Name: Enriquecimento de proteínas subcelulares em Leptospira usando uma abordagem de fracionamento baseada em Triton X-114 (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-08-08T12:30:00.000+00:00
Duration: 4 min 25 s
Description: Aprenda a enriquecer proteínas subcelulares em Leptospira usando fracionamento com Triton X-114 e espectrometria de massa. Este método identifica fatores de virulência em bactérias patogênicas gram-negativas.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Curreem, S. O. T., Watt, R. M., Lau, S. K. P., Woo, P. C. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two-dimensional+gel+electrophoresis+in+bacterial+proteomics%5BTitle%5D)+AND+%22Protein+Cell%22%5BJournal%5D)">Two-dimensional gel electrophoresis in bacterial proteomics.</a> Protein Cell. 3 (5), 346-363 (2012).</li>
<li>King, B. R., Latham, L., Guda, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estimation+of+subcellular+proteomes+in+bacterial+species%5BTitle%5D)+AND+%22Open+Appl+Informatics+J%22%5BJournal%5D)">Estimation of subcellular proteomes in bacterial species.</a> Open Appl Informatics J. 3 (1), 1-11 (2009).</li>
<li>Brown, R. N., Romine, M. F., Schepmoes, A. A., Smith, R. D., Lipton, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mapping+the+subcellular+proteome+of+Shewanella+oneidensis+MR-1+using+Sarkosyl-based+fractionation+and+LC%E2%88%92MS%2FMS+protein+identification%5BTitle%5D)+AND+%22J+Proteome+Res%22%5BJournal%5D)">Mapping the subcellular proteome of Shewanella oneidensis MR-1 using Sarkosyl-based fractionation and LC−MS/MS protein identification.</a> J Proteome Res. 9 (9), 4454-4463 (2010).</li>
<li>Cash, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Investigating+pathogen+biology+at+the+level+of+the+proteome%5BTitle%5D)+AND+%22Proteomics%22%5BJournal%5D)">Investigating pathogen biology at the level of the proteome.</a> Proteomics. 11 (15), 3190-3202 (2011).</li>
<li>Liu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temporal+regulation+of+a+Salmonella+Typhimurium+virulence+factor+by+the+transcriptional+regulator+YdcR%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Proteomics%22%5BJournal%5D)">Temporal regulation of a Salmonella Typhimurium virulence factor by the transcriptional regulator YdcR.</a> Mol Cell Proteomics. 16 (9), 1683-1693 (2017).</li>
<li>Rey, S., Gardy, J. L., Brinkman, F. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+the+precision+of+high-throughput+computational+and+laboratory+approaches+for+the+genome-wide+identification+of+protein+subcellular+localization+in+bacteria%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Genomics%22%5BJournal%5D)">Assessing the precision of high-throughput computational and laboratory approaches for the genome-wide identification of protein subcellular localization in bacteria.</a> BMC Genomics. 6 (1), 162(2005).</li>
<li>Lietzén, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+subcellular+proteome+and+secretome+profiling+of+influenza+A+virus-infected+human+primary+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">Quantitative subcellular proteome and secretome profiling of influenza A virus-infected human primary macrophages.</a> PLoS Pathog. 7 (5), e1001340(2011).</li>
<li>Arioka, Y., Watanabe, A., Saito, K., Yamada, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation-induced+cytidine+deaminase+alters+the+subcellular+localization+of+Tet+family+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Activation-induced cytidine deaminase alters the subcellular localization of Tet family proteins.</a> PLoS One. 7 (9), e45031(2012).</li>
<li>Del Duca, S., Faleri, C., Iorio, R. A., Cresti, M., Serafini-Fracassini, D., Cai, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distribution+of+transglutaminase+in+pear+pollen+tubes+in+relation+to+cytoskeleton+and+membrane+dynamics%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Physiol%22%5BJournal%5D)">Distribution of transglutaminase in pear pollen tubes in relation to cytoskeleton and membrane dynamics.</a> Plant Physiol. 161 (4), 1706-1721 (2013).</li>
<li>Gennaris, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Repairing+oxidized+proteins+in+the+bacterial+envelope+using+respiratory+chain+electrons%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Repairing oxidized proteins in the bacterial envelope using respiratory chain electrons.</a> Nature. 528 (7582), 409-412 (2015).</li>
<li>Schilling, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Translocation+of+endothelial+nitric-oxide+synthase+involves+a+ternary+complex+with+caveolin-1+and+NOSTRIN%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Biol+Cell%22%5BJournal%5D)">Translocation of endothelial nitric-oxide synthase involves a ternary complex with caveolin-1 and NOSTRIN.</a> Mol Biol Cell. 17 (9), 3870-3880 (2006).</li>
<li>Mintz-Oron, S., Aharoni, A., Ruppin, E., Shlomi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Network-based+prediction+of+metabolic+enzymes%27+subcellular+localization%5BTitle%5D)+AND+%22Bioinformatics%22%5BJournal%5D)">Network-based prediction of metabolic enzymes' subcellular localization.</a> Bioinformatics. 25 (12), i247-i252 (2009).</li>
<li>Phukan, H., Sarma, A., Rex, D. A. B., Rai, A. B., Prasad, T. S. K., Madanan, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unique+posttranslational+modification+sites+of+acetylation%2C+citrullination%2C+glutarylation%2C+and+phosphorylation+are+found+to+be+specific+to+the+proteins+partitioned+in+the+Triton+X-114+fractions+of+Leptospira%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Omega%22%5BJournal%5D)">Unique posttranslational modification sites of acetylation, citrullination, glutarylation, and phosphorylation are found to be specific to the proteins partitioned in the Triton X-114 fractions of Leptospira.</a> ACS Omega. 7 (22), 18569-18576 (2022).</li>
<li>Tinrat, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preliminary+phytochemical+analysis%2C+antibacterial+and+anti-biofilm+activities+of+Curcuma+zedoaria+%28Christm.%29+Roscoe+extracts%5BTitle%5D)+AND+%22Malaysian+J+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Preliminary phytochemical analysis, antibacterial and anti-biofilm activities of Curcuma zedoaria (Christm.) Roscoe extracts.</a> Malaysian J Microbiol. 18 (4), 344-353 (2022).</li>
<li>Silhavy, T. J., Kahne, D., Walker, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+bacterial+cell+envelope%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb+Perspect+Biol%22%5BJournal%5D)">The bacterial cell envelope.</a> Cold Spring Harb Perspect Biol. 2 (5), a000414-a000414 (2010).</li>
<li>Arnold, T., Linke, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+detergents+to+purify+membrane+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Protein+Sci%22%5BJournal%5D)">The use of detergents to purify membrane proteins.</a> Curr Protoc Protein Sci. 53 (1), ps0408s53(2008).</li>
<li>Santos, H. deL., Ciancaglini, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+practical+approach+to+the+choice+of+a+suitable+detergent+and+optimal+conditions+for+solubilizing+a+membrane+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Educ%22%5BJournal%5D)">A practical approach to the choice of a suitable detergent and optimal conditions for solubilizing a membrane protein.</a> Biochem Educ. 28 (3), 178-182 (2000).</li>
<li>Picard, M., Duval-Terrié, C., Dé, E., Champeil, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stabilization+of+membranes+upon+interaction+of+amphipathic+polymers+with+membrane+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Protein+Sci%22%5BJournal%5D)">Stabilization of membranes upon interaction of amphipathic polymers with membrane proteins.</a> Protein Sci. 13 (11), 3056-3058 (2004).</li>
<li>Rice, A. J., Alvarez, F. J., Davidson, A. L., Pinkett, H. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+lipid+environment+on+the+conformational+changes+of+an+ABC+importer%5BTitle%5D)+AND+%22Channels%22%5BJournal%5D)">Effects of lipid environment on the conformational changes of an ABC importer.</a> Channels. 8 (4), 327-333 (2014).</li>
<li>Arnold, T., Linke, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phase+separation+in+the+isolation+and+purification+of+membrane+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22BioTechniques%22%5BJournal%5D)">Phase separation in the isolation and purification of membrane proteins.</a> BioTechniques. 43 (4), 427-440 (2007).</li>
<li>Fricke, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phase+separation+of+nonionic+detergents+by+salt+addition+and+its+application+to+membrane+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Biochem%22%5BJournal%5D)">Phase separation of nonionic detergents by salt addition and its application to membrane proteins.</a> Anal Biochem. 212 (1), 154-159 (1993).</li>
<li>Pryde, J. G. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPryde%2C+JG+%22Partitioning+of+proteins+in+Triton+X-114.+In%3A+Methods+in+Molecular+Biology%22">Partitioning of proteins in Triton X-114. In: Methods in Molecular Biology</a>. , Humana Press. Totowa. (2000).</li>
<li>Haake, D. A., Walker, E. M., Blanco, D. R., Bolin, C. A., Miller, J. N., Lovett, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+the+surface+of+Leptospira+interrogans+serovar+grippotyphosa+during+in+vitro+cultivation%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immun%22%5BJournal%5D)">Changes in the surface of Leptospira interrogans serovar grippotyphosa during in vitro cultivation.</a> Infect Immun. 59 (3), 1131-1140 (1991).</li>
<li>Haake, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+leptospiral+major+outer+membrane+protein+LipL32+is+a+lipoprotein+expressed+during+mammalian+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immun%22%5BJournal%5D)">The leptospiral major outer membrane protein LipL32 is a lipoprotein expressed during mammalian infection.</a> Infect Immun. 68 (4), 2276-2285 (2000).</li>
<li>Thoduvayil, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Triton+X-114+fractionated+subcellular+proteome+of+Leptospira+interrogans+shows+selective+enrichment+of+pathogenic+and+outer+membrane+proteins+in+the+detergent+fraction%5BTitle%5D)+AND+%22Proteomics%22%5BJournal%5D)">Triton X-114 fractionated subcellular proteome of Leptospira interrogans shows selective enrichment of pathogenic and outer membrane proteins in the detergent fraction.</a> Proteomics. 20 (19-20), (2020).</li>
<li>Phukan, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physiological+temperature+and+osmotic+changes+drive+dynamic+proteome+alterations+in+the+leptospiral+outer+membrane+and+enhance+protein+export+systems%5BTitle%5D)+AND+%22J+Proteome+Res%22%5BJournal%5D)">Physiological temperature and osmotic changes drive dynamic proteome alterations in the leptospiral outer membrane and enhance protein export systems.</a> J Proteome Res. 22 (11), 3447-3463 (2023).</li>
<li>Murray, G. L., King, A. M., Srikram, A., Sermswan, R. W., Adler, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+luminescent+Leptospira+interrogans+for+enumeration+in+biological+assays%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Use of luminescent Leptospira interrogans for enumeration in biological assays.</a> J Clin Microbiol. 48 (6), 2037-2042 (2010).</li>
<li>Smith, P. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+of+protein+using+bicinchoninic+acid%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Biochem%22%5BJournal%5D)">Measurement of protein using bicinchoninic acid.</a> Anal Biochem. 150 (1), 76-85 (1985).</li>
<li>Shang, E. S., Summers, T. A., Haake, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+cloning+and+sequence+analysis+of+the+gene+encoding+LipL41%2C+a+surface-exposed+lipoprotein+of+pathogenic+Leptospira+species%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immun%22%5BJournal%5D)">Molecular cloning and sequence analysis of the gene encoding LipL41, a surface-exposed lipoprotein of pathogenic Leptospira species.</a> Infect Immun. 64 (6), 2322-2330 (1996).</li>
<li>Evangelista, K. V., Hahn, B., Wunder, E. A. Jr, Ko, A. I., Haake, D. A., Coburn, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+cell-binding+adhesins+of+Leptospira+interrogans%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Negl+Trop+Dis%22%5BJournal%5D)">Identification of cell-binding adhesins of Leptospira interrogans.</a> PLoS Negl Trop Dis. 8 (10), e0003215(2014).</li>
<li>Picardeau, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Virulence+of+the+zoonotic+agent+of+leptospirosis%3A+still+terra+incognita%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Virulence of the zoonotic agent of leptospirosis: still terra incognita.</a> Nat Rev Microbiol. 15 (5), 297-307 (2017).</li>
<li>Hu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Purification+and+identification+of+membrane+proteins+from+urinary+extracellular+vesicles+using+Triton+X-114+phase+partitioning%5BTitle%5D)+AND+%22J+Proteome+Res%22%5BJournal%5D)">Purification and identification of membrane proteins from urinary extracellular vesicles using Triton X-114 phase partitioning.</a> J Proteome Res. 17 (1), 86-96 (2018).</li>
<li>Radolf, J. D., Chamberlain, N. R., Clausell, A., Norgard, M. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+and+localization+of+integral+membrane+proteins+of+virulent+Treponema+pallidum+subsp.+pallidum+by+phase+partitioning+with+the+nonionic+detergent+Triton+X-114%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immun%22%5BJournal%5D)">Identification and localization of integral membrane proteins of virulent Treponema pallidum subsp. pallidum by phase partitioning with the nonionic detergent Triton X-114.</a> Infect Immun. 56 (2), 490-498 (1988).</li>
<li>Nally, J. E., Whitelegge, J. P., Bassilian, S., Blanco, D. R., Lovett, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+the+outer+membrane+proteome+of+Leptospira+interrogans+expressed+during+acute+lethal+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immun%22%5BJournal%5D)">Characterization of the outer membrane proteome of Leptospira interrogans expressed during acute lethal infection.</a> Infect Immun. 75 (2), 766-773 (2007).</li>
<li>Crother, T. R., Nally, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+bacterial+membrane+proteins+produced+during+mammalian+infection+using+hydrophobic+antigen+tissue+Triton+extraction+%28HATTREX%29%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Analysis of bacterial membrane proteins produced during mammalian infection using hydrophobic antigen tissue Triton extraction (HATTREX).</a> Curr Protoc Microbiol. 9 (1), mc1201s9(2008).</li>
<li>Casey, T. M., Meade, J. L., Hewitt, E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organelle+proteomics%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Proteomics%22%5BJournal%5D)">Organelle proteomics.</a> Mol Cell Proteomics. 6 (5), 767-780 (2007).</li>
<li>Bell, A. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proteomics+characterization+of+abundant+Golgi+membrane+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Proteomics characterization of abundant Golgi membrane proteins.</a> J Biol Chem. 276 (7), 5152-5165 (2001).</li>
<li>Boonciew, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+antibody+detection+for+canine+leptospirosis%3A+ELISAs+modified+using+local+leptospiral+serovar+isolates+from+asymptomatic+dogs%5BTitle%5D)+AND+%22Animals%22%5BJournal%5D)">Improved antibody detection for canine leptospirosis: ELISAs modified using local leptospiral serovar isolates from asymptomatic dogs.</a> Animals. 14 (6), (2024).</li>
<li>Nogueira, S. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Leptospira+interrogans+enolase+is+secreted+extracellularly+and+interacts+with+plasminogen%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Leptospira interrogans enolase is secreted extracellularly and interacts with plasminogen.</a> PLoS One. 8 (10), e0078150(2013).</li>
<li>Riazi, M., Zainul, F. Z., Bahaman, A. R., Amran, F., Khalilpour, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+72+kDa+protein+of+Leptospira+interrogans.+as+a+diagnostic+marker+in+acute+leptospirosis%5BTitle%5D)+AND+%22Indian+J+Med+Res%22%5BJournal%5D)">Role of 72 kDa protein of Leptospira interrogans. as a diagnostic marker in acute leptospirosis.</a> Indian J Med Res. 139 (2), 308-313 (2014).</li>
<li>Domingos, R. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Features+of+two+proteins+of+Leptospira+interrogans+with+potential+role+in+host-pathogen+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Features of two proteins of Leptospira interrogans with potential role in host-pathogen interactions.</a> BMC Microbiol. 12, 50(2012).</li>
<li>Dhandapani, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proteomic+approach+and+expression+analysis+revealed+the+differential+expression+of+predicted+leptospiral+proteases+capable+of+ECM+degradation%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys+Acta+Proteins+Proteomics%22%5BJournal%5D)">Proteomic approach and expression analysis revealed the differential expression of predicted leptospiral proteases capable of ECM degradation.</a> Biochim Biophys Acta Proteins Proteomics. 1866 (5-6), 712-721 (2018).</li>
<li>Matsunaga, J., Werneid, K., Zuerner, R. L., Frank, A., Haake, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((LipL46+is+a+novel+surface-exposed+lipoprotein+expressed+during+leptospiral+dissemination+in+the+mammalian+host%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiology%22%5BJournal%5D)">LipL46 is a novel surface-exposed lipoprotein expressed during leptospiral dissemination in the mammalian host.</a> Microbiology. 152 (12), 3777-3786 (2006).</li>
<li>Pinne, M., Haake, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comprehensive+approach+to+identification+of+surface-exposed%2C+outer+membrane-spanning+proteins+of+Leptospira+interrogans%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">A comprehensive approach to identification of surface-exposed, outer membrane-spanning proteins of Leptospira interrogans.</a> PLoS One. 4 (6), e6071(2009).</li>
<li>Madathiparambil, M. G., Cattavarayane, S., Perumana, S. R., Manickam, G. D., Sehgal, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Presence+of+46+kDa+gelatinase+on+the+outer+membrane+of+Leptospira%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Presence of 46 kDa gelatinase on the outer membrane of Leptospira.</a> Curr Microbiol. 62 (5), 1478-1482 (2011).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Ácido acético</td><td>&nbsp; Sigma</td><td>&nbsp; 695092</td><td></td></tr><tr><td>Acetona</td><td>&nbsp; &nbsp; Sigma</td><td>&nbsp; 32201</td><td></td></tr><tr><td>Acrilamida</td><td>&nbsp; &nbsp; Sigma</td><td>&nbsp; A-3553</td><td></td></tr><tr><td>Persulfato de amônio</td><td>&nbsp; &nbsp; Sigma</td><td>&nbsp; A-3678</td><td></td></tr><tr><td>Equilíbrio</td><td>&nbsp; SHIMADUZ</td><td>&nbsp; Z741079</td><td></td></tr><tr><td>Bis Acrilamida</td><td>&nbsp; &nbsp; Sigma</td><td>&nbsp; M7279</td><td></td></tr><tr><td>Soro bovino albumina fração V (BSA)</td><td>&nbsp; Sigma</td><td>&nbsp; A-8022</td><td></td></tr><tr><td>Azul de Bromofenol</td><td>&nbsp; &nbsp; Sigma</td><td>&nbsp; B-8026</td><td></td></tr><tr><td>Tubo de centrífuga (50 mL)</td><td>Tarsons</td><td>500020</td><td></td></tr><tr><td>Frasco cônico com tampa (150 mL)</td><td>Tarsons</td><td>431030</td><td></td></tr><tr><td>Centrífuga de resfriamento</td><td>&nbsp; Eppendorf</td><td>&nbsp; 5355316200</td><td></td></tr><tr><td>Coomassie azul brilhante</td><td>&nbsp; &nbsp; Sigma</td><td>1.12553</td><td></td></tr><tr><td>Microscópio de campo escuro</td><td>&nbsp; ZEISS</td><td>&nbsp; GmbH37081</td><td></td></tr><tr><td>Toalhetes de tarefas delicadas</td><td>Ciência Kimtech</td><td>34155</td><td></td></tr><tr><td>Banho seco</td><td>&nbsp; Eppendorf</td><td>&nbsp; 535531620</td><td></td></tr><tr><td>Ellinghausen&ndash; McCullough&ndash; Johnson&ndash; Harris (EMJH) médio, Difco</td><td>&nbsp; Difco</td><td>&nbsp; 279410</td><td></td></tr><tr><td>Bandejas de gel: As bandejas de gel devem ser pelo menos 2cm mais largas em dimensões e ter superfície lisa e plana com tampa.&nbsp;</td><td>&nbsp; Hoefer</td><td>&nbsp; Não aplicável</td><td></td></tr><tr><td>Bico de Vidro (150 mL)</td><td>Tarsons</td><td>421030</td><td></td></tr><tr><td>Glicina G8790</td><td>&nbsp; &nbsp; Sigma</td><td>&nbsp; G-8898</td><td></td></tr><tr><td>Papel de filtro de mata-borrão Immobilon</td><td>Millipore</td><td>IBFP0813C</td><td></td></tr><tr><td>Configuração semi-seca de imunotransferência</td><td>&nbsp; ATTA</td><td>&nbsp; AE-6675</td><td></td></tr><tr><td>Incubadora - Para incubar as bandejas de gel por 18 horas a 37 ° C.</td><td>&nbsp; EYELA</td><td>&nbsp; SLI-700</td><td></td></tr><tr><td>Fluxo de ar laminar</td><td>&nbsp; Não aplicável</td><td>&nbsp; Não aplicável</td><td></td></tr><tr><td>Luminol</td><td>&nbsp; Sigma</td><td>&nbsp; 09253</td><td></td></tr><tr><td>Cloreto de magnésio M8266</td><td>&nbsp; Sigma</td><td>&nbsp; M8266</td><td></td></tr><tr><td>Agitador magnético</td><td>&nbsp; TARSONS</td><td>&nbsp; 6040</td><td></td></tr><tr><td>Metanol</td><td>&nbsp; &nbsp; Sigma</td><td>&nbsp; 17995-7</td><td></td></tr><tr><td>Pontas de Micropipeta (10 &micro; L&ndash; 10 mL)</td><td>Axygen</td><td>T-10, T-200-C, T-1000-C, T-10ML-C</td><td></td></tr><tr><td>Micropipetas</td><td>&nbsp; Eppendorf</td><td>&nbsp; EP2231300010</td><td></td></tr><tr><td>Microtubos (1,5 mL Safe-Lock)</td><td>Eppendorf</td><td>EP022363212</td><td></td></tr><tr><td>Mini rotação</td><td>&nbsp; Genaxy</td><td>&nbsp; GEN-MINI-6K</td><td></td></tr><tr><td>Leitor multimodo</td><td>BMG LABTECH</td><td>&nbsp; S/N 413-3877</td><td></td></tr><tr><td>Leite desnatado bovino</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M7409</td><td></td></tr><tr><td>Ácido P-cumárico</td><td>&nbsp; &nbsp; Sigma</td><td>&nbsp; C9008</td><td></td></tr><tr><td>Solução salina tamponada com fosfato</td><td>&nbsp; &nbsp; Sigma</td><td>Pág. 4417&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Geladeira</td><td>&nbsp; LG</td><td>&nbsp; GC-B217BLJ2</td><td></td></tr><tr><td>Rocker - Agitador oscilante ou rotativo com baixa velocidade para coloração do gel.</td><td>&nbsp; TARSONS</td><td>&nbsp; 4080</td><td></td></tr><tr><td>SDS-PAGE SETUP- Aparelho de eletroforese</td><td>&nbsp; Hoefer, Inc.</td><td>&nbsp; SE300-10A-1.0</td><td>&nbsp; Modelo de Hoefer ' miniVE' que pode moldar gel de 10 cm x 8 cm de espessura de 1 mm.&nbsp;</td></tr><tr><td>Cloreto de sódio</td><td>&nbsp; &nbsp; &nbsp; Sigma</td><td>&nbsp; 5886</td><td></td></tr><tr><td>Dodecil sulfato de sódio (SDS)</td><td>&nbsp; &nbsp; Sigma</td><td>&nbsp; L-4396</td><td></td></tr><tr><td>TEMED</td><td>&nbsp; &nbsp; Sigma</td><td>&nbsp; T-9281</td><td></td></tr><tr><td>Tritão X-114</td><td>&nbsp; &nbsp; Sigma</td><td>648468</td><td></td></tr><tr><td>Trizma Base (TRIS) T6066</td><td>&nbsp; &nbsp; Sigma</td><td>&nbsp; T6066</td><td></td></tr><tr><td>Vórtice</td><td>&nbsp; TARSONS</td><td>&nbsp; 3020</td><td></td></tr></tbody></table>

enriquecimento de proteínas subcelulares em leptospira usando uma abordagem de fracionamento baseada em triton x-114

Enriching Subcellular Proteins in Leptospira Using a Triton X-114-Based Fractionation Approach

Neste experimento, empregamos a espiroqueta Leptospira como organismo modelo para extrair compartimentos subcelulares. Empregamos uma metodologia estratégica ancorada no ponto de turvação e na concentração micelial crítica (CMC), aproveitando a eficácia do Triton X-114, um detergente não iônico (Figura 1). Antes de prosseguir, a estimativa de proteínas foi conduzida para avaliar a concentração em cada fração para uma única réplica biológica. Observou-se uma razão de concentração de ...

Enriquecimento de proteínas subcelulares em Leptospira usando uma abordagem de fracionamento baseada em Triton X-114

Prokaryotes lack precise subcellular organelles but exhibit distinct regions such as cytoplasm, inner membrane, periplasm, and outer membrane, where most ...

enriching-subcellular-proteins-leptospira-using-triton-x-114-based

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Bioquímica

A purificação por afinidade das proteínas marcadas em combinação com espectrometria de massa (STDA) é um método poderoso para o mapeamento sistemático de redes de interacção de proteínas e para a investigação do mecanismo de base de processos biológicos. Aqui, descrevemos um otimizado seqüencial peptídeo afinidade (SPA) APMS procedimento desenvolvido para a...

Identificação de complexos de proteínas em<em&gt; Escherichia coli</em&gt; Utilizando a purificação por afinidade sequencial Peptide em combinação com espectrometria de massa tandem

Nós apresentamos uma variação da abordagem QUICK (Imunoprecipitação quantitativos em conjunto com Knockdown) que foi introduzida anteriormente para distinguir entre verdadeiros e falsos interacções proteína-proteína. A nossa abordagem é...

Um protocolo para a identificação de interações proteína-proteína Baseado<sup&gt; 15</sup&gt; Etiquetagem N Metabólica, imunoprecipitação, Quantitativa Espectrometria de Massa e Affinity Modulação

Fonte: Armbruster, K. M., Meredith, T. C. Enriquecimento de Lipoproteínas Bacterianas e Preparação de Lipopeptídeos N-terminais para Determinação Estrutural por Espectrometria de Massa. J. Vis. Exp. (2018)Este vídeo demonstra o enriquecimento de lipoproteínas bacterianas usando um detergente não iônico que sofre separação de fases após o aquecimento. Por meio de mudanças sequenciais de temperatura e etapas de centrifugação, as lipoproteínas são seletivamente divididas na fase detergente,...

Enriquecimento de lipoproteínas bacterianas usando separação de fases de detergente não iônico

Estudos biofísicos e bioquímicos das interações entre os domínios membrana-proteína embutidos enfrentar muitos desafios técnicos, a primeira das quais é a obtenção de material de estudo adequado. Este artigo descreve um protocolo para a produção e purificação de complexos estabilizados por dissulfureto transmembranares peptídicas que são adequadas para análise estrutural por ressonância solução magnética nuclear (RMN) e de outras aplicações analíticas.

Complexos de produção de transmembrana Disulfide-estabilizados Peptídicos para estudos estruturais

A abordagem bioquímica é descrita a identificação in vivo de interacções proteína-proteína (PPI), de proteínas de membrana. O método combina a proteína de ligação cruzada, de purificação por afinidade e espectrometria de massa, e é adaptável para quase qualquer tipo de célula ou organismo. Com esta abordagem, embora a identificação de IPP transientes torna-se possível.

Membrana-COLUNA: Uma Ferramenta bioquímicos na identificação de interações proteína-proteína de Proteínas de Membrana In Vivo

O enriquecimento de lipoproteínas bacterianas usando uma fase de tensoativo não-iônico, método de particionamento é descrito para utilização directa em ensaios TLR ou outras aplicações. Novos passos são detalhados para preparar tryptic lipopeptides N-terminal para caracterização estrutural por espectrometria de massa.

Enriquecimento de lipoproteínas bacterianas e preparação do N-terminal Lipopeptides de determinação estrutural por espectrometria de massa

Um protocolo para a extração de um acompanhante de metal de transição periplasmático no contexto dos seus parceiros de ligação nativo e caracterização Biofísica de seu conteúdo de substrato por raios-x, absorção fluorescência e radiometal é apresentada.

Captação de Metal essencial em bactérias Gram-negativas: fluorescência, radioisótopos, um raio-x e fracionamento da pilha

Este protocolo descreve técnicas utilizadas para determinar as estruturas do canal de íon pela microscopia cryo-elétron, incluindo um sistema de baculovirus usado eficientemente expressar genes em células de mamíferos, com esforço mínimo e toxicidade, extração de proteínas, purificação, e verificação de qualidade, preparação da amostra grade e triagem, bem como coleta de dados e processamento.

Expressão e purificação de TRPC3 os humanos sensíveis lipídico cação canal para determinação estrutural por microscopia de Single-particle Cryo-elétron

Aqui, nós fornecemos um protocolo detalhado para isolar pequenas vesículas extracelulares (EVs) de tecidos, incluindo amostras de cérebro e tumor. Este método oferece uma técnica reprodutível para extrair EVs do tecido sólido para mais análises a jusante.

Extração de vesículas extracelulares de todo tecido

Este protocolo descreve a cromatografia de exclusão de tamanho, uma técnica fácil e reprodutível para enriquecer as vesículas extracelulares mycobacterium tuberculosis de supernascedores culturais.

Mycobacterium tuberculosis Enriquecimento de vesícula extracelular através da cromatografia de exclusão de tamanho

Este protocolo descreve um método rápido e reprodutível de extração e precipitação à base de solvente orgânico para purificar polipeptídeos semelhantes a elastina (ELP) de Escherichia coli, oferecendo uma alternativa potencialmente escalável aos métodos convencionais de purificação de ELP.

Purificação eficiente de polipeptídeos semelhantes à elastina (ELPs) de E. coli usando um método de extração e precipitação à base de solvente orgânico

Aprenda a enriquecer proteínas subcelulares em Leptospira usando fracionamento com Triton X-114 e espectrometria de massa. Este método identifica fatores de virulência em bactérias patogênicas gram-negativas.

Enriquecimento de proteínas subcelulares em Leptospira usando uma abordagem de fracionamento baseada em Triton X-114

Explorar mais vídeos