Name: Isolamento e registro de patch-clamp de células inteiras da microglia hipocampal de camundongos adultos (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-09-27T14:47:00.000+00:00
Duration: 8 min 34 s
Description: Aprenda o isolamento e registro de patch-clamp de células inteiras da microglia hipocampal de camundongos adultos. Este método permite analisar correntes de potássio e propriedades eletrofisiológicas em seu ambiente nativo.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>Registro eletrofisiológico da microglia hipocampal de camundongos adultos

<ol><li>Ginhoux, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fate+mapping+analysis+reveals+that+adult+microglia+derive+from+primitive+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Fate mapping analysis reveals that adult microglia derive from primitive macrophages.</a> Science. 330 (6005), 841-845 (2010).</li>
<li>Tremblay, M. E., Lowery, R. L., Majewska, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglial+interactions+with+synapses+are+modulated+by+visual+experience%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Biol%22%5BJournal%5D)">Microglial interactions with synapses are modulated by visual experience.</a> PLoS Biol. 8 (11), e1000527(2010).</li>
<li>Voet, S., Prinz, M., Van Loo, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+in+central+nervous+system+inflammation+and+multiple+sclerosis+pathology%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Microglia in central nervous system inflammation and multiple sclerosis pathology.</a> Trends Mol Med. 25 (2), 112-123 (2019).</li>
<li>Salter, M. W., Beggs, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sublime+microglia%3A+Expanding+roles+for+the+guardians+of+the+CNS%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Sublime microglia: Expanding roles for the guardians of the CNS.</a> Cell. 158 (1), 15-24 (2014).</li>
<li>Wohleb, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuron-microglia+interactions+in+mental+health+disorders%3A+For+better%2C+and+for+worse%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Neuron-microglia interactions in mental health disorders: For better, and for worse.</a> Front Immunol. 7, 544(2016).</li>
<li>Kettenmann, H., Hanisch, U. K., Noda, M., Verkhratskya, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physiology+of+microglia%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Rev%22%5BJournal%5D)">Physiology of microglia.</a> Physiol Rev. 91 (2), 461-553 (2011).</li>
<li>Sarkar, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglial+ion+channels%3A+Key+players+in+non-cell+autonomous+neurodegeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol+Dis%22%5BJournal%5D)">Microglial ion channels: Key players in non-cell autonomous neurodegeneration.</a> Neurobiol Dis. 174, 105861(2022).</li>
<li>Hanisch, U. K., Kettenmann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia%3A+Active+sensor+and+versatile+effector+cells+in+the+normal+and+pathologic+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Microglia: Active sensor and versatile effector cells in the normal and pathologic brain.</a> Nat Neurosci. 10 (11), 1387-1394 (2007).</li>
<li>Collins, H. Y., Bohlen, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+culture+of+rodent+microglia+to+promote+a+dynamic+ramified+morphology+in+serum-free+medium%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Isolation and culture of rodent microglia to promote a dynamic ramified morphology in serum-free medium.</a> J Vis Exp. 133, e57122(2018).</li>
<li>Lyons, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+physiologic+properties+of+microglia+and+blood-borne+cells+in+rat+brain+slices+after+permanent+middle+cerebral+artery+occlusion%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Distinct physiologic properties of microglia and blood-borne cells in rat brain slices after permanent middle cerebral artery occlusion.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 20 (11), 1537-1549 (2000).</li>
<li>Li, Q., Lan, X., Han, X., Wang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+tmem119%2FSALL1+and+CCR2%2FCD69+in+FACS-sorted+microglia-+and+monocyte%2Fmacrophage-enriched+cell+populations+after+intracerebral+hemorrhage%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Expression of tmem119/SALL1 and CCR2/CD69 in FACS-sorted microglia- and monocyte/macrophage-enriched cell populations after intracerebral hemorrhage.</a> Front Cell Neurosci. 12, 520(2018).</li>
<li>Sarkar, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kv1.3+modulates+neuroinflammation+and+neurodegeneration+in+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Kv1.3 modulates neuroinflammation and neurodegeneration in Parkinson's disease.</a> J Clin Invest. 130 (8), 4195-4212 (2020).</li>
<li>Maezawa, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kv1.3+inhibition+as+a+potential+microglia-targeted+therapy+for+Alzheimer%27s+disease%3A+Preclinical+proof+of+concept%5BTitle%5D)+AND+%22Brain%22%5BJournal%5D)">Kv1.3 inhibition as a potential microglia-targeted therapy for Alzheimer's disease: Preclinical proof of concept.</a> Brain. 141 (2), 596-612 (2018).</li>
<li>Delbridge, A. R. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organotypic+brain+slice+culture+microglia+exhibit+molecular+similarity+to+acutely+isolated+adult+microglia+and+provide+a+platform+to+study+neuroinflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Organotypic brain slice culture microglia exhibit molecular similarity to acutely isolated adult microglia and provide a platform to study neuroinflammation.</a> Front Cell Neurosci. 14, 592005(2020).</li>
<li>Volden, T. A., Reyelts, C. D., Hoke, T. A., Arikkath, J., Bonasera, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Validation+of+flow+cytometry+and+magnetic+bead-based+methods+to+enrich+cns+single+cell+suspensions+for+quiescent+microglia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuroimmune+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Validation of flow cytometry and magnetic bead-based methods to enrich cns single cell suspensions for quiescent microglia.</a> J Neuroimmune Pharmacol. 10 (4), 65-665 (2015).</li>
<li>Wulff, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+voltage-gated+kv1.3+k%28%2B%29+channel+in+effector+memory+t+cells+as+new+target+for+ms%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">The voltage-gated kv1.3 k(+) channel in effector memory t cells as new target for ms.</a> J Clin Invest. 111 (11), 1703-1713 (2003).</li>
<li>Tan, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biocytin-labeling+in+whole-cell+recording%3A+Electrophysiological+and+morphological+properties+of+pyramidal+neurons+in+CYLD-deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Molecules%22%5BJournal%5D)">Biocytin-labeling in whole-cell recording: Electrophysiological and morphological properties of pyramidal neurons in CYLD-deficient mice.</a> Molecules. 28 (10), 4092(2023).</li>
<li>Manitz, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flow+cytometric+characterization+of+microglia+in+the+offspring+of+polyi%3AC+treated+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Flow cytometric characterization of microglia in the offspring of polyi:C treated mice.</a> Brain Res. 1636, 172-182 (2016).</li>
<li>Xu, Y. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+modified+protocol+of+mouse+hippocampal+primary+microglia+culture+by+using+manual+dissociation%2C+magnetic+activated+cell+sorting+and+tic+medium%5BTitle%5D)+AND+%22Sheng+Li+Xue+Bao%22%5BJournal%5D)">A modified protocol of mouse hippocampal primary microglia culture by using manual dissociation, magnetic activated cell sorting and tic medium.</a> Sheng Li Xue Bao. 71 (6), 883-893 (2019).</li>
<li>Zelenka, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+protocol+for+the+isolation+of+highly+purified+neonatal+murine+microglia+and+astrocytes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Novel protocol for the isolation of highly purified neonatal murine microglia and astrocytes.</a> J Neurosci Methods. 366, 109420(2022).</li>
<li>Keren-Shaul, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+unique+microglia+type+associated+with+restricting+development+of+alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">A unique microglia type associated with restricting development of alzheimer's disease.</a> Cell. 169 (7), 1276-1290.e17 (2017).</li>
<li>Yang, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Various+cell+populations+within+the+mononuclear+fraction+of+bone+marrow+contribute+to+the+beneficial+effects+of+autologous+bone+marrow+cell+therapy+in+a+rodent+stroke+model%5BTitle%5D)+AND+%22Transl+Stroke+Res%22%5BJournal%5D)">Various cell populations within the mononuclear fraction of bone marrow contribute to the beneficial effects of autologous bone marrow cell therapy in a rodent stroke model.</a> Transl Stroke Res. 7 (4), 322-330 (2016).</li>
<li>Gingras, M., Gagnon, V., Minotti, S., Durham, H. D., Berthod, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimized+protocols+for+isolation+of+primary+motor+neurons%2C+astrocytes+and+microglia+from+embryonic+mouse+spinal+cord%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Optimized protocols for isolation of primary motor neurons, astrocytes and microglia from embryonic mouse spinal cord.</a> J Neurosci Methods. 163 (1), 111-118 (2007).</li>
<li>Ramesha, S., Rayaprolu, S., Rangaraju, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flow+cytometry+approach+to+characterize+phagocytic+properties+of+acutely-isolated+adult+microglia+and+brain+macrophages+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Flow cytometry approach to characterize phagocytic properties of acutely-isolated adult microglia and brain macrophages in vitro.</a> J Vis Exp. 160, e61467(2020).</li>
<li>Mccarthy, K. D., De Vellis, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+separate+astroglial+and+oligodendroglial+cell+cultures+from+rat+cerebral+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Preparation of separate astroglial and oligodendroglial cell cultures from rat cerebral tissue.</a> J Cell Biol. 85 (3), 890-902 (1980).</li>
<li>Sakmann, B., Edwards, F., Konnerth, A., Takahashi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patch+clamp+techniques+used+for+studying+synaptic+transmission+in+slices+of+mammalian+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Q+J+Exp+Physiol%22%5BJournal%5D)">Patch clamp techniques used for studying synaptic transmission in slices of mammalian brain.</a> Q J Exp Physiol. 74 (7), 1107-1118 (1989).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Placa de Petri de 100 mm</td><td>Corning</td><td>353003</td><td></td></tr><tr><td>15 mL Tubos Falcon</td><td>BD</td><td>352096</td><td></td></tr><tr><td>Placas de 24 poços</td><td>BD</td><td>353047</td><td></td></tr><tr><td>Placa de Petri de 35 mm</td><td>Corning</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>353001-50 mL Tubos Falcon</td><td>BD</td><td>352070</td><td></td></tr><tr><td>70 &mu; Triagem de células m</td><td>Miltenyi</td><td>130-095-823</td><td>Para remover aglomerados de células antes da classificação de células</td></tr><tr><td>Kit de dissociação cerebral de camundongo adulto</td><td>Miltenyi</td><td>130- 107-677</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo Anti-CD11b</td><td>Bio-Rad</td><td>MCA74</td><td>Cabra Anti-mouse IgG também disponível. Para bloquear imunoglobulinas endógenas.</td></tr><tr><td>Anticorpo anti-Iba 1</td><td>SYSY</td><td>234308</td><td>cabra Anti-cobaia IgG) também disponível. Para bloquear imunoglobulinas endógenas.</td></tr><tr><td>Axon Digidata 1440A</td><td>USA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Axon MultiClamp 700B Amplificador</td><td>USA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>BSA Albumina Fraction V</td><td>BioFrox</td><td>4240GR500</td><td>Serum</td></tr><tr><td>C57BL/6 camundongos&nbsp;</td>Centro Animal de <td></td><td></td><td>Laboratório Médico de Guangdong</td></tr><tr><td>CD11 b/c MicroBeads</td><td>Miltenyi</td><td>130-105-634</td><td></td></tr><tr><td>Hidrato de Cloral</td><td>Absin</td><td>abs47051394</td><td>Amplamente utilizado como anestesia em camundongos</td></tr><tr><td>Clampfit 10.6</td><td>USA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microscópio Confocal</td><td>Zeiss</td><td>&nbsp; LSM 800</td><td></td></tr><tr><td>Meio de cultura</td><td>Fisher Scientific</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>C11995500BT-DAPI corante</td><td>Beyotime</td><td>C1002</td><td></td></tr><tr><td>Extrator de eletrodos</td><td>Narishige</td><td>PC-10</td><td></td></tr><tr><td>HBSS</td><td>Servicebio</td><td>G4203</td><td></td></tr><tr><td>Agitador horizontal</td><td>SCILOGEX</td><td>SLK-O3000-S</td><td></td></tr><tr><td>Software de análise de imagem</td><td>Fiji</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Colunas MACS</td><td>Miltenyi</td><td>130-042-201</td><td></td></tr><tr><td>Separadores MACS</td><td>Miltenyi</td><td>130-042-102</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldeído</td><td>Fisher Scientific</td><td>T353-500</td><td>Use solução fresca a 4% em 1X PBS, pH 7.2-7.4.&nbsp;</td></tr><tr><td>Poli-L-lisina</td><td>Beyotime</td><td>&nbsp; C0313</td><td>Revestimento de lamínula</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma</td><td>X100</td><td></td></tr></tbody></table>

isolamento e registro de patch-clamp de células inteiras da microglia hipocampal de camundongos adultos

Isolation and Whole-Cell Patch-Clamp Recording of Hippocampal Microglia from Adult Mice

Resumidamente, o processo envolve o isolamento da micróglia hipocampal do cérebro de camundongos adultos, seguido pelo registro de patch-clamp de células inteiras dessas células (Figura 1). O procedimento começa com a dissecação do hipocampo de camundongos adultos C57BL / 6J de 3 a 5 meses de idade. Especificamente, todo o cérebro é removido após a perfusão e colocado em uma placa de cultura contendo PBS gelado (Figura 2A). Para garantir o isolamento agudo das células do hipocampo, o córtex cerebral é removido e o tecido hipocampal em forma de meia-lua é isolado intacto (Figura 2B).
Para uma qualidade celular ideal e subsequentes registros de patch-clamp de células inteiras de alta qualidade, é crucial controlar o tempo de digestão durante a preparação da suspensão de célula única. O estudo agitou manualmente o tecido hipocampal na mistura enzimática e limitou estritamente o período de digestão a não mais que 15 minutos (Figura 3). As células foram então isoladas pelo método MACS, alcançando uma pureza de 86,20% ± 0,68%19,20. Para confirmar que essas células classificadas eram microglia, marcadores de superfície microglial foram testados por imunofluorescência usando anticorpos anti-Iba1 e anti-CD11b, que são amplamente utilizados para detectar microglia18. Os resultados indicaram que as células isoladas foram CD11b e Iba1 positivas, confirmando o sucesso do isolamento da microglia (Figura 4).
Finalmente, para avaliar se a micróglia agudamente isolada é de alta qualidade para experimentos de acompanhamento, descrevemos como realizar registros de patch-clamp de células inteiras para avaliar as correntes de potássio microglial. A micróglia registrada teve uma capacitância média de membrana de 10,42 ± 2,05 (Figura 5). Os resultados demonstraram que as correntes microgliais de potássio podem ser registradas, indicando que as microglias agudamente isoladas são adequadas para estudos neurobiológicos.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67315/67315fig01.jpg"> 
Figura 1: Visão geral do procedimento experimental. Existem quatro etapas principais: os tecidos cerebrais são cuidadosamente extraídos e o hipocampo é dissecado bilateralmente; os tecidos do hipocampo são digeridos para preparar uma suspensão unicelular usando uma mistura enzimática, conforme detalhado na seção do protocolo; As células-alvo são isoladas por um método de classificação de células ativadas por magnetismo; e as correntes de potássio em células agudamente isoladas são analisadas por registro de patch-clamp de célula inteira. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67315/67315fig01large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67315/67315fig02.jpg"> 
Figura 2: Dissecção do hipocampo. (A) Todo o cérebro de um camundongo de 3 a 5 meses de idade. (B) Hipocampo bilateral isolado. Barra de escala: 0,5 cm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67315/67315fig02large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67315/67315fig03.jpg"> 
Figura 3: Diagrama esquemático mostrando a digestão dos tecidos do hipocampo. Ilustração de etapas experimentais críticas, garantindo que o tecido hipocampal seja digerido em uma suspensão unicelular adicionando misturas enzimáticas a 37 ° C com agitação contínua por até 15 min. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67315/67315fig03large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67315/67315fig04.jpg"> 
Figura 4: Identificação da micróglia hipocampal agudamente isolada. Imagens confocais representativas mostrando células CD11b (verde) e Iba1 (vermelhas) positivas purificadas do hipocampo, confirmando que as células isoladas são microglia. Barra de escala: 10 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67315/67315fig04large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão ampliada desta figura.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67315/67315fig05.jpg"> 
Figura 5: Registro das correntes de potássio microglial de células inteiras. (A) Um eletrodo de registro é posicionado na superfície da microglia hipocampal isolada. Barra de escala: 20 μm. (B) Correntes representativas de potássio da microglia hipocampal agudamente isolada sob condições de grampo de tensão. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67315/67315fig05large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>

Isolamento e registro de patch-clamp de células inteiras da microglia hipocampal de camundongos adultos

Microglia are resident immune cells in the brain that interact with neurons to maintain the homeostasis of the central nervous system (CNS). Studies show ...

isolation-whole-cell-patch-clamp-recording-hippocampal-microglia-from

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

A preparação de fatias cerebrais agudas de isolado hipocampo, assim como as gravações simultâneas electrofisiológicas de astrócitos e neurónios...

Dois registros eletrofisiológicos de sinapticamente evocadas Respostas astroglial e neuronal em fatias hipocampais agudas

O vídeo demonstra uma técnica para isolar a microglia do córtex de um cérebro de camundongo adulto. Primeiro, o córtex sofre segmentação e homogeneização para remover neurônios e outras células gliais, preservando a microglia. Em seguida, a suspensão celular é exposta a microesferas magnéticas anti-mielina e a um campo magnético, separando efetivamente as células da micróglia e mielóides dos detritos de mielina e células contendo mielina.

Isolamento da microglia do córtex de um cérebro de camundongo adulto

O vídeo demonstra um protocolo para estudar interações sinápticas e respostas neuronais em uma fatia de cérebro de hipocampo de camundongo transfectado. Envolve iluminar neurônios sensoriais de longo alcance para desencadear potenciais de ação e registrar os potenciais pós-sinápticos excitatórios resultantes no neurônio registrado usando a técnica de patch-clamp de célula inteira.

Fotoestimulação e gravações de grampo de remendo de células inteiras de neurônios em fatias de hipocampo de camundongos

Este vídeo demonstra a gravação da atividade da rede neuronal rítmica, também conhecida como oscilações, em um hipocampo isolado. Os eletrodos são inseridos em várias camadas e posições espaciais para detectar e analisar as oscilações. Isso mostra as composições neuronais únicas e a conectividade da rede neuronal em diferentes camadas do hipocampo.

Registro in vitro de oscilações no hipocampo de camundongos

Uma chave para o sucesso na investigação de biologia da microglia é a preservação do immunofunction microglial ex vivo durante o isolamento a partir de tecido do SNC. Isolando microglia através de resultados de agitação rotativos em culturas de células altamente puras e imuno avaliado pela imagem fluorescente, imunocitoquímica e ELISA após a ativação da microglia com o lipopolissacarídeo estímulos pró-inflamatória (LPS) e Pam 3 CSK 4 (Pam).

Isolamento de Cortical Microglia com Imunofenótipo preservada e funcionalidades de murino Os recém-nascidos

Redes corticais são controlados por um conjunto de pequenos, mas diversificada de interneurónios inibitórios. Investigação funcional dos interneurônios, portanto, requer a gravação específica e rigorosa identificação. Descrito aqui é uma abordagem conjunta, envolvendo gravações de células inteiras de pares simples ou synaptically acoplados de neurônios com rotulagem intracelular, post-hoc Análise morfológica e imunocitoquímica.

Whole-cell Recordings patch-clamp de Morphologically- e identificados Neuroquimicamente hipocampo Interneurônios

Aqui, apresentamos um protocolo para a gravação da teta de rede neuronal rítmica e das oscilações gama de uma preparação isolada do hipocampo inteiro. Descrevemos os passos experimentais da extração do hipocampo para detalhes de gravações de grampos de campo, unidade e toda célula, bem como a estimulação optogenética do ritmo de theta.

Tuning na banda Theta do hipocampo<em&gt; In Vitro</em&gt;: Metodologias para gravação a partir do Circuito de Septohippocampal de Roedores Isolado

Nós fornecemos um protocolo para o isolamento da microglia de diferentes regiões dissecadas de um hemisfério cerebral de camundongo adulto, seguido de preparação de biblioteca semi-automatizada para sequenciamento profundo de RNA unicelular de transcrições completas. Este método ajudará a elucidar a heterogeneidade funcional da microglia na saúde e na doença.

Isolamento da Microglia específica da Região de um hemisfério cerebral de camundongo adulto para sequenciamento profundo de RNA unicelular

Apresentamos um protocolo para preparar fatias agudas do hipocampo dorsal-intermediário de camundongos. Comparamos esta preparação transversal com o corte coronal em termos de qualidade de gravações e preservação de características morfológicas de neurônios registrados.

Preparação de fatias agudas do hipocampo dorsal para gravação de células inteiras e reconstrução neuronal no giro dentado de camundongos adultos

Este trabalho descreve um método para observação crônica in vivo da microglia em repouso no CA1 do hipocampo de camundongos usando cirurgia precisamente controlada e microscopia de dois fótons.

In vivo Imagem crônica de dois fótons da microglia no hipocampo de camundongos

Descrevemos um protocolo para isolar células microgliais do hipotálamo de camundongo (ou pequenas estruturas cerebrais equivalentes) usando classificação de células ativadas magneticamente (MACS), em um tempo relativamente curto. A microglia hipotalâmica classificada por MACS pode ser usada para análise ex vivo e pode ser plaqueada para realizar ensaios in vitro .

Isolamento da microglia hipotalâmica do cérebro de camundongo adulto recém-perfundido por classificação de células ativadas por magnetismo  

Aprenda o isolamento e registro de patch-clamp de células inteiras da microglia hipocampal de camundongos adultos. Este método permite analisar correntes de potássio e propriedades eletrofisiológicas em seu ambiente nativo.

Isolamento e registro de patch-clamp de células inteiras da microglia hipocampal de camundongos adultos

Explorar mais vídeos