frango a 1% é estimado em 3 mL / placa (25 μL / poço x 96 poços x 1,25 = 3,0 mL; onde 1,25 é responsável pelo desperdício de pipetagem para garantir volume suficiente).</li>
</ol>
2. Reconstituição do antígeno ou soro liofilizado
<ol>
	<li>Adicione 2 mL de PBS estéril à ampola que contém o antígeno ou soro liofilizado. Agite suavemente a ampola e deixe-a repousar por 2-3 min para minimizar as bolhas e garantir a dissolução completa. NOTA: Siga as instruções específicas do fabricante, pois diferentes tipos de materiais liofilizados não foram comparados neste estudo.</li>
	<li>Aliquotar a solução reconstituída em tubos de centrífuga de 1,5 ml e congelar a -20 °C até à utilização. NOTA: Redetermine o título de HA cada vez que o antígeno for descongelado e usado, ou quando uma nova suspensão de hemácias for preparada.</li>
</ol>
3. Titulação de antígenos de HA
<ol>
	<li>Dispense 40, 80, 120 e 160 μL de PBS, respectivamente, em quatro poços adjacentes de uma placa microtituladora descartável de 96 poços com fundo em V, adicione 20 μL de antígeno a cada poço e misture pipetando para cima e para baixo 10x para obter diluições de 1:3, 1:5, 1:7 e 1:9, respectivamente. Na figura 1 é apresentado um diagrama esquemático da operação de diluição.</li>
</ol>
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67256/67256fig1.jpg"> 
Figura 1: Diagrama esquemático ilustrando o procedimento de diluição da solução de antígeno no ensaio de hemaglutinação. A solução de antígeno é diluída em PBS nas proporções de 1:3, 1:5, 1:7 e 1:9, respectivamente. O PBS em poços ou tubos de centrífuga é representado em azul, enquanto os antígenos são mostrados em verde. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67256/67256fig1large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<ol start="2">
	<li>Rotule uma nova placa de microtitulação. Adicione 25 μL de PBS a cada poço nas linhas 1-5.</li>
	<li>Colocar 25 μl das soluções diluídas de antigénio nos primeiros alvéolos das fileiras 1-5 utilizando uma pipeta multicanal e misturar pipetando para cima e para baixo pelo menos 5x.</li>
	<li>Transferir 25 μL do primeiro alvéolo de cada fileira para o segundo alvéolo, misturando bem. Continue transferindo de um poço para o outro, até a 11ª coluna, para criar diluições seriais duplas (1:2 a 1:2048). Rejeitar 25 μL após a 11.a coluna.</li>
	<li>Adicione 25 μL de PBS a cada poço, começando com os poços que contêm a menor concentração de antígeno.</li>
	<li>Adicione 25 μL de suspensão de hemácias de frango a 1% a cada poço, novamente começando com os poços contendo a menor concentração de antígeno.</li>
	<li>Agite a placa em um agitador de microplacas por ~ 20 s para misturar bem.</li>
	<li>Deixe-o intacto na bancada em temperatura ambiente (20-25 °C) por ~30 min até que as hemácias da 12ª coluna se estabilizem completamente. Para o layout da placa, consulte a Figura 2.</li>
</ol>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67256/67256fig2.jpg"> 
Figura 2: Layout esquemático de uma microplaca usada no ensaio de hemaglutinação. A primeira coluna das linhas 1-5 contém diluições iniciais não diluídas e várias diluições da solução de antigénio, seguidas de uma diluição em série dupla da esquerda para a direita até à coluna 11. O controle PBS é colocado na última coluna. O gradiente de escuro para claro indica diminuição da concentração de antígeno. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67256/67256fig2large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<ol start="9">
	<li>Leia e registre os resultados. O AH é determinado inclinando a placa em 90° por ~25 s e observando a presença ou ausência de fluxo em forma de lágrima das hemácias. A diluição mais alta mostrando hemaglutinação completa (sem streaming), representa 1 unidade de HA. Os poços na 12ª coluna servem como controles RBC (negativos).</li>
	<li>Calcular o título de HA de cada linha utilizando o quadro 1, cujo máximo é utilizado para a preparação da solução do antigénio 4-HAU. Por exemplo, se a, b, c, d e e são iguais a 9, 8, 7, 6, 6, respectivamente, então 3 x 28 = 768 é o valor máximo e é o título de HA do estoque de antígeno.</li>
</ol>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Antígenos</td>
			<td>Coluna de diluição mais elevada de AH total</td>
			<td>Título de HA das existências não diluídas</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Estoque não diluído</td>
			<td>um</td>
			<td>2a</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Diluição de 3 vezes</td>
			<td>b</td>
			<td>3 x 2b</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Diluição de 5 vezes</td>
			<td>c</td>
			<td>5 x 2c</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Diluição de 7 vezes</td>
			<td>d</td>
			<td>7 x 2d</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Diluição de 9 vezes</td>
			<td>e</td>
			<td>9 x 2e</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Tabela 1: Resultados do ensaio de HA e cálculo do título de HA da solução estoque.
4. Preparação da solução do antigénio 4-HAU
<ol>
	<li>Calcular o factor de diluição para a preparação da solução de antigénio 4-HAU: <img alt="Equation" src="/files/ftp_upload/67256/67256eq3.jpg">. Determine o volume total de 4-HAU necessário: V = 3mL x Número de microplacas. Em seguida, calcule os volumes necessários de solução estoque de antígeno: <img alt="Equation" src="/files/ftp_upload/67256/67256eq5.jpg">, e PBS: Vp = V - Va. NOTA: Os volumes são medidos em mililitros. Estimar 3 mL por placa de microtitulação do 4-HAU (25 μL/poço x 96 poços x 1,25 = 3 mL).</li>
	<li>Pipetar o volume calculado de PBS para um recipiente, adicionar o volume correspondente de solução de reserva de antigénio e misturar bem para obter a solução de antigénio 4-HAU. NOTA: A solução de antígeno 4-HAU deve ser usada o mais rápido possível.</li>
</ol>
5. Titulação a posteriori da solução do antigénio 4-HAU
<ol>
	<li>Dispense 25, 50, 75, 100, 125 e 150 μL de PBS em seis poços adjacentes de uma placa de microtitulação, adicione 25 μL da solução de antígeno 4-HAU a cada poço e misture pipetando para cima e para baixo 10x. NOTA: Dilua a solução de antígeno 4-HAU com PBS em diluições de 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:6 e 1:7. Na figura 3 é apresentado um diagrama esquemático da operação de diluição.</li>
</ol>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67256/67256fig3.jpg"> 
Figura 3: Diagrama esquemático do processo de diluição da solução de 4 unidades de hemaglutinação em titulação posterior. A solução de trabalho 4-HAU é diluída com PBS nas proporções de 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:6 e 1:7. O PBS é representado em azul e os antígenos em verde. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67256/67256fig3large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<ol start="2">
	<li>Transferir 25 μl de cada solução diluída de antigénio para os alvéolos de outra fileira utilizando uma pipeta multicanal. Adicione 25 μL de PBS a um poço extra como controle negativo.</li>
	<li>Adicione 25 μL de PBS a cada poço e, em seguida, adicione 25 μL de hemácias a 1% de frango a cada poço.</li>
	<li>Agite a placa em um agitador de microplacas por ~ 20 s para misturar.</li>
	<li>Deixe-o sem ser perturbado na bancada à temperatura ambiente (20-25 °C) por ~ 30 min até que as hemácias do controle negativo estejam completamente assentadas.</li>
	<li>Leia e registre os resultados. NOTA: O poço de controle negativo não deve mostrar HA. Idealmente, a diluição 1:4 é exatamente a diluição mais alta com AH completo. Se o título da solução de 4-HAU for superior a 4, a diluição mais elevada pode ser de 1:5, 1:6 ou 1:7; se menor, pode ser 1:2 ou 1:3. Um layout esquemático da retrotitulação e resultados representativos são mostrados na Figura 4.</li>
</ol>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67256/67256fig4.jpg"> 
Figura 4: Layout esquemático dos poços para retrotitulação e resultado representativo. A solução de trabalho 4-HAU diluída é transferida para uma nova linha, com um controle PBS adicional adicionado. O gradiente de verde escuro para verde claro indica concentração de antígeno de alta a baixa. Os resultados representativos demonstram que a diluição 1:4 é a diluição mais alta, mostrando hemaglutinação completa. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67256/67256fig4large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<ol start="7">
	<li>Ajustar ou reformular a solução de antigénio 4-HAU, se necessário. NOTA: Se o volume da solução de antígeno 4-HAU usada na titulação reversa for ≤1% do volume total (o volume da solução de antígeno 4-HAU ≥ 15 mL), consulte a Tabela 2 para ajustes específicos. Por exemplo, se a diluição mais alta com AH completo for 1:2, o título da solução de antígeno 4-HAU agora é 2, e um volume igual de antígeno deve ser adicionado como na preparação anterior da solução de antígeno 4-HAU. Por outro lado, se a diluição mais alta de AH completo for de 1:6, o título agora é 6 e metade do volume de PBS deve ser reabastecido. Se o volume utilizado na titulação a posteriori exceder 1% do total (o volume da solução de antigénio 4-HAU &lt; 15 ml), reformular a solução de antigénio 4-HAU utilizando o factor de diluição corrigido. Consulte a Tabela 3 para as correções específicas. Por exemplo, se a diluição mais alta do AH completo for 1:2, o título da solução de antígeno 4-HAU agora é 2 e o fator de diluição deve ser ajustado para 1/2 do original. Por outro lado, se a diluição mais alta do AH completo for 1:6, o título da solução de antígeno 4-HAU agora é 6 e o fator de diluição é ajustado para 3/2 do original.</li>
</ol>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Título de HA da titulação reversa</td>
			<td>Reabastecimento de antígeno ou PBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1:2</td>
			<td>Va</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1:3</td>
			<td>Va/3</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1:5</td>
			<td>VP/4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1:6</td>
			<td>Vp / 2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1:7</td>
			<td>3Vp/4</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Tabela 2: Tabela de referência para ajustar a concentração de 4-HAU com base nos resultados da titulação reversa. Va e Vp representam os volumes de antígeno e PBS usados na formulação da solução de antígeno 4-HAU, respectivamente.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Título de HA da titulação reversa</td>
			<td>Correcção do factor de diluição</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1:2</td>
			<td>D/2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1:3</td>
			<td>3D/4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1:5</td>
			<td>5D/4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1:6</td>
			<td>3D/2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1:7</td>
			<td>7D/4</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Quadro 3: Quadro de referência da correcção do factor de diluição para a repreparação do antigénio 4-HAU. D representa o fator de diluição usado anteriormente na preparação do antígeno 4-HAU.
6. Preparação do soro
<ol>
	<li>Colete ~ 1 mL de sangue de asas de frango sem usar um anticoagulante.</li>
	<li>Transfira o sangue para um tubo de centrífuga de 1,5 mL e incube a 37 ° C por ~ 2 h. Centrifugue a 3.000 x g por 10 min e aspire cuidadosamente o sobrenadante para um novo tubo.</li>
</ol>
7. Ensaio HI
<ol>
	<li>Rotule as placas de microtitulação de acordo com o layout do ensaio. Adicione 25 μL de PBS a cada poço nas colunas 1-11 e 50 μL aos poços na coluna 12, usando uma pipeta multicanal.</li>
	<li>Adicione 25 μL de soro ao primeiro poço de cada fileira, incluindo fileiras de controle de soro positivo e negativo. Misture bem pipetando para cima e para baixo pelo menos 5x.</li>
	<li>Transferir 25 μL do primeiro alvéolo de cada fileira para o segundo alvéolo e homogeneizar. Continue transferindo e misturando do segundo poço para o terceiro, e assim por diante, até a 10ª coluna. Descarte 25 μL de líquido do poço na 10ª coluna após a mistura.</li>
	<li>Adicione 25 μL de antígeno 4-HAU a cada poço nas colunas 1-11 na direção da concentração sérica baixa a alta.</li>
	<li>Agite a placa em um agitador de microplacas por ~ 20 s. Deixe-o intacto na bancada por ~ 30 min.</li>
	<li>Adicione 25 μL de hemácias de frango a 1% a cada poço na direção de uma concentração sérica baixa a alta.</li>
	<li>Agite a placa em um agitador de microplacas por ~ 20 s para misturar bem. Deixe-o intacto na bancada por ~ 30 min até que os glóbulos vermelhos dos poços de controle PBS estejam completamente assentados.</li>
	<li>Leia e registre os resultados. NOTA: O título de HI é a diluição sérica mais alta que inibe completamente a hemaglutinação do antígeno 4-HAU. O fluxo de hemácias em forma de lágrima pode ser observado na última coluna de cada fileira, inclinando a placa 90° por 25 s. O AH completo (sem streaming) pode ser observado no penúltimo poço a partir do final de cada linha. Os resultados dos testes válidos exigem que o título de HI do controle de soro positivo esteja dentro de uma diluição do título de HI conhecido; o título de HI do controlo sérico negativo deve ser ≤ 2 log2; e a ausência de auto-HA do controle de hemácias. Para obter um diagrama esquemático do fluxo de trabalho do ensaio HA, consulte a Figura 5.</li>
</ol>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67256/67256fig5.jpg"> 
Figura 5: Diagrama esquemático do fluxo de trabalho do ensaio de hemaglutinação. O PBS é representado em azul, o soro em amarelo, a solução de antígeno 4-HAU em verde e a suspensão de hemácias de frango a 1% em vermelho. As setas indicam a ordem de dispensação do líquido. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67256/67256fig5large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>

<meta charset="utf8"></head><body>Preparação simplificada do antígeno 4-HAU para detecção precisa de anticorpos NDV

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</ol>

O método otimizado proposto neste artigo apresenta uma abordagem para preparar com precisão a solução de antígeno 4-HAU. Embora as diretrizes da OIE e da UE sugiram diluições iniciais para titulação de AH, elas não fornecem detalhes precisos sobre as razões de diluição a serem utilizadas ou oferecem metodologias específicas11,12. Além disso, embora a FAO e a OIE recomendem a retrotitulação como meio de aumentar a precisão do 4-HAU, eles carecem de um protocolo claro...

<table><tbody><tr><td>&nbsp; Tubo de Centrífuga Estéril (15 mL)&nbsp;</td><td>Centrífuga</td> de Mesa de Baixa Velocidade Refrigerada <td>a Ar Labshark 130201030</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp;</td><td>Solução Titan</td><td>LDC-5</td><td></td></tr><tr><td>Alserve</td><td></td> Centrífuga E607058 <td></td><td>Sangon Biotech</td></tr><tr><td></td><td>DLAB</td><td>9032002121</td><td></td></tr><tr><td>Pipeta Pasteur Descartável</td><td>Titan</td><td>SWXG-004</td><td></td></tr><tr><td>Seringa Estéril Descartável (1 mL)</td> <td>Beyotime</td><td>FS801-30PCS</td><td></td></tr><tr><td>Placa Microtituladora Descartável de Fundo em V (96 poços)</td> <td>Labshark</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Agitador de microplacas</td> 130207001 <td>Jiangsu Xinkang Medical Equipment Co., Ltd</td><td>XK96-3</td><td></td></tr><tr><td>NDV HI Negativo Sera</td><td>Qingdao Regen Centro de Desenvolvimento</td><td></td><td></td>de Diagnósticos</tr><tr><td>NDV HI Positivo Sera</td><td>Qingdao Regen Centro de Desenvolvimento</td><td></td><td></td>de Diagnósticos</tr><tr><td>NDV HI Teste de Antígeno</td><td>Qingdao Regen Centro de Desenvolvimento</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PBS Solução (1x)&nbsp;</td>Tubo de Centrífuga Estéril <td>Adamas Life</td><td>C8020</td><td></td></tr><tr><td>(1.5 mL)</td><td>Labshark</td><td>130201012</td><td></td></tr></tbody></table>

otimização da preparação do antígeno para ensaio de inibição da hemaglutinação da sorologia do vírus da doença de newcastle

Optimization of Antigen Preparation for Hemagglutination Inhibition Assay of Newcastle Disease Virus Serology

Validação do título da solução de antígeno 4-HAU formulada pelo método otimizado O estudo empregou várias diluições da solução estoque de antígeno para determinar com precisão o título de HA, facilitando o cálculo do fator de diluição para preparar a solução de antígeno 4-HAU. Os resultados revelam que o método otimizado é eficiente e preciso, reduzindo o número de procedimentos repetitivos de retrotitulação e ajuste. No primeiro cenário, um título inicial de HA de ~ 512 produziu um título final de 76...

Otimização da preparação do antígeno para ensaio de inibição da hemaglutinação da sorologia do vírus da doença de Newcastle

Accurate assessment of Newcastle disease virus (NDV) antibody titers is crucial for effective poultry disease control and surveillance. This article ...

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Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Imunologia e Infecção

O vídeo demonstra um ensaio de inibição da hemaglutinação para detectar anticorpos séricos contra antígenos específicos. A confirmação da inibição da hemaglutinação no poço de teste e da hemaglutinação no poço de controle é obtida por meio de padrões visuais distintos. Este ensaio desempenha um papel crucial na avaliação da resposta imune, na eficácia da vacina e no estudo de infecções virais em virologia e imunologia.

O ensaio de inibição da hemaglutinação para detectar anticorpos séricos contra um antígeno alvo

Este vídeo demonstra ensaios de microneutralização para medir anticorpos neutralizantes usando células renais caninas Madin-Darby que superexpressam ácido siálico ligado a α2,6 em soros humanos. Este ensaio é frequentemente usado para sorologia humana para...

Um ensaio de microneutralização para medir títulos de anticorpos neutralizantes em soro humano

Este vídeo demonstra um ensaio que mede os títulos de anticorpos inibidores da neuraminidase (NA) da influenza em uma amostra de soro. Uma amostra de soro contendo anticorpos contra NA é adicionada a uma placa de micropoços revestida com fetuína. Ao adicionar o vírus, os anticorpos impedem que o NA viral clive a fetuína e exponha sua porção galactose. Uma lectina conjugada com peroxidase é então adicionada, que se liga à galactose exposta. O título de anticorpos inibidores de NA é determinado...

Um ensaio para medir os títulos de anticorpos de inibição da neuraminidase da influenza

O vírus da doença de Newcastle (NDV) tem sido extensivamente estudada nos últimos anos de forma a desenvolver novos vectores para a vacinação e a terapia, entre outros. Estes estudos têm sido possível devido às técnicas para resgatar vírus recombinante a partir do cDNA, tais como aqueles aqui descrita.

Resgate de Vírus da Doença de Newcastle recombinante de cDNA

Aqui, apresentamos um protocolo para gerar um bivalente adenovírus tipo 5 (Ad5) vector de prova de princípio Ad5 / H5-HVR1-Kwas-HVR5-His 6, utilizando a estratégia de antígeno do capsídeo-Incorporação. Este vector foi demonstrado que exibem aptidão qualitativa, a capacidade de escapar soros Ad5-positiva, in vitro, e a antigenicidade, bem como a imunogenicidade dos antigénios incorporados.

Utilizando a estratégia Capsid-Incorporação Antigen para o desenvolvimento de abordagens adenovírus subtipo 5-Vectored de vacinas

Descrevemos o ensaio de lectina enzimática (ELLA) para medir os títulos de anticorpos de inibição da neuraminidase (NA) da influenza em soros. O ensaio usa aglutinina de amendoim para quantificar os resíduos de galactose que se tornam acessíveis quando a NA remove o ácido siálico de placas de 96 poços revestidas com fetuína.

Medição de Inibição da Neuraminidase Influenza títulos de anticorpos por Enzyme-linked Lectina Ensaio

Este estudo descreve uma   -Imagem baseada ensaio de micro-neutralização para analisar as relações antigênicas entre vírus. O protocolo emprega um digitalizador de mesa e tem quatro passos, incluindo titulação, a quantificação de titulação, neutralização, e quantificação de neutralização. O ensaio funciona bem com pdm09 corrente circulante vírus influenza A (H1N1), A (H3N2), e B vírus.

Optimização de um Micro-quantitativa Ensaio de neutralização

Os protocolos apresentados descrevem como realizar um ensaio de inibição de hemaglutinação para quantificar os anticorpos específicos de gripe de amostras de soro de destinatários de vacina contra gripe. O primeiro ensaio determina as concentrações de antígeno viral ideal por hemaglutinação. O segundo ensaio quantifica anticorpos específicos da gripe através da inibição da hemaglutinação.

Um ensaio de inibição (HI) de hemaglutinação otimizado para quantificar os anticorpos específicos de gripe

Aqui fornecemos um procedimento detalhado para produção, purificação e quantificação do vírus recombinante da doença de Newcastle. Este protocolo rende consistentemente &gt; 6 × 109 unidades formadoras de placas/mL, fornecendo quantidades de vírus apropriadas para estudos in vivo em animais. Ensaios adicionais de controle de qualidade para garantir a segurança in vivo são descritos.

Produção de Vírus da Doença de Newcastle Recombinante de Alta Titer a partir de fluido allantóico

Nós descrevemos um método para processar e tela de campo coletados mosquitos para uma diversidade de vírus por cultura de células Vero ensaio. Empregando esta técnica, temos detectados nove tipos diferentes de vírus provenientes de 4 famílias taxonômicas em mosquitos coletados em Connecticut.

Detecção de vírus infecciosos de Campo mosquitos coletados por Vero Ensaio Cultura de Células

Aprenda a otimizar a preparação do antígeno 4-HAU para ensaios de inibição da hemaglutinação do vírus da doença de Newcastle em aves. Este método melhora a precisão da detecção de anticorpos e a vigilância sanitária.

Otimização da preparação do antígeno para ensaio de inibição da hemaglutinação da sorologia do vírus da doença de Newcastle

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