Name: Um modelo de camundongo de transformação hemorrágica induzida por hiperglicemia aguda combinada com isquemia focal transitória (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-11-15T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 35 s
Description: Aprenda a estababelecer um modelo de transformação hemorrágica em camundongos C57BL/6 usando oclusão/reperfusão da artéria cerebral média com hiperglicemia aguda. Este protocolo reprodutível oferece baixa mortalidade para pesquisa pré-clínica.

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<meta charset="utf8"></head><body>Transformação hemorrágica aprimorada por hiperglicemia no AVC induzido por tMCAO

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</ol>

<a href="https://app.jove.com/t/6615">This corrects</a> the article <a href="https://dx.doi.org/10.3791/67371">10.3791/67371</a>

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/67371">A Mouse Model of Hemorrhagic Transformation Induced by Acute Hyperglycemia Combined with Transient Focal Ischemia</a>. The Protocol section was updated.

Erratum: A Mouse Model of Hemorrhagic Transformation Induced by Acute Hyperglycemia Combined with Transient Focal Ischemia

<table><tbody><tr><td>Cloreto de 2,3,5-trifeniltetrazólio (TTC)</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>108380</td><td>O corante para coloração TTC</td></tr><tr><td>Placa de cultura de 24 poços</td><td>Corning Incorporated</td><td>CLS3527</td><td>O vaso para coloração TTC 30</td></tr><tr><td>% de injeção de glicose</td><td>Kelun Pharmaceutical</td><td>H42021188</td><td>Indução de hiperglicemia aguda</td></tr> 4<tr><td>% de paraformaldeído</td><td>Wuhan Servicebio Technology Co., Ltd. </td><td>G1101</td><td>Sutura</td></tr><tr><td>absorvível de ácido poliglicólico</td><td>Jinhuan Medical Co., Ltd</td><td>KCR531</td> Fixação de tecido <td>5.0 Equipamento para cirurgia</td></tr><tr><td>Placa de cultura de 96 poços</td><td>Corning Incorporated</td><td>CLS3596</td><td>EB que mede o conteúdo</td></tr> Máquina de <tr><td>anestesia</td><td>Midmark Corporation</td><td>VMR</td><td>Anestesia para animais</td></tr><tr><td>Meio de montagem antidesbotamento com DAPI</td><td>Beyotime Biotech</td><td>P0131</td><td>Suporte para seções de tecido</td></tr><tr><td>Automação-desidratação de tecidos&nbsp; Máquina </td><td>Leica Biosystems</td><td>TP1020</td><td>Desidratar tecido</td></tr><tr><td>Microscopia confocal</td><td>Leica Biosystems</td><td>STELLARIS 5</td><td>Aquisição de imagem</td></tr><tr><td>Gel de sódio diclofenaco</td><td>MaYinglong Farmacêutica</td><td>H10950214</td><td>Analgesia para solução de</td></tr><tr><td>coloração de eosina</td> animal <td>Servicebio Technology</td><td>G1001</td><td>O corante para H& Coloração E</td></tr><tr><td>Evans Blue</td><td>Aladdin</td><td>E104208</td><td>coloração EB Gel</td></tr><tr><td>ocular</td><td>Guangzhou Pharmaceutical</td><td>H44023098</td><td>Material para cirurgia</td></tr><tr><td>Fitc-dextran</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>60842-46-8</td><td>Avaliação da permeabilidade BBB</td></tr><tr><td>Microscópio de fluorescência</td><td>Olympus</td><td>BX51</td><td>Aquisição de imagem</td></tr><tr><td>Micrótomo congelado</td><td>Leica Biosystems</td><td>CM1900</td><td>Uso para seções congeladas</td></tr><tr><td>Glicosímetro</td><td>YuWell</td><td>580</td><td>Medição de glicose no sangue</td></tr><tr><td>Solução de coloração de hematoxilina</td><td>Servicebio</td><td>G1004</td><td>O corante para H & Coloração</td></tr><tr><td>E Iodo</td><td>Lircon</td><td>20020059</td><td>Material para cirurgia</td></tr><tr><td>Isoflurano</td><td>Rwd Life Science</td><td>R510-22-10</td><td>Anestesia para animais</td></tr><tr><td>Medidor de fluxo sanguíneo Doppler a laser</td><td>Moor Instruments</td><td>moorVMS</td><td>Monitoramento do fluxo sanguíneo</td></tr><tr><td>MCAO Suturas</td><td>Rwd Life Science</td><td>907-00023-01</td><td>Material para cirurgia</td></tr><tr><td>Meloxicam</td><td>Boehringer-Ingelheim</td><td>J20160020</td><td>Analgesia para animais</td></tr><tr><td>Kit de instrumentos microcirúrgicos</td><td>Rwd Life Science</td><td>SP0003-M</td><td>Equipamento para cirurgia</td></tr><tr><td>Micrótomo</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>HM325</td><td>Produção de seção de tecido Lâmina</td></tr> de <tr><td>micrótomo</td><td>Leica Biosystems</td><td>819</td><td>Produção de seção de tecido</td></tr><tr><td>Pomada de mupirocina</td><td>GlaxoSmithKline</td><td>H10930064</td><td>Anti-infecção para animais</td></tr><tr><td>Bálsamo neutro</td><td>Absin Bioscience</td><td>abs9177</td><td>Seal para H & E coloração</td></tr><tr><td>Centro de incorporação de parafina</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>EC 350</td><td>Produzir blocos de parafina</td></tr><tr><td>Pentobarbital sódico</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P3761</td><td>Eutanásia para animal</td></tr><tr><td>Solução salina tamponada com fosfato</td><td>Beyotime Biotech</td><td>C0221A</td><td>Enxágue para seção de tecido</td></tr><tr><td>Scanner</td><td>EPSON</td><td>V330</td><td>Barbeador</td></tr> <tr><td></td><td>de varredura de tecidoShenzhen Codos Electrical Appliances Co., Ltd.</td><td>CP-9200</td><td>Equipamento para cirurgia</td></tr><tr><td>Espectrofotômetro</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>1510-02362</td><td>EB medição de conteúdo</td></tr> Solução de <tr><td>sacarose</td><td>Shanghai Macklin Biochemical</td><td>57-50-1</td><td>Desidratação para tecido</td></tr><tr><td>Tissue-Tek O.C.T. Composto</td><td>Sakura</td><td>4583</td><td>Meio de inclusão de tecido</td></tr><tr><td>Ácido tricloroacético</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T6399</td><td>EB Medição de conteúdo</td></tr></tbody></table>

um modelo de camundongo de transformação hemorrágica induzida por hiperglicemia aguda combinada com isquemia focal transitória

A Mouse Model of Hemorrhagic Transformation Induced by Acute Hyperglycemia Combined with Transient Focal Ischemia

O procedimento experimental deste estudo está ilustrado na Figura 1. Resumidamente, os camundongos foram submetidos a MCAO induzida por oclusão de thread por 60 min, seguido de reperfusão. A glicose (30% em solução salina normal, 7,2 mL/kg de peso corporal) foi administrada por via intraperitoneal 15 min antes do MCAO. Os níveis de glicose no sangue foram medidos no início (antes da injeção de glicose), imediatamente após a OCM e no momento da reperfusão. Após 24 h de reperfusão, os camundongos foram eutanasiados e os tecidos cerebrais foram coletados para análise do volume do infarto, vazamento da barreira hematoencefálica e histopatologia. Conforme ilustrado na Figura 2, todos os quatro grupos exibiram níveis basais de glicose no sangue semelhantes. No entanto, os camundongos que receberam injeções de glicose apresentaram níveis de glicose no sangue significativamente elevados em comparação com os dos grupos salinos. 
Conforme ilustrado na Figura 3A, nenhum infarto visível foi observado em fatias de cérebro no grupo Sham + solução salina ou Sham + glicose, enquanto o infarto cerebral acentuado foi claramente revelado pela coloração TTC em fatias de cérebro de ambos os grupos MCAO. Além disso, os camundongos injetados com glicose exibiram um maior volume de infarto em comparação com aqueles injetados com solução salina normal nos diferentes grupos MCAO. De acordo com a análise estatística, o volume do infarto foi de 20,8% ± 0,8% e 45,1% ± 1,6% no grupo OCM + solução salina e no grupo OCM + glicose, respectivamente (Figura 3B).
As observações macroscópicas não revelaram hemorragias no hemisfério cerebral esquerdo do grupo MCAO + solução salina ou do grupo Sham + solução salina / glicose. Em contraste, múltiplas hemorragias puntiformes foram observadas no hemisfério cerebral isquêmico do grupo MCAO + glicose (Figura 4A). Imagens de varredura de cortes cerebrais coronais consecutivos mostraram que as hemorragias no grupo MCAO + glicose estavam distribuídas nas regiões de infarto do córtex e estriado (Figura 4A). Além disso, a análise histológica usando coloração H &amp; E demonstrou infiltração significativa de células sanguíneas nas regiões de infarto do córtex e estriado no grupo MCAO + glicose (Figura 4B). Por outro lado, nenhuma infiltração de células sanguíneas foi observada no grupo MCAO + solução salina ou no grupo Sham + solução salina / glicose.
Conforme ilustrado na Figura 5A, nenhum vazamento de EB foi observado nas fatias cerebrais do grupo Sham + glicose. No entanto, ambos os grupos MCAO mostraram coloração azul distinta devido ao vazamento de EB. Além disso, em comparação com camundongos injetados com solução salina, aqueles injetados com glicose exibiram aumento da permeabilidade EB 24 h pós-MCAO. Em comparação com o grupo Sham + salina, o grupo MCAO + solução salina demonstrou um aumento significativo no conteúdo de EB (4,2 μg/g ± 1,8 μg/g vs. 28 μg/g ± 0,7 μg/g, p &lt; 0,01), que foi ainda mais elevado no grupo MCAO + glicose (28 μg/g ± 0,7 μg/g vs. 65,5 μg/g ± 6,0 μg/g, p &lt; 0,01) (Figura 5B). Conforme ilustrado na Figura 5C, o extravasamento de FITC-Dextran foi mais intenso no córtex cerebral isquêmico e estriado do grupo MCAO + glicose em comparação com o grupo MCAO + solução salina.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67371/67371fig01.jpg"> 
Figura 1: Diagrama esquemático do procedimento experimental. Os camundongos foram injetados intraperitonealmente com glicose a 30% ou solução salina antes da cirurgia de MCAO, com glicose no sangue monitorada durante o procedimento. 24 h após a reperfusão, os camundongos foram eutanasiados para análise patológica e histológica. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67371/67371fig01large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67371/67371fig02.jpg"> 
Figura 2: Alterações nos níveis de glicose no sangue em vários momentos após a injeção de glicose a 30%. Os dados são apresentados como média ± DP. N = 10-20. p &lt; 0,001 em comparação com o grupo Sham + solução salina. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67371/67371fig02large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67371/67371fig03.jpg"> 
Figura 3: A hiperglicemia piorou o dano cerebral isquêmico 24 h após a reperfusão. (A) Imagens representativas de cortes coronais corados com TTC, com tecido cerebral normal aparecendo vermelho-rosado e áreas de infarto isquêmico aparecendo branco-acinzentado. Barra de escala = 5 mm. (B) Análise estatística do volume do infarto. Os dados são apresentados como média ± DP. N = 3. p &lt; 0,001 em comparação com o grupo Sham + solução salina, ##p &lt; 0,01 em comparação com o grupo MCAO + solução salina. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67371/67371fig03large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67371/67371fig04.jpg"> 
Figura 4: A hiperglicemia aumentou o risco de TH 24 h após a reperfusão. (A) Imagens representativas de observação macroscópica e cortes coronais. O asterisco indicava os focos hemorrágicos visíveis. Barra de escala = 5 mm. (B) Imagens representativas de meio cérebro coradas com H &amp; E (superior) e imagens ampliadas (inferior). Barra de escala = 200 μm para imagens de meio cérebro; Barra de escala = 20 μm para imagens ampliadas. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67371/67371fig04large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67371/67371fig05.jpg"> 
Figura 5: Hiperglicemia agravou a ruptura da BHE 24 h após a reperfusão. (A) Imagens representativas do vazamento de azul de Evans. Barra de escala = 5 mm. (B) Análise estatística do vazamento de azul de Evans nos hemisférios isquêmicos. Os dados são apresentados como ± média DP, N = 3, **p &lt; 0,01, *** p &lt; 0,001 em comparação com o grupo Sham+salina, ##p &lt; 0,01 em comparação com o grupo MCAO + solução salina. (C) Imagens representativas do córtex cerebral isquêmico corado com FITC-Dextran e estriado. Barra de escala = 10 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67371/67371fig05large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>

Um modelo de camundongo de transformação hemorrágica induzida por hiperglicemia aguda combinada com isquemia focal transitória

Hemorrhagic transformation (HT) is a serious complication that can occur as a result of thrombolytic therapy following ischemic stroke (IS), and it poses ...

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Medicine

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Este vídeo demonstra o procedimento de replicação de um acidente vascular cerebral trombótico em um modelo de camundongo, bloqueando a artéria carótida comum direita e expondo o camundongo a um ambiente com baixo teor de oxigênio. Esse processo reduz o fluxo de sangue e oxigênio para o cérebro, causando a formação de coágulos sanguíneos e danos cerebrais.

Induzindo AVC trombótico por hipóxia e isquemia em um modelo de camundongo

Um modelo de rato padronizado de hemorragia subaracnóide por Círculo intraluminal de Willis perfuração é descrito. Perfuração de vasos e hemorragia subaracnóide são monitorados pela monitorização da pressão intracraniana. Além disso os vários parâmetros vitais são registadas e controlada para manter as condições fisiológicas.

Um modelo murino de hemorragia subaracnóide

Vários modelos murinos de oclusão da artéria cerebral média (MCAO) são amplamente utilizados em pesquisas sobre o cérebro experimental. Aqui, demonstramos o modelo de transcraniana permanente distal MCAO que produz enfarte cortical consistente de um tamanho correspondente ao dano imposto pela maioria dos acidentes vasculares cerebrais isquémicos humanos.

Curso de modelagem em Ratos: Coagulação permanente da artéria distal Cerebral Média

Os modelos de AVC tromboembólico são ferramentas vitais para otimizar a terapia de recanalização. Aqui relatamos um modelo de AVC trombótico murino baseado em insulto hipóxico-isquêmico cerebral transitório (tHI), que desencadeia trombose e infarto e responde favoravelmente à fibrinólise mediada pelo ativador de plasminogênio tecidual (tPA) em uma janela terapêutica semelhante à de pacientes com AVC.

Um Modelo de acidente vascular cerebral trombótico Baseado em Transient isquemia-hipoxia cerebral

Descrevemos um modelo de camundongo de AVC induzido pela oclusão da artéria cerebral média usando uma sutura revestida de silicone. O protocolo pode ser aplicado para induzir oclusão permanente ou isquemia temporária, seguida de reperfusão.

Indução de Acidente Vascular Cerebral Isquêmico e isquemia-reperfusão em ratos usando a técnica de oclusão da artéria Oriente e Visualização de infarto Área

Entre a transplantação de órgãos sólidos abdominal, enxertos pancreáticos são propensos a desenvolver danos de enxerto associada a lesão de reperfusão isquemia severa, levando eventualmente a perda precoce do enxerto. Este protocolo descreve um modelo de transplante de pâncreas murino utilizando uma técnica não-sutura do manguito, ideal para analisar estes danos deletérios, cedo.

Modelo do rato para transplante de pâncreas, usando uma técnica modificada do manguito

A hemorragia descontrolada, uma importante causa de mortalidade entre os pacientes com trauma, pode ser modelada utilizando uma laceração hepática padrão em um modelo murino. Este modelo resulta em perda de sangue consistente, sobrevivência e permite o teste de agentes hemostáticos. Este artigo fornece o processo passo a passo para executar este modelo valioso.

Choque hemorrágico não controlado modelado via laceração hepática em ratos com monitorização hemodinâmica em tempo real

Para investigar a fisiopatologia do AVC, é criado um modelo do rato de isquémia-reperfusão cerebral. Nós distalmente ligate da artéria cerebral média direita e artéria carótida comum direita e restaurar o fluxo sanguíneo após 10 ou 40 min de isquemia.

Modelo de Mouse de dois vasos oclusão de isquémia-reperfusão Cerebral

Aqui, descrevemos um modelo de camundongo de isquemia de retina por oclusão da artéria carótida comum bilateral transitória usando suturas simples e um grampo. Este modelo pode ser útil para entender os mecanismos patológicos da isquemia da retina causada por anormalidades cardiovasculares.

Um modelo murino de lesão isquêmica da retina induzida pela oclusão da artéria da carótida comum bilateral transitória

Aqui, apresentamos um protocolo para estabelecer um modelo de oclusão da artéria cerebral média distal (dMCAO) por meio de eletrocoagulação transcraniana em camundongos C57BL/6J e avaliar o comportamento neurológico subsequente e as características histopatológicas.

Indução de AVC Isquêmico Agudo em Camundongos Usando a Técnica de Oclusão Distal da Artéria Média

Aprenda a estababelecer um modelo de transformação hemorrágica em camundongos C57BL/6 usando oclusão/reperfusão da artéria cerebral média com hiperglicemia aguda. Este protocolo reprodutível oferece baixa mortalidade para pesquisa pré-clínica.

Um modelo de camundongo de transformação hemorrágica induzida por hiperglicemia aguda combinada com isquemia focal transitória

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