Name: Modelo de cicatrização de feridas de queimadura semelhante a um tabuleiro de xadrez de camundongos baseado em dispositivo de aquecimento digital (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-12-27T14:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 4 s
Description: Aprenda a criar um modelo de queimadura de espessura total em camundongos usando um dispositivo de aquecimento digital. Este protocolo padronizado permite análises confiáveis da cicatrização e avaliação de tratamentos como o hidrogel TKH.

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<meta charset="utf8"></head><body>Modelo consistente de lesão por queimadura em camundongos para avaliação de curativos terapêuticos

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</ol>

<table><tbody><tr><td>Ponta de pipeta de 1 mL</td><td>KIRGEN,USA</td><td>KG1333</td><td>Usado para localizar locais de queimaduras</td></tr><tr><td>3 M Filme Tegaderm</td><td>3M,USA</td><td>1624WCN 6 cm x 7 cm</td><td>Para a cobertura da ferida após indução de queimadura</td></tr><tr><td>4% paraformaldeído (PFA)</td><td>Biosharp,China</td><td>BL539A</td><td>Usado para fixar as amostras de pele</td></tr><tr><td>Buprenorfina</td><td>Sigma-Aldrich,EUA</td><td>PHR8955-50MG</td><td>Para o controle da dor dos camundongos</td></tr><tr><td>C57BL/6 camundongos</td><td>Chengdu Dashuo empresa animal experimental, China</td><td>nenhum</td><td>Para o estabelecimento do modelo de queimadura</td></tr><tr><td>Creme depilatório</td><td>Veet, China</td><td>&mdash;</td><td>Para a depilação do dorso dos camundongos</td></tr><tr><td>Dispositivo de aquecimento digital</td><td>Shenzhen Kapper Technology Company, China</td><td>No.936D</td><td>Para a indução de queimaduras dos ratos</td></tr><tr><td>Barbeador elétrico</td><td>AUX, China</td><td>AUX-A5</td><td>Para a depilação do dorso dos ratos</td></tr><tr><td>Papel de filtro</td><td>&mdash;</td><td>&mdash;</td><td>Usado para desdobrar as amostras de pele</td></tr><tr><td>Software GraphPad</td><td>&mdash;</td><td>GraphPad prism 9.5.0</td><td>Para a análise da área da ferida queimada</td></tr><tr><td>Luvas resistentes ao calor</td><td>&mdash;</td><td>&mdash;</td><td>Usado para segurar a ponta do dispositivo de aquecimento digital</td></tr><tr><td>Kit de coloração de hematoxilina e eosina</td><td>Solarbio, China</td><td>G1120</td><td>Para a análise histológica das lâminas</td></tr><tr><td>Software ImageJ</td><td>&mdash;</td><td>ImageJ 1.54f</td><td>Para a análise da área da ferida queimada</td></tr><tr><td>Isoflurano</td><td>RWD,China</td><td>R510-22-10</td><td>Para a anestesia dos</td></tr><tr><td>camundongos Kit de Coloração Tricrômica de Masson</td><td>Solarbio,China</td><td>G1340</td><td>Para a análise histológica das lâminas</td></tr><tr><td>Microscópio</td><td>Olympus,Japão&nbsp;</td><td>VS200 ASW</td><td>Usado para escanear o H& E e Masson corado slides:</td></tr><tr><td>de tecido</td><td>CITOTEST LABWARE MANUFACTURING Co., LTD, China</td><td>31050102W</td><td>Para desidratação de parafina de tecido e incorporação de parafina</td></tr></tbody></table>

modelo de cicatrização de feridas de queimadura semelhante a um tabuleiro de xadrez de camundongos baseado em dispositivo de aquecimento digital

Chessboard-like Burn Wound Healing Model of Mice Based on Digital Heating Device

Neste protocolo, queimaduras semelhantes a tabuleiros de xadrez foram criadas com uma duração de queimadura de 10 s a 97 °C pelo dispositivo de aquecimento digital (Figura 1). A ponta do dispositivo é feita de cobre puro, conhecido por sua excelente condução de calor e capacidade de aquecimento rápido. A empunhadura segurada pelo experimentador é feita de material de policarbonato, que fornece resistência ao calor e não inflamabilidade. Em comparação com os métodos de placa/barra de metal único pré-aquecido ou fervura ou água quente, este dispositivo demonstra desempenho de segurança superior e reduz o tempo de anestesia em camundongos, consequentemente encurtando a duração geral do experimento.
O processo geral de indução e análise de queimaduras é mostrado na Figura 2. Cada animal tinha seis queimaduras no dorso, dispostas conforme ilustrado na Figura 2E. O tamanho da ferida nesses animais foi avaliado e amostras de pele foram colhidas para análise histológica, incluindo coloração de H&amp;E e tricrômico de Masson nos dias 1, 3, 7, 10 e 14 pós-queimadura, respectivamente.
Cada ferida de queimadura era de forma circular com área igual e profundidade uniforme após a indução da queimadura. A cor da borda da queimadura mudou de branco ceroso para vermelho, acompanhada por uma zona hiperêmica devido à resposta inflamatória imediata à lesão. Além disso, o tamanho da ferida queimada aumentou ligeiramente ao longo das 72 h após a queimadura (Figura 4A).
A análise microscópica dos cortes corados com tricrômico de H&amp;E e Masson das feridas (Figura 4B) revelou destruição completa da camada epidérmica e danos em toda a espessura da derme, afetando tanto a gordura subcutânea quanto o músculo. O exame histológico indicou que o processo de cicatrização da ferida estava no estágio inflamatório no dia 3, caracterizado por vasodilatação e infiltração substancial de células inflamatórias. Uma redução notável na área da ferida foi observada no dia 7 pós-queimadura em comparação com o dia 3, como visto nas imagens microscópicas das amostras. O tecido de granulação e cardiovascular se formam, e as fibras de colágeno são depositadas densamente no dia 14, o que significa que a cicatrização de feridas entra no estágio de remodelação. As feridas se recuperaram sem infecção óbvia durante todo o processo de cicatrização.
Além disso, as habilidades de cicatrização de feridas foram avaliadas quantificando os dados de cicatrização de feridas e analisando os traçados de feridas (Figura 5). Observou-se que a recuperação da ferida foi aprimorada em feridas tratadas com hidrogel de peptídeo TKH12,14, evidenciada por áreas de feridas significativamente menores nos dias 7, 10 e 14.
O intervalo entre as feridas adjacentes (Figura 6), transversal ou longitudinal, confirmou que não houve diferença em relação à pele não queimada. A epiderme, derme e tecidos subcutâneos estavam íntegros, e não havia infiltração de linfócitos e nem vasodilatação. O processo de cicatrização das duas feridas não interfere um no outro. Portanto, diferentes medicamentos ou curativos podem ser aplicados ao tratamento de feridas com base no modelo para avaliar o efeito in vivo.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67375/67375fig01.jpg"> 
Figura 1: Dispositivo de aquecimento digital para indução de queimadura. O dispositivo de aquecimento digital usado para induzir queimaduras. (a) O controlador de temperatura permite configurações de temperatura que variam de 50 a 450 °C. (b) A base do suporte é usada para segurar a ponta de queima. (c) A ponta do dispositivo pode ser alterada para diferentes tamanhos. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67375/67375fig01large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67375/67375fig02.jpg"> 
Figura 2: Esquema do modelo de enrolamento semelhante a um tabuleiro de xadrez. Um esboço passo a passo para reproduzir o modelo de ferida semelhante a um tabuleiro de xadrez descrito no artigo. (A) Um camundongo de 8 semanas é usado como modelo para experimentos de cicatrização de feridas. (B) O cabelo é removido da área de ferimento designada. (C) Os seis locais de ferimento são marcados com uma ponta de pipeta de 1 mL. (D) Um dispositivo de aquecimento digital é usado para criar seis queimaduras no centro de cada local marcado (E). (F) Uma imagem em close-up do dorso após a indução da queimadura. (G) Amostras de pele (cerca de 1 cm × 1 cm) são colhidas nos dias 3, 7, 10 e 14. (H) As amostras de pele são achatadas usando papel de filt e transferidas para de incorporação. (I) A desidratação com parafina é realizada e (J) as amostras são seccionadas com 5 μm de espessura. (K) Os cortes são corados com hematoxilina e eosina (H&amp;E) e tricrômico de Masson. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67375/67375fig02large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67375/67375fig03.jpg"> 
Figura 3: Processo de indução de queimaduras de espessura total. (A) O diâmetro de uma ponta de pipeta de 1 mL e (B) a ponta do dispositivo de aquecimento digital são de 9 mm e 4 mm, respectivamente. (C) A área dorsal do mouse é raspada com um barbeador elétrico. (D) O creme depilatório é aplicado por 3 min. (E) A área depilada é limpa e seca, e os pontos de ferida são marcados com uma ponta de pipeta esterilizada de 1 mL. (F) O dispositivo de aquecimento digital é aplicado a 97 ° C por 10 s para criar seis queimaduras. (G) O gelo é aplicado nas feridas de queimadura para o controle da dor. (H) Toda a parte de trás do camundongo mostra as seis queimaduras de espessura total. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67375/67375fig03large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67375/67375fig04.jpg"> 
Figura 4: Imagens representativas de queimaduras e análise histológica. (A) Imagens de queimaduras nos dias 3, 7, 10 e 14, mostrando a progressão da cicatrização. (B) Imagens histológicas coradas com H&amp;E e tricrômico de Masson demonstram cicatrização de feridas e regeneração da pele. Barras de escala = 200 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67375/67375fig04large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67375/67375fig05.jpg"> 
Figura 5: Variação do tamanho da ferida ao longo do tempo. (A) A variação no tamanho da ferida em animais controle e tratados com hidrogel TKH ao longo do tempo, analisada usando o software ImageJ. (B) Os dados correspondentes de rastreamento de feridas são apresentados. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67375/67375fig05large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67375/67375fig06.jpg"> 
Figura 6: Queimaduras adjacentes e análise histológica. (A) Imagens representativas de queimaduras adjacentes no dia 1. (B) Amostras de feridas adjacentes colhidas para análise histológica no dia 3 (circuladas em vermelho). (C) O papel de filtro é usado para achatar as amostras de tecido antes da desidratação da parafina. (D) Análise tricrômica de H&amp;E e Masson de feridas adjacentes. Barras de escala: 1 mm e 200 μm (ampliadas). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67375/67375fig06large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>

Modelo de cicatrização de feridas de queimadura semelhante a um tabuleiro de xadrez de camundongos baseado em dispositivo de aquecimento digital

Severe burn injuries are among the most traumatic and physically debilitating conditions, impacting nearly every organ system and resulting in ...

chessboard-like-burn-wound-healing-model-mice-based-on-digital

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Fonte: Wang, Y., et al. In Vivo Investigação da Terapia Antimicrobiana de Luz Azul para Infecções por Queimaduras por Acinetobacter baumannii multirresistente a medicamentos usando imagem por bioluminescência. J. Vis. Exp. (2017)Este vídeo demonstra como estabelecer uma infecção por queimadura em um modelo de camundongo aplicando um bloco de latão aquecido seguido por um inoculo bacteriano patogênico. As bactérias colonizam a matriz extracelular exposta e formam um biofilme, possibilitando...

Estabelecendo um modelo camundongo de infecções por queimaduras com bactérias patogênicas

Um modelo murino de cicatrização de feridas cutâneas que podem ser utilizados para avaliar compostos terapêuticos em contextos fisiológicos e patológicos.

Modelo Murino de Cicatrização

O rato, devido ao seu tamanho, disponibilidade e de comportamento e dócil, tem sido utilizada como um modelo de pesquisa durante muitos anos. O objetivo deste protocolo é para utilizar o rato como modelo isquêmico cura de feridas cutâneas de fornecer informações valiosas sobre a fisiopatologia das feridas crônicas.

Demonstração da Wound modelo de pele de rato Isquêmico

Um modelo de tenotomia de Aquiles e lesão por queimadura de ossificação heterotópica permite o estudo confiável da formação óssea ectópica induzida por trauma sem a aplicação de fatores exógenos.

Direto Rato Trauma / Burn Modelo de ossificação heterotópica

Este artigo apresenta métodos para fabricar e caracterizar um sistema eletrônico semelhante à pele e protocolos para uso em aplicações clínicas, particularmente no tratamento de feridas cutâneas.

Fabricação e caracterização de um Sistema Eletrônico Conformal-pele como para a gestão quantitativa, Ferida Cutânea

O objetivo deste estudo foi desenvolver um modelo murino de cicatrização de feridas queimadas. Uma queimadura térmica foi induzida na pele dorsal de camundongos usando um modelo de latão pré-aquecido. Tecido queimado foi desbridado e sobreposto com um enxerto de pele colhido da cauda de um rato doador geneticamente semelhante.

Um modelo murino de uma ferida de queimadura reconstruída com um enxerto de pele aogenética

Um modelo que imite o cenário clínico de lesão por queimadura e infecção é necessário para promover a pesquisa de queimaduras. O presente protocolo demonstra um modelo de infecção por queimadura de rato simples e reprodutível, comparável ao de humanos. Isso facilita o estudo de queimaduras e infecções após a queimadura para o desenvolvimento de novos tratamentos tópicos com antibióticos.

Modelo de queimadura de rato para estudar queimadura térmica cutânea de espessura total e infecção

Feridas crônicas resistentes a antibióticos são uma grande ameaça ao sistema de saúde. As infecções por biofilme são teimosas e hostis e podem causar fechamento funcional deficiente da ferida. Relatamos um modelo suíno clinicamente relevante de feridas crônicas de espessura total infectadas por biofilme. Esse modelo é poderoso tanto para estudos mecanicistas quanto para testar intervenções.

Modelo suíno de infecção por biofilme e feridas invisíveis

Este protocolo descreve um modelo reprodutível de queimadura de várias profundidades em miniporcos de Yucatán.

Um modelo de queimadura suína para investigar o processo de cicatrização em múltiplas feridas de queimaduras de profundidade

As feridas representam um desafio de saúde global. Este estudo desenvolveu uma cabine fotográfica padronizada utilizando planimetria digital para minimizar a variabilidade da medição da ferida. O monitoramento de feridas em camundongos ao longo de 14 dias revelou um aumento inicial na área e no perímetro da ferida, seguido de fechamento gradual. Essa metodologia pode auxiliar na avaliação da cinética de fechamento de feridas em modelos pré-clínicos.

Planimetria digital para avaliar a cinética de fechamento de feridas em um modelo de camundongo

Aprenda a criar um modelo de queimadura de espessura total em camundongos usando um dispositivo de aquecimento digital. Este protocolo padronizado permite análises confiáveis da cicatrização e avaliação de tratamentos como o hidrogel TKH.

Modelo de cicatrização de feridas de queimadura semelhante a um tabuleiro de xadrez de camundongos baseado em dispositivo de aquecimento digital (Vídeo) | JoVE Journal

Modelo de cicatrização de feridas de queimadura semelhante a um tabuleiro de xadrez de camundongos baseado em dispositivo de aquecimento digital

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