Name: Induzindo a entrada de juvenis de dispersão de terceiro estágio de Bursaphelenchus xylophilus na criptobiose por meio da regulação osmótica (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-12-27T13:40:00.000+00:00
Duration: 5 min 15 s
Description: Aprenda a induzir criptobiose em juvenis de terceiro estágio de Bursaphelenchus xylophilus usando regulação osmótica com cloreto de potássio. Este método permite estudar mecanismos de resistência ao estresse em temperaturas extremas.

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1. Coleção de <img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq02.jpg" style="margin: auto;"> B. xylophilus
<ol>
	<li>Coleta de discos infectados de P. massoniana NOTA: Todos os procedimentos cumpriram as Medidas Administrativas para Área Epidêmica da Doença da Murcha do Pinheiro e Madeira Infectada e outros regulamentos aplicáveis. Uma floresta de P. massoniana infectada por B. xylophilus no condado de Xiangshan, cidade de Ningbo, província de Zhejiang, foi selecionada como local de amostragem. P. massoniana, que morreu de doença da murcha do pinheiro, foi derrubada dentro do local da amostra.<ol>
		<li>Colete toras redondas (5 cm de espessura) das seções superior, intermediária e inferior do tronco principal das árvores derrubadas.</li>
		<li>Corte as toras redondas coletadas de P. massoniana em fatias de 0,5-1 cm de espessura e, em seguida, corte-as em pequenas tiras de 2-3 cm de comprimento.</li>
		<li>Coloque as pequenas tiras de madeira em sacos lacrados e guarde-as em laboratório para uso posterior.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Extração de <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> B. xylophilus
	<ol>
		<li>Prenda um tubo de borracha na extremidade estreita de um funil de vidro de gargalo longo com um diâmetro aproximado de 15 cm. Prenda o tubo de borracha com uma torneira. Coloque o funil montado em um suporte de funil.</li>
		<li>Enrole as pequenas tiras de madeira completamente em uma única camada de papel de seda e coloque-as no funil. Adicione água destilada ao funil até que todas as tiras de madeira estejam submersas. NOTA: Depois de ficar em repouso por 12-24 h, os nematóides migraram para fora das tiras de madeira e se estabeleceram no fundo do funil10. O papel de seda impediu que os detritos de madeira se depositassem, permitindo a passagem dos nematóides.</li>
		<li>Solte lentamente a torneira no fundo do funil e deixe vazar 2000-5000 μL da mistura para uma placa de Petri (5 cm de diâmetro) para exame microscópico e identificação morfológica.</li>
		<li>Identifique <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> B. xylophilus observando características como estiletes, bulbos esofágicos medianos, gotículas lipídicas e formas de cauda "semelhantes a dedos"11.</li>
		<li>Sob um microscópio, transfira o indivíduo <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> B. xylophilus para uma lâmina aspirando 10 μL de líquido junto com um nematóide usando uma pipeta de 10 μL de cada vez. Repita este processo 30 vezes para coletar aproximadamente 300 μL da mistura contendo nematóides.</li>
		<li>Após a extração de <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> B. xylophilus, esterilize as tiras de madeira restantes e os materiais de madeira infectados para evitar mais contaminação.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
2. Controle do processo de regulação osmótica
<ol>
	<li>Preparação da mistura de regulação osmótica<ol>
		<li>Prepare uma solução aquosa de KCl a 8%.</li>
		<li>Usando uma pipeta, adicione 10 μL da solução aquosa de KCl a 8% à lâmina contendo a mistura de <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> B. xylophilus, produzindo aproximadamente 310 μL de uma mistura dos nematóides e da solução de KCl.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Regulação do aumento da pressão osmótica e desidratação de <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> B. xylophilus<ol>
		<li>Coloque a lâmina no microscópio stage, permitindo que a água evapore naturalmente. Isso aumentaria gradualmente a pressão osmótica do ambiente circundante, fazendo com que os nematóides se desidratassem em aproximadamente 30-60 min. NOTA: O operador só precisa esperar que a água evapore naturalmente até que os cristais de KCL precipitem e observar o estado dos nematóides ao microscópio. Demora cerca de 30-60 min para que 310 μL da mistura evaporem naturalmente até que os cristais de KCL precipitem.</li>
		<li>Observe o processo de desidratação (por exemplo, ondulação corporal, agregação, etc.) de <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> B. xylophilus ao microscópio. Quando a água evapora completamente e os cristais de KCl precipitam, <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> B. xylophilus para de se mover e entra em criptobiose.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Tratamento por estresse em baixa temperatura do criptobiótico <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> B. xylophilus
	<ol>
		<li>Colocar o criptobiótico <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> B. xylophilus num ambiente de temperatura constante de -20 °C durante 24 h.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Regulação da diminuição da pressão osmótica e reidratação de <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> B. xylophilus
	<ol>
		<li>Adicionar cerca de 300 μL de água destilada à volta dos juvenis submetidos a tratamento a baixa temperatura por pipeta. O processo de reidratação, com duração de cerca de 30-60 min, diminui gradualmente a pressão osmótica do ambiente circundante.</li>
		<li>Observe o processo de reidratação de <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> B. xylophilus (por exemplo, alongamento do corpo, retomada do movimento, etc.) ao microscópio. Calcule a taxa de sobrevivência após 24 h.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

<meta charset="utf8"></head><body>Criptobiose de juvenis de Bursaphelenchus xylophilus

<ol><li>Li, Y., Zhang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+on+the+trend+of+invasion+and+expansion+of+Bursaphelenchus+xylophilus%5BTitle%5D)+AND+%22Forest+Pest+and+Disease%22%5BJournal%5D)">Analysis on the trend of invasion and expansion of Bursaphelenchus xylophilus.</a> Forest Pest and Disease. 37 (5), 1-4 (2018).</li>
<li>Futai, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pine+wood+nematode%2C+Bursaphelenchus+xylophilus%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Phytopathol%22%5BJournal%5D)">Pine wood nematode, Bursaphelenchus xylophilus.</a> Annu Rev Phytopathol. 51 (51), ?61(2013).</li>
<li>Crowe, J. H., Cooper, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cryptobiosis%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Am%22%5BJournal%5D)">Cryptobiosis.</a> Sci Am. 225, 30-36 (1971).</li>
<li>Wharton, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anhydrobiosis%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Anhydrobiosis.</a> Curr Biol. 25, 1107-1125 (2015).</li>
<li>Browne, J., Tunnacliffe, A., Burnell, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anhydrobiosis%3A+plant+desiccation+gene+found+in+a+nematode%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Anhydrobiosis: plant desiccation gene found in a nematode.</a> Nature. 416 (6876), 38(2002).</li>
<li>Shatilovich, A. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Viable+nematodes+from+late+Pleistocene+permafrost+of+the+Kolyma+river+lowland%5BTitle%5D)+AND+%22Dokl+Biol+Sci%22%5BJournal%5D)">Viable nematodes from late Pleistocene permafrost of the Kolyma river lowland.</a> Dokl Biol Sci. 480 (1), 100-102 (2018).</li>
<li>Schottenfeld-Roames, J., Ghabrial, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osmotic+regulation+of+seamless+tube+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Osmotic regulation of seamless tube growth.</a> Nat Cell Biol. 15 (2), 137-139 (2013).</li>
<li>Erkut, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trehalose+renders+the+dauer+larva+of+Caenorhabditis+elegans+resistant+to+extreme+desiccation%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Trehalose renders the dauer larva of Caenorhabditis elegans resistant to extreme desiccation.</a> Curr Biol. 21 (1), 1331-1336 (2012).</li>
<li>Pan, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Third-stage+dispersal+juveniles+of+Bursaphelenchus+xylophilus+can+resist+low-temperature+stress+by+entering+cryptobiosis%5BTitle%5D)+AND+%22Biology%22%5BJournal%5D)">Third-stage dispersal juveniles of Bursaphelenchus xylophilus can resist low-temperature stress by entering cryptobiosis.</a> Biology. 10 (8), 785(2021).</li>
<li>Mao, X. F., Li, H. X., Chen, X. Y., Hu, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extraction+efficiency+of+soil+nematodes+by+different+methods%5BTitle%5D)+AND+%22Chinese+J+Ecol%22%5BJournal%5D)">Extraction efficiency of soil nematodes by different methods.</a> Chinese J Ecol. 23 (3), 149-151 (2004).</li>
<li>Pan, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+identification+of+pine+wood+nematode+in+Pinus+koraiensis+in+Fengcheng%2C+Liaoning+province%5BTitle%5D)+AND+%22Forest+Pest+and+Disease%22%5BJournal%5D)">Isolation and identification of pine wood nematode in Pinus koraiensis in Fengcheng, Liaoning province.</a> Forest Pest and Disease. 38 (1), 4(2019).</li>
<li>Pan, L., Cui, R., Li, Y., Feng, Y., Zhang, X. Investigation of pinewood nematodes in Pinus tabuliformis Carr. under low-temperature conditions in Fushun, China. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPan%2C+L+%22Forests%22">Forests</a>. 11 (9), 993(2020).</li>
<li>Madin, K. A. C., Crowe, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anhydrobiosis+in+nematodes%3A+Carbohydrate+and+lipid+metabolism+during+dehydration%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Zool%22%5BJournal%5D)">Anhydrobiosis in nematodes: Carbohydrate and lipid metabolism during dehydration.</a> J Exp Zool. 3, 193(2010).</li>
<li>Wharton, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anhydrobiosis%3A+The+model+worm+as+a+model%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Anhydrobiosis: The model worm as a model.</a> Curr Biol. 21 (15), 578-579 (2011).</li>
<li>Li, Y., Zhang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+risk+of+invasion+and+expansion+of+pine+wood+nematode+in+the+middle+temperate+zone+of+China%5BTitle%5D)+AND+%22J+Temperate+Res%22%5BJournal%5D)">High risk of invasion and expansion of pine wood nematode in the middle temperate zone of China.</a> J Temperate Res. 1 (1), 4(2018).</li>
</ol>

Neste estudo, <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> B. xylophilus foi coletado de P. massoniana morta em Ningbo, província de Zhejiang. Deve-se notar que <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> B. xylophilus foi selecionado de uma população mista com diferentes instares. Especificamente, foram escolhidas toras redondas com alta densidade de B. xylophilus, seguidas pela triagem de <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> B. xylophilus. Durante o inverno, quando a temperatura mínima diária na província de Liaoning é de cerca de -20 °C, um grande número de B. xylophilus de um único ínstar <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> pode ser obtido de Pinus tabuliformis morto, o que simplificou o processo de seleção neste experimento12.
Durante o processo criptobiótico, a lenta taxa de desidratação dos nematóides beneficia sua sobrevivência e evita danos estruturais às suas proteínas13. O tempo de desidratação é crítico na determinação da taxa de sobrevivência de <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> B. xylophilus. Neste estudo, foi utilizada uma solução de KCl na concentração inicial de 8%, e sua concentração foi aumentada gradualmente com a evaporação natural da água, permitindo que <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> B. xylophilus se desidratasse lentamente e entrasse em criptobiose. Se a água evaporar muito rapidamente ou os nematóides forem colocados diretamente em uma solução de KCl de alta concentração, sua taxa de sobrevivência diminui significativamente.
O método descrito neste estudo apresenta várias vantagens. Os materiais experimentais são de fácil acesso, necessitando apenas de solução de KCl e água destilada para regular a desidratação e reidratação de <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> B. xylophilus. Os procedimentos são simples: a desidratação ocorreu por evaporação natural e a reidratação foi obtida pela adição de água destilada. Todo o processo pode ser concluído em 2 h. Este método apresenta altas taxas de sucesso e sobrevivência, com a maior parte de <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> B. xylophilus entrando em criptobiose após desidratação e a maioria revivendo após reidratação, respectivamente11.
O método proposto é aplicável para regular o estado criptobiótico de B. xylophilus e dos juvenis de <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> dispersão do quarto estágio (<img alt="Equation 3" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq03.jpg" style="margin: auto;">)14. No entanto, pode não ser eficaz para a propagação de B. xylophilus.
Nos últimos anos, a doença da murcha do pinheiro causada por B. xylophilus se expandiu do sul da China para as áreas do norte. <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> B. xylophilus, que habita os pinheiros nessas regiões mais frias do norte, tende a exibir maior resistência ao frio15. O método proposto pode induzir criptobiose em <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> B. xylophilus, aumentando sua resistência ao frio e à seca. Coletivamente, este método pode fornecer suporte técnico para o estudo dos mecanismos de resistência ao estresse de B. xylophilus e do mecanismo de transmissão da doença da murcha do pinheiro.

A doença da murcha do pinheiro é uma das doenças florestais mais graves da China1. O nematóide da madeira do pinheiro Bursaphelenchus xylophilus (B. xylophilus) representa uma ameaça significativa para espécies de pinheiros como Pinus massoniana (P. massoniana) ao se reproduzir dentro do hospedeiro, levando a um rápido murchamento e morte. Em condições ambientais desfavoráveis após a morte do hospedeiro, os juvenis reprodutivos de B. xylophilus podem entrar em juvenis pré-dauer (<img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;">). Esses juvenis procuram insetos vetores para continuar sua transferência e disseminação, causando extensas mortes de florestas de pinheiros2.
A criptobiose é um estado em que os organismos perdem quase toda a sua água interna e entram em anidrobiose sob estresse ambiental extremo3. Nesse processo, os organismos desidratam gradualmente, resultando em movimento interrompido, metabolismo reduzido e um ciclo de vida suspenso4. Em condições adequadas, eles podem se recuperar após a reidratação. A criptobiose permite que os organismos resistam a ambientes extremos, como baixas temperaturas, e prolonguem sua vida útil5. Nematóides que sobreviveram na criptobiose por 30.000 anos foram encontrados no permafrost antártico6.
Estudos anteriores mostraram que os nematóides podem se adaptar a vários estressores abióticos - como baixa temperatura, seca e alta pressão osmótica - durante a desidratação, ajustando sua permeabilidade superficial7. Além disso, os nematóides podem enrolar seus corpos para diminuir a área de superfície e minimizar a taxa de perda de água. Por exemplo, Caenorhabditis elegans regula o equilíbrio osmótico, permitindo que íons e pequenas moléculas passem livremente por sua cutícula, enquanto moléculas maiores não podem8. <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> B. xylophilus também exibe criptobiose. Durante os estágios de desidratação e reidratação da criptobiose, a regulação osmótica é essencial para controlar a troca de substâncias pela cutícula, tornando-a fundamental para entrar ou se recuperar da criptobiose9.
O presente estudo apresenta um método para induzir criptobiose em <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> B. xylophilus por meio de regulação osmótica. Este método é simples, eficiente e altamente confiável, fornecendo suporte técnico para a pesquisa dos mecanismos de resistência ao estresse de <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> B. xylophilus.

<table><tbody><tr><td>Corrediça de vidro</td><td>Biolândia</td><td>GS7101-7525</td><td>75 mm e tempos; 25 mm e vezes; 1 milímetro</td></tr><tr><td>Funil de vidro de pescoço comprido</td><td>Tecnologia Experimental Nanjing Kangluoda</td><td>N/A</td><td>150 milímetros</td></tr><tr><td>Microscópio</td><td>Phenix</td><td>XSP-35-1600X</td><td>PH100-2B41L-IPL</td></tr><tr><td>Placa de Petri</td><td>Tecnologia Experimental Nanjing Kangluoda</td><td>&nbsp; TB-624935792745</td><td>50 mm e vezes; 50 milímetros</td></tr><tr><td>Pinchcock</td><td>Tecnologia Experimental Nanjing Kangluoda</td><td>&nbsp; TB-624973311743</td><td>36 mm e tempos; 11 mm&nbsp; &vezes; 55 milímetros</td></tr><tr><td>Pipeta</td><td>Eppendorf</td><td>3123000012</td><td>10&ndash; 100 &micro; L</td></tr><tr><td>Cloreto de potássio (KCL)</td><td>Solarbio Ciências da Vida</td><td>Pág. 9921</td><td>500 gramas</td></tr><tr><td>Tubo de borracha</td><td>Tecnologia Experimental Nanjing Kangluoda</td><td>TB-624923457094</td><td>7 mm e vezes; 5 milímetros</td></tr><tr><td>Esterilizador</td><td>BinJiang&nbsp;</td><td>https://detail.1688.com/offer/644766597053.html?_t=1730892390541&spm= a2615.7691456.co_0_0_wangpu _score_0_0_0_0_1_0_0000_0.0</td><td>75L</td></tr><tr><td>Papel de seda&nbsp;</td><td>Impressão de coração para coração</td><td>M3</td><td>22,5 cm &vezes; 21,5 cm</td></tr></tbody></table>

induzindo a entrada de juvenis de dispersão de terceiro estágio de bursaphelenchus xylophilus na criptobiose por meio da regulação osmótica

Inducing the Entry of Third Stage Dispersal Juveniles of Bursaphelenchus xylophilus into Cryptobiosis Through Osmotic Regulation

A criptobiose é um estado em que os organismos perdem quase toda a sua água interna e entram na anidrobiose sob estresse ambiental extremo. Os juvenis de terceiro estágio de dispersão (juvenis pré-dauer, <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;">) de Bursaphelenchus xylophilus podem entrar em criptobiose por desidratação e reviver após a reidratação quando as condições ambientais melhoram. A regulação osmótica é crucial para sua sobrevivência nesse processo. Neste estudo, espécimes de B. xylophilus foram coletados de Pinus massoniana morta devido à doença da murcha do pinheiro em Ningbo, província de <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> Zhejiang, China. Após a imersão em solução <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> de cloreto de potássio (KCl) a 8%, B. xylophilus entrou em um estado criptobiótico após desidratação gradual devido ao aumento da pressão osmótica externa pela evaporação natural da água. <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> B. xylophilus poderia resistir ao estresse de baixa temperatura a -20 ° C. <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> B. xylophilus poderia reviver após a reidratação, com uma taxa de sobrevivência de 92,1%. Este processo pode regular a entrada de <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> B. xylophilus na criptobiose, permitindo-lhes resistir a ambientes extremos. Este método descrito em nosso estudo é simples e confiável, fornecendo suporte técnico para o estudo dos mecanismos de resistência ao estresse de B. xylophilus.

Na solução de KCl a 8%, à medida que a água evaporava, B. xylophilus inicialmente exibiu uma "ondulação" perceptível, <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> mantendo-se móvel (Figura 1A). Uma vez que a água evaporou completamente, os nematóides pararam de se mover e se enrolaram, com superfícies deprimidas e gotículas lipídicas acumuladas (Figura 1B), indicando sua entrada no estado criptobiótico. Após a adição de água destilada ao ambiente circundante, os nematóides se reidrataram e reviveram (Figura 1C). Depois que a água evaporar, os cristais KCL aparecerão (Figura 1D). A Figura 1E mostra as características morfológicas de <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> B. xylophilus.
Um experimento de desidratação demonstrou que, em uma solução inicial de KCl a 8%, a evaporação da água fez com <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> que B. xylophilus perdesse água. Após a desidratação, <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> B. xylophilus foi submetido a estresse de baixa temperatura a -20 °C por 24 h; a taxa média de sobrevivência foi de 92,1%11. Em comparação com uma taxa de sobrevivência de 0% no grupo controle que não havia entrado em um estado criptobiótico, os dados acima sugeriram que a desidratação poderia aumentar significativamente a taxa de sobrevivência de <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> B. xylophilus em condições de baixa temperatura.
Durante a fase de reidratação após a criptobiose de <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> B. xylophilus, observamos que 100% dos nematóides exibiram "bolhas" in vivo ao serem transferidos da solução de KCl a 40% para água destilada (Figura 2).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67350/67350fig01.jpg"> 
Figura 1: O processo de desidratação-criptobiose-reidratação de <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> B. xylophilus. Esta imagem ilustra o processo de criptobiose em <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> B. xylophilus, incluindo o estágio de (A) desidratação, (B) estágio de criptobiose, (C) estágio de reidratação, (D) estágio de cristalização KCL e (E) <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> B. xylophilus. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67350/67350fig01large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67350/67350fig02.jpg"> 
Figura 2: Acúmulo de grânulos de gordura em B. xylophilus não revivido<img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;">. Esta imagem mostra o estado de <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> B. xylophilus após a reidratação, caracterizado pela presença de grânulos de gordura em forma de bolha in vivo. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67350/67350fig02large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>

Induzindo a entrada de juvenis de dispersão de terceiro estágio de Bursaphelenchus xylophilus na criptobiose por meio da regulação osmótica

Cryptobiosis is a state where organisms lose nearly all their internal water and enter anhydrobiosis under extreme environmental stress. The dispersal ...

inducing-entry-third-stage-dispersal-juveniles-bursaphelenchus

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Biology

Biologia

Este vídeo explica os mecanismos de resistência da planta hospedeira à herbivoria e demonstra um teste sem chance de escolha que as estimativas da contribuição relativa de antibiose e tolerância a cigarrinha resistência...

Mecanismos Herbívoro caracterizando Resistance: Spittlebugs em Brachiaria Spp. como Exemplo

Vampiric Isolamento de fluido extracelular a partir de<em&gt; Caenorhabditis elegans</em

Neste vídeo, mostramos um método de produção de uma população sincronizada com o desenvolvimento de C. elegans adultos estéreis. O protocolo de exemplo sincroniza vermes para estudar as taxas de consumo de oxigênio em animais vivos.

Sincronização de nematóides: um método para obter populações de vermes em estágios idênticos de desenvolvimento

Um protocolo para investigar o comportamento de acasalamento do nematoide da madeira do pinheiro, Bursaphelenchus xylophilus, é apresentado. As características comportamentais de B. xylophilus são descritas no processo de acasalamento.

Observação e quantificação do comportamento de acasalamento no nemátodo do pinheiro, Bursaphelenchus xylophilus

Os mosquitos Aedes aegypti infectados com Wolbachia estão sendo liberados em populações naturais para suprimir a transmissão de arbovírus. Descrevemos métodos para traseira Ae. aegypti com Wolbachia infecções no laboratório para experiências e lançamento de campo, tomando as precauções para minimizar a seleção e adaptação de laboratório.

Manter o Aedes aegypti , mosquitos infectados com Wolbachia

Exposição a tóxicos ambientais aguda pode afetar o desenvolvimento, com efeitos a longo prazo. Protocolos detalhados são fornecidos para ilustrar uma estratégia usando um modelo eficaz de laboratório para estudar o efeito da exposição embrionária precoce ao Bisfenol A. Nós fornecemos a fecundidade e ensaios comportamentais para monitorar a eficácia da nossas bio-ensaios de exposição tóxica.

A longo prazo consequências comportamentais e reprodutivas de embrionária exposição a baixas doses tóxicas para

Aqui, apresentamos um protocolo para investigar a preferência de pupa de larvas maduras de Ectropis grisescens em resposta a fatores de solo (por exemplo, conteúdo de tipo e umidade do substrato) utilizando bioensaios de escolha. Apresentamos também um protocolo de não-escolha de bioensaios para determinar os fatores que afetam os comportamentos de pupa e sobrevivência de E. grisescens.

Escolha e bioensaios não-escolha para estudar a preferência de pupa e sucesso de surgimento de Ectropis grisescens

Aqui, descrevemos um protocolo detalhado para isolar o extrato nuclear ativo do estágio 4 C. elegans larval e visualizar a atividade de transcrição em um sistema in vitro .

Isolamento da Caenorhabditis Ativa elegans Extrato Nuclear e Reconstituição para Transcrição In Vitro

Os nematoides entomopatômicos vivem em simbiose com bactérias e, juntos, infectam com sucesso insetos, minando seu sistema imunológico inato. Para promover pesquisas com base genética na infecção por nematoides, são descritos métodos de manutenção e manipulação genética de nematoides entomopatômicos.

Culturing e Geneticamente Manipulação Nematodes Entomopatômicos

Este artigo descreve a manutenção laboratorial (incluindo acasalamento e alimentação) da mosca díptera inferior Bradysia (Sciara) coprophila.

Manutenção laboratorial da Bradisia (Sciara) coprophila da mosca dos dípteros inferiores: um novo / antigo organismo modelo emergente

Apresentamos dois métodos para que agricultores propaguem em massa nematoides entomopatogênicos como bioinseticidas. O primeiro método utiliza gel de poliacrilamida como substrato de cultivo do nematoide, enquanto o segundo utiliza algodão revestido com polímero como substrato de cultivo. Ambos os métodos dependem da propagação in vivo de nematoides dentro de cadáveres de insetos.

Propagação In Vivo de Nematoides Entomopatogênicos Baseada em Cultivadores

Aprenda a induzir criptobiose em juvenis de terceiro estágio de Bursaphelenchus xylophilus usando regulação osmótica com cloreto de potássio. Este método permite estudar mecanismos de resistência ao estresse em temperaturas extremas.

Induzindo a entrada de juvenis de dispersão de terceiro estágio de Bursaphelenchus xylophilus na criptobiose por meio da regulação osmótica (Vídeo) | JoVE Journal

Induzindo a entrada de juvenis de dispersão de terceiro estágio de Bursaphelenchus xylophilus na criptobiose por meio da regulação osmótica

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