Name: Imagem FRET de molécula única para observar a dinâmica conformacional da GTPase Atlastin semelhante à dinamina (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-01-24T13:40:00.000+00:00
Duration: 10 min 19 s
Description: Aprenda a usar smFRET para estudar a dinâmica conformacional da atlastina durante o ciclo de hidrólise de GTP. Este método revela mudanças estruturais essenciais para a fusão de membranas do retículo endoplasmático.

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<meta charset="utf8"></head><body>Monitoramento da GTPase Atlastin em diferentes estados de carga de nucleotídeos

<ol><li>Jimah, J. R., Hinshaw, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+insights+into+the+mechanism+of+dynamin+superfamily+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Structural insights into the mechanism of dynamin superfamily proteins.</a> Trends Cell Biol. 29 (3), 257-273 (2019).</li>
<li>Kalia, R., Frost, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Open+and+cut%3A+Allosteric+motion+and+membrane+fission+by+dynamin+superfamily+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Biol+Cell%22%5BJournal%5D)">Open and cut: Allosteric motion and membrane fission by dynamin superfamily proteins.</a> Mol Biol Cell. 30 (17), 2097-2104 (2019).</li>
<li>Ramachandran, R., Schmid, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+dynamin+superfamily%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">The dynamin superfamily.</a> Curr Biol. 28 (8), R411-R416 (2018).</li>
<li>Bryce, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+atlastin-3+is+a+constitutive+ER+membrane+fusion+catalyst%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Human atlastin-3 is a constitutive ER membrane fusion catalyst.</a> J Cell Biol. 222 (7), e202211021(2023).</li>
<li>Crosby, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reconstitution+of+human+atlastin+fusion+activity+reveals+autoinhibition+by+the+C+terminus%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Reconstitution of human atlastin fusion activity reveals autoinhibition by the C terminus.</a> J Cell Biol. 221 (2), e202107070(2022).</li>
<li>Hu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+class+of+dynamin-like+GTPases+involved+in+the+generation+of+the+tubular+er+network%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">A class of dynamin-like GTPases involved in the generation of the tubular er network.</a> Cell. 138 (3), 549-561 (2009).</li>
<li>Jang, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+atlastins+are+sufficient+to+drive+the+fusion+of+liposomes+with+a+physiological+lipid+composition%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Human atlastins are sufficient to drive the fusion of liposomes with a physiological lipid composition.</a> J Cell Biol. 222 (4), e202109090(2023).</li>
<li>Liu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Atlastin-1+regulates+morphology+and+function+of+endoplasmic+reticulum+in+dendrites%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Atlastin-1 regulates morphology and function of endoplasmic reticulum in dendrites.</a> Nat Commun. 10 (1), 568(2019).</li>
<li>Orso, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Homotypic+fusion+of+ER+membranes+requires+the+dynamin-like+gtpase+atlastin%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Homotypic fusion of ER membranes requires the dynamin-like gtpase atlastin.</a> Nature. 460 (7258), 978-983 (2009).</li>
<li>Rismanchi, N., Soderblom, C., Stadler, J., Zhu, P. P., Blackstone, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Atlastin+GTPases+are+required+for+Golgi+apparatus+and+er+morphogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Mol+Genet%22%5BJournal%5D)">Atlastin GTPases are required for Golgi apparatus and er morphogenesis.</a> Hum Mol Genet. 17 (11), 1591-1604 (2008).</li>
<li>Faust, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+atlastin+C-terminal+tail+is+an+amphipathic+helix+that+perturbs+the+bilayer+structure+during+endoplasmic+reticulum+homotypic+fusion%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">The atlastin C-terminal tail is an amphipathic helix that perturbs the bilayer structure during endoplasmic reticulum homotypic fusion.</a> J Biol Chem. 290 (8), 4772-4783 (2015).</li>
<li>Liu, T. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipid+interaction+of+the+c+terminus+and+association+of+the+transmembrane+segments+facilitate+atlastin-mediated+homotypic+endoplasmic+reticulum+fusion%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Lipid interaction of the c terminus and association of the transmembrane segments facilitate atlastin-mediated homotypic endoplasmic reticulum fusion.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 109 (32), E2146-E2154 (2012).</li>
<li>Moss, T. J., Andreazza, C., Verma, A., Daga, A., Mcnew, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Membrane+fusion+by+the+GTPase+atlastin+requires+a+conserved+c-terminal+cytoplasmic+tail+and+dimerization+through+the+middle+domain%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Membrane fusion by the GTPase atlastin requires a conserved c-terminal cytoplasmic tail and dimerization through the middle domain.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 108 (27), 11133-11138 (2011).</li>
<li>Bian, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structures+of+the+atlastin+GTpase+provide+insight+into+homotypic+fusion+of+endoplasmic+reticulum+membranes%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Structures of the atlastin GTpase provide insight into homotypic fusion of endoplasmic reticulum membranes.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 108 (10), 3976-3981 (2011).</li>
<li>Byrnes, L. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+basis+for+conformational+switching+and+GTP+loading+of+the+large+g+protein+atlastin%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+J%22%5BJournal%5D)">Structural basis for conformational switching and GTP loading of the large g protein atlastin.</a> EMBO J. 32 (3), 369-384 (2013).</li>
<li>Byrnes, L. J., Sondermann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+basis+for+the+nucleotide-dependent+dimerization+of+the+large+g+protein+atlastin-1%2Fspg3a%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Structural basis for the nucleotide-dependent dimerization of the large g protein atlastin-1/spg3a.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 108 (6), 2216-2221 (2011).</li>
<li>Morin-Leisk, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+intramolecular+salt+bridge+drives+the+soluble+domain+of+gtp-bound+atlastin+into+the+postfusion+conformation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">An intramolecular salt bridge drives the soluble domain of gtp-bound atlastin into the postfusion conformation.</a> J Cell Biol. 195 (4), 605-615 (2011).</li>
<li>Pendin, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GTP-dependent+packing+of+a+three-helix+bundle+is+required+for+atlastin-mediated+fusion%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">GTP-dependent packing of a three-helix bundle is required for atlastin-mediated fusion.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 108 (39), 16283-16288 (2011).</li>
<li>Winsor, J., Hackney, D. D., Lee, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+crossover+conformational+shift+of+the+GTPase+atlastin+provides+the+energy+driving+ER+fusion%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">The crossover conformational shift of the GTPase atlastin provides the energy driving ER fusion.</a> J Cell Biol. 216 (5), 1321-1335 (2017).</li>
<li>Yan, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structures+of+the+yeast+dynamin-like+GTPase+sey1p+provide+insight+into+homotypic+er+fusion%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Structures of the yeast dynamin-like GTPase sey1p provide insight into homotypic er fusion.</a> J Cell Biol. 210 (6), 961-972 (2015).</li>
<li>Rizo, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+mechanisms+underlying+neurotransmitter+release%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Biophys%22%5BJournal%5D)">Molecular mechanisms underlying neurotransmitter release.</a> Annu Rev Biophys. 51, 377-408 (2022).</li>
<li>Gao, S., Hu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+fusion%3A+The+machineries+in+and+out%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial fusion: The machineries in and out.</a> Trends Cell Biol. 31 (1), 62-74 (2021).</li>
<li>Kelly, C. M., Byrnes, L. J., Neela, N., Sondermann, H., O'donnell, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+hypervariable+region+of+atlastin-1+is+a+site+for+intrinsic+and+extrinsic+regulation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">The hypervariable region of atlastin-1 is a site for intrinsic and extrinsic regulation.</a> J Cell Biol. 220 (11), e202104128(2021).</li>
<li>Asher, W. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GPCR-mediated+beta-arrestin+activation+deconvoluted+with+single-molecule+precision%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">GPCR-mediated beta-arrestin activation deconvoluted with single-molecule precision.</a> Cell. 185 (10), 1661-1675.e16 (2022).</li>
<li>Li, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanism+of+DNA+translocation+underlying+chromatin+remodelling+by+snf2%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Mechanism of DNA translocation underlying chromatin remodelling by snf2.</a> Nature. 567 (7748), 409-413 (2019).</li>
<li>Chen, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conformational+dynamics+of+dynamin-like+MXA+revealed+by+single-molecule+fret%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Conformational dynamics of dynamin-like MXA revealed by single-molecule fret.</a> Nat Commun. 8, 15744(2017).</li>
<li>Shi, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dissecting+the+mechanism+of+atlastin-mediated+homotypic+membrane+fusion+at+the+single-molecule+level%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Dissecting the mechanism of atlastin-mediated homotypic membrane fusion at the single-molecule level.</a> Nat Commun. 15 (1), 2488(2024).</li>
<li>Guelly, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+high-throughput+sequencing+identifies+mutations+in+atlastin-1+as+a+cause+of+hereditary+sensory+neuropathy+type+i%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Hum+Genet%22%5BJournal%5D)">Targeted high-throughput sequencing identifies mutations in atlastin-1 as a cause of hereditary sensory neuropathy type i.</a> Am J Hum Genet. 88 (1), 99-105 (2011).</li>
<li>Montagna, A., Vajente, N., Pendin, D., Daga, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+analysis+of+CRISPR%2FCas9+induced+atlastin+pathological+mutations+in+drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Neurosci%22%5BJournal%5D)">In vivo analysis of CRISPR/Cas9 induced atlastin pathological mutations in drosophila.</a> Front Neurosci. 14, 547746(2020).</li>
<li>Ulengin, I., Park, J. J., Lee, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ER+network+formation+and+membrane+fusion+by+atlastin1%2Fspg3a+disease+variants%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Biol+Cell%22%5BJournal%5D)">ER network formation and membrane fusion by atlastin1/spg3a disease variants.</a> Mol Biol Cell. 26 (9), 1616-1628 (2015).</li>
<li>Zhao, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mutations+in+a+newly+identified+GTPase+gene+cause+autosomal+dominant+hereditary+spastic+paraplegia%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Genet%22%5BJournal%5D)">Mutations in a newly identified GTPase gene cause autosomal dominant hereditary spastic paraplegia.</a> Nat Genet. 29 (3), 326-331 (2001).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Filtros Centrífugos 10 K</td><td>Amicon</td><td>UFC901096</td><td></td></tr><tr><td>3-Aminopropiltrietoxissilano (APTES)&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>440140</td><td></td></tr><tr><td>45 Ti rotor</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>532-nm laser</td><td>Olympus</td><td></td><td></td></tr><tr><td>640-nm</td> laser <td>Olympus</td><td></td><td></td></tr><tr><td>7 K MWCO spin colunas de dessalinização</td><td>Thermo Scientific</td><td>89882</td><td></td></tr><tr><td>Adenosina 5-trifosfato dissódico sal (ATP)</td><td>Roche</td><td>11140965001</td><td></td></tr><tr><td>Ácido benzóico</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>242381</td><td></td></tr><tr><td>Biotina-PEG-SVA-5000</td><td>Laysan Bio</td><td>170-124</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo biotinilado</td><td>Bioss Anticorpos bioss</td><td>bs-0287R-bio</td><td></td></tr><tr><td>d-biotina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>B4501</td><td></td></tr><tr><td>Coquetel de inibidor de protease sem EDTA</td><td>Roche</td><td>11873580001</td><td></td></tr><tr><td>Câmera EMCCD</td><td>Andor</td><td>IX897</td><td></td></tr><tr><td>Guanosina 5&prime;-difosfato de sódio (GDP)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>&nbsp; G7127</td><td></td></tr><tr><td>Guanosina 5'-O-[gama-tio]trifosfato (GTP&gama; S)</td><td>Roche</td><td>10220647001</td><td></td></tr><tr><td>Objetiva de imersão em óleo de alta abertura numérica</td><td>Nikon</td><td></td><td>Nikon, 100x, N.A. 1.49, imersão em óleo</td></tr><tr><td>ImageJ</td><td>NIH</td><td></td><td>https://imagej.net/ij/</td></tr> <tr><td>Isopropil-&Beta;-D-Tiogalactosídeo</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I5502</td><td></td></tr><tr><td>LD555-MAL</td><td>Lumidyne</td><td>4</td><td></td></tr><tr><td>LD655-MAL</td><td>Lumidyne</td><td>10</td><td></td></tr><tr><td>L-ácido glutâmico potássio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G1501</td><td></td></tr><tr><td>Acetato de magnésio tetrahidratado</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M0631</td><td></td></tr><tr><td>Matlab</td><td>The MathWorks, Natick, MA</td><td></td><td>https://www.mathworks.com/</td></tr> <tr><td>Vidro de cobertura do microscópio</td><td>Fisherbrand</td><td>18834</td><td>&nbsp;( 24 mm e vezes; 60 mm)</td></tr> <tr><td>Lâminas</td><td></td><td></td><td>de microscópio Personalizadas, (75 mm e 26 mm e 1 mm) com 6 pares de orifícios passantes de 1,2 mm de diâmetro</td></tr><tr><td>mPEG-SVA-5000</td><td>Laysan Bio</td><td>170-106</td><td></td></tr><tr><td>Ni Sepharose 6 Fast Flow</td><td>Cytiva</td><td>17531802</td><td></td></tr><tr><td>Origin</td><td>Software</td><td></td> de origem <td>https://www.originlab.com/</td></tr> <tr><td>Partículas de poliestireno</td><td>QDSphere</td><td>AG1265</td><td></td></tr><tr><td>Protocatecuate 3,4-dioxigenase</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P8279</td><td></td></tr><tr><td>Streptavidin</td><td>Sangon Biotech</td><td>A610492</td><td></td></tr><tr><td>Superdex 200 Aumento (10/300 GL)</td> <td>Cytiva</td><td>28990944</td><td></td></tr><tr><td>microscópio TIRF</td><td></td><td></td> Cloridrato <td></td></tr> de <tr><td>Tris (2-carboxietil) fosfina (TCEP)</td> <td>Thermo</td><td>75259</td><td></td></tr></tbody></table>

imagem fret de molécula única para observar a dinâmica conformacional da gtpase atlastin semelhante à dinamina

Single-Molecule FRET Imaging for Observing the Conformational Dynamics of Dynamin-Like GTPase Atlastin

Os experimentos smFRET foram realizados em um microscópio TIRF, capturando a intensidade de fluorescência dos fluoróforos a cada 30 ms. Imagens representativas de moléculasde citoplasma ATL1 marcadas com LD555 (doador) e/ou LD655 (aceptor) na ausência ou presença de diferentes nucleotídeos são mostradas na Figura 2A-C. As intensidades de fluorescência dos dois fluoróforos em partículas individuais foram registradas e centenas de trajetórias de FRE...

Imagem FRET de molécula única para observar a dinâmica conformacional da GTPase Atlastin semelhante à dinamina

The rigid-body rotation of the three-helical middle domain (3HB) relative to the GTPase domain of dynamin-like protein atlastin (ATL) is a crucial driver ...

single-molecule-fret-imaging-for-observing-conformational-dynamics

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Bioquímica

Este vídeo descreve o TIRF, uma técnica baseada em microscopia de reflexão interna total para visualizar a dinâmica de polimerização de actina e microtúbulos. O método permite a imagem de alta resolução da dinâmica de acoplamento de actina e microtúbulos em tempo real, o que é essencial para a compreensão das diafonias celulares.

Microscopia TIRF para visualizar a dinâmica de acoplamento de actina e microtúbulos

Fluorophores individuais podem ser localizados com precisão nanométrica usando FIONA. Aqui um resumo da técnica FIONA é relatado, e como a realização de experimentos Fiona é descrito.

Imagens de fluorescência com um nanômetros Precisão (Fiona)

Aqui ilustramos como microscopia de foto-ativado localização única molécula pode ser realizada no terminal nervoso motor de um vivo Drosophila melanogaster terceiro estádio de larva.

Na Vivo Único-molécula de rastreamento no Terminal do nervo Motor pré-sináptica da drosófila

Descrevemos como micro e photomanipulation técnicas tais como o FRAP e photoactivation permitem a determinação de parâmetros de motilidade e a spatiotemporal dinâmica de proteínas dentro de migração de células. Leituras experimentais incluem subcellular dinâmica e volume de negócios de reguladores da motilidade ou o citoesqueleto de actina subjacente.

Técnicas de micromanipulação, permitindo a análise da dinâmica morfogenética e rotatividade dos reguladores do citoesqueleto

Aqui, apresentamos um protocolo para a utilização simultânea de ressonância Förster, sensores de tensão baseados na transferência de energia para medir proteína carga e fluorescência recuperação após fotobranqueamento para medir a dinâmica da proteína, permitindo a medição de força-sensível dinâmica da proteína dentro de células vivas.

Medição da dinâmica de força-sensível da proteína em células vivas, usando uma combinação de técnicas fluorescentes

Apresentamos protocolos para ensaios microfluidos de filamento de actina simples, em combinação com microscopia de fluorescência, que permitem monitorar com precisão filamentos de actina individuais em tempo real, expondo-os sequencialmente a diferentes soluções proteicas.

Usando Microfluidos e Microscopia de Fluorescência para Estudar a Dinâmica de Montagem de Filamentos e Pacotes de Actin Único

Este protocolo descreve a formação de bicamadas lipídicas suportadas e a adição de filamentos citoesqueléticos e proteínas motoras para estudar a dinâmica de redes citoesqueléticas reconstituídas e ligadas à membrana usando microscopia de fluorescência.

Reconstituição de Córtices de Actina Mínima Amarrados à Membrana em Bicamadas Lipídicas Suportadas

Este protocolo é um guia para visualizar actina dinâmica e microtúbulos usando um ensaio de microscopia de fluorescência interna total in vitro (TIRF).

Visualizando a dinâmica de acoplamento de actina e microtúbula in vitro por microscopia de fluorescência interna total (TIRF)

Este protocolo descreve como usar a microscopia TIRF para rastrear canais iônicos individuais e determinar sua atividade em membranas lipídicas suportadas, definindo assim a interação entre o movimento da membrana lateral e a função do canal. Ele descreve como preparar as membranas, registrar os dados e analisar os resultados.

Imagem de molécula única da mobilidade lateral e atividade do canal iônico em bicamadas lipídicas usando microscopia de fluorescência por reflexão interna total (TIRF)

Relatamos um ensaio de conjunto híbrido e molécula única para obter imagens diretas e quantificar o movimento de helicase Cdc45 / Mcm2-7 / GINS (CMG) totalmente reconstituída e marcada com fluorescência em moléculas de DNA lineares mantidas no lugar em uma armadilha óptica.

Conjunto híbrido e ensaio de molécula única para imagem do movimento de CMG totalmente reconstituído

Aqui, apresentamos métodos para preparar conjuntos de actina emaranhados, reticulados e de cristal líquido quase bidimensionais (2D) a partir de proteínas purificadas.

Ajustando os modos de contratilidade e deformação de conjuntos ativos baseados em actina in vitro: de redes ativas bidimensionais a gotas de cristal líquido

Aprenda a usar smFRET para estudar a dinâmica conformacional da atlastina durante o ciclo de hidrólise de GTP. Este método revela mudanças estruturais essenciais para a fusão de membranas do retículo endoplasmático.

Imagem FRET de molécula única para observar a dinâmica conformacional da GTPase Atlastin semelhante à dinamina

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