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DOI: 10.3791/67389-v
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Aqui, fornecemos um protocolo detalhado para realizar imagens ao vivo da divisão assimétrica de células-tronco germinativas (GSCs) no nicho ovariano de Drosophila. Usamos uma linhagem transgênica que expressa de forma ubíqua uma fusão de proteína fluorescente verde (GFP) da proteína do espectrossomo Par-1.
Estamos interessados em descobrir novos mecanismos celulares e moleculares que controlam a estaminalidade das células. Nosso principal objetivo é decifrar como as células-tronco evitam a diferenciação nos nichos. Como estamos trabalhando em condições experimentais, é essencial preservar a integridade do tecido para garantir que os GSCs recebam um comportamento fisiológico.
Nosso protocolo mantém um nicho de GSC saudável e funcional, permitindo o monitoramento da divisão de GSCs como seriam in vivo. O uso de imagens de vida prolongada nos permite estudar todo o ciclo celular das GSCs e a dinâmica dos espectrossomos. Especificamente, caracterizamos com sucesso as mudanças espectrosômicas ao longo do ciclo celular, uma tarefa que antes era difícil de realizar com imagens fixas ou períodos de imagem mais curtos.
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