Name: Ensaio quantitativo baseado em PCR para medir a sinalização Sonic Hedgehog em modelo celular de ciliogênese (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-01-31T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 26 s
Description: Aprenda a desenvolver um ensaio quantitativo baseado em PCR para avaliar a sinalização Sonic Hedgehog em células RPE-1 ciliadas. Este método sensível permite examinar alterações genéticas e epigenéticas associadas à disfunção de cílios primários.

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<ol><li>Nigg, E. A., Raff, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Centrioles%2C+centrosomes%2C+and+cilia+in+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Centrioles, centrosomes, and cilia in health and disease.</a> Cell. 139 (4), 663-678 (2009).</li>
<li>Halder, P., Khatun, S., Majumder, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Freeing+the+brake%3A+Proliferation+needs+primary+cilium+to+disassemble%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biosci%22%5BJournal%5D)">Freeing the brake: Proliferation needs primary cilium to disassemble.</a> J Biosci. 45, 117(2020).</li>
<li>Eguether, T., Cordelieres, F. P., Pazour, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraflagellar+transport+is+deeply+integrated+in+hedgehog+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Biol+Cell%22%5BJournal%5D)">Intraflagellar transport is deeply integrated in hedgehog signaling.</a> Mol Biol Cell. 29 (10), 1178-1189 (2018).</li>
<li>Ishikawa, H., Marshall, W. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraflagellar+transport+and+ciliary+dynamics%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb+Perspect+Biol%22%5BJournal%5D)">Intraflagellar transport and ciliary dynamics.</a> Cold Spring Harb Perspect Biol. 9 (3), a021998(2017).</li>
<li>Hildebrandt, F., Benzing, T., Katsanis, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ciliopathies%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Ciliopathies.</a> N Engl J Med. 364 (16), 1533-1543 (2011).</li>
<li>Reiter, J. F., Leroux, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genes+and+molecular+pathways+underpinning+ciliopathies%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Genes and molecular pathways underpinning ciliopathies.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 18 (9), 533-547 (2017).</li>
<li>Hilgendorf, K. I., Myers, B. R., Reiter, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emerging+mechanistic+understanding+of+cilia+function+in+cellular+signalling%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Emerging mechanistic understanding of cilia function in cellular signalling.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 25 (7), 555-573 (2024).</li>
<li>Bansal, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hedgehog+pathway+activation+alters+ciliary+signaling+in+primary+hypothalamic+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Hedgehog pathway activation alters ciliary signaling in primary hypothalamic cultures.</a> Front Cell Neurosci. 13, 266(2019).</li>
<li>Gigante, E. D., Caspary, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Signaling+in+the+primary+cilium+through+the+lens+of+the+hedgehog+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Wiley+Interdiscip+Rev+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Signaling in the primary cilium through the lens of the hedgehog pathway.</a> Wiley Interdiscip Rev Dev Biol. 9 (6), e377(2020).</li>
<li>Anvarian, Z., Mykytyn, K., Mukhopadhyay, S., Pedersen, L. B., Christensen, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+signalling+by+primary+cilia+in+development%2C+organ+function+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Cellular signalling by primary cilia in development, organ function and disease.</a> Nat Rev Nephrol. 15 (4), 199-219 (2019).</li>
<li>Bangs, F., Anderson, K. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primary+cilia+and+mammalian+hedgehog+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb+Perspect+Biol%22%5BJournal%5D)">Primary cilia and mammalian hedgehog signaling.</a> Cold Spring Harb Perspect Biol. 9 (5), a028175(2017).</li>
<li>Brown, J. M., Witman, G. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cilia+and+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Bioscience%22%5BJournal%5D)">Cilia and diseases.</a> Bioscience. 64 (12), 1126-1137 (2014).</li>
<li>Hanaki, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alstrom+syndrome%3A+A+review+focusing+on+its+diverse+clinical+manifestations+and+their+etiology+as+a+ciliopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Yonago+Acta+Med%22%5BJournal%5D)">Alstrom syndrome: A review focusing on its diverse clinical manifestations and their etiology as a ciliopathy.</a> Yonago Acta Med. 67 (2), 93-99 (2024).</li>
<li>Merrill, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ciliary+abnormalities+due+to+defects+in+the+retrograde+transport+protein+dync2h1+in+short-rib+polydactyly+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Hum+Genet%22%5BJournal%5D)">Ciliary abnormalities due to defects in the retrograde transport protein dync2h1 in short-rib polydactyly syndrome.</a> Am J Hum Genet. 84 (4), 542-549 (2009).</li>
<li>Dagoneau, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dync2h1+mutations+cause+asphyxiating+thoracic+dystrophy+and+short+rib-polydactyly+syndrome%2C+type+iii%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Hum+Genet%22%5BJournal%5D)">Dync2h1 mutations cause asphyxiating thoracic dystrophy and short rib-polydactyly syndrome, type iii.</a> Am J Hum Genet. 84 (5), 706-711 (2009).</li>
<li>Majumder, S., Fisk, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vdac3+and+mps1+negatively+regulate+ciliogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Cycle%22%5BJournal%5D)">Vdac3 and mps1 negatively regulate ciliogenesis.</a> Cell Cycle. 12 (5), 849-858 (2013).</li>
<li>Briscoe, J., Therond, P. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mechanisms+of+hedgehog+signalling+and+its+roles+in+development+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">The mechanisms of hedgehog signalling and its roles in development and disease.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 14 (7), 416-429 (2013).</li>
<li>Placzek, M., Briscoe, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sonic+hedgehog+in+vertebrate+neural+tube+development%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Sonic hedgehog in vertebrate neural tube development.</a> Int J Dev Biol. 62 (1-2-3), 225-234 (2018).</li>
<li>Wong, S. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primary+cilia+can+both+mediate+and+suppress+hedgehog+pathway-dependent+tumorigenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Primary cilia can both mediate and suppress hedgehog pathway-dependent tumorigenesis.</a> Nat Med. 15 (9), 1055-1061 (2009).</li>
<li>Deshpande, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Smoothened+stimulation+by+membrane+sterols+drives+hedgehog+pathway+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Smoothened stimulation by membrane sterols drives hedgehog pathway activity.</a> Nature. 571 (7764), 284-288 (2019).</li>
<li>Mukhopadhyay, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+ciliary+g-protein-coupled+receptor+gpr161+negatively+regulates+the+sonic+hedgehog+pathway+via+camp+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">The ciliary g-protein-coupled receptor gpr161 negatively regulates the sonic hedgehog pathway via camp signaling.</a> Cell. 152 (1-2), 210-223 (2013).</li>
<li>Niewiadomski, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gli+protein+activity+is+controlled+by+multisite+phosphorylation+in+vertebrate+hedgehog+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Gli protein activity is controlled by multisite phosphorylation in vertebrate hedgehog signaling.</a> Cell Rep. 6 (1), 168-181 (2014).</li>
<li>Kovacs, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Beta-arrestin-mediated+localization+of+smoothened+to+the+primary+cilium%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Beta-arrestin-mediated localization of smoothened to the primary cilium.</a> Science. 320 (5884), 1777-1781 (2008).</li>
<li>He, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+kinesin-4+protein+kif7+regulates+mammalian+hedgehog+signalling+by+organizing+the+cilium+tip+compartment%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">The kinesin-4 protein kif7 regulates mammalian hedgehog signalling by organizing the cilium tip compartment.</a> Nat Cell Biol. 16 (7), 663-672 (2014).</li>
<li>Wen, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kinetics+of+hedgehog-dependent+full-length+gli3+accumulation+in+primary+cilia+and+subsequent+degradation%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Kinetics of hedgehog-dependent full-length gli3 accumulation in primary cilia and subsequent degradation.</a> Mol Cell Biol. 30 (8), 1910-1922 (2010).</li>
<li>Griffiths, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hedgehog-interacting+protein+is+a+multimodal+antagonist+of+hedgehog+signalling%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Hedgehog-interacting protein is a multimodal antagonist of hedgehog signalling.</a> Nat Commun. 12 (1), 7171(2021).</li>
<li>Gomez, A. E., Christman, A. K., Van De Weghe, J. C., Finn, M., Doherty, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systematic+analysis+of+cilia+characteristics+and+hedgehog+signaling+in+five+immortal+cell+lines%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Systematic analysis of cilia characteristics and hedgehog signaling in five immortal cell lines.</a> PLoS One. 17 (12), e0266433(2022).</li>
<li>Schmidt, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primary+cilia+and+shh+signaling+impairments+in+human+and+mouse+models+of+parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Primary cilia and shh signaling impairments in human and mouse models of parkinson's disease.</a> Nat Commun. 13 (1), 4819(2022).</li>
<li>Dutta, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increase+in+primary+cilia+number+and+length+upon+vdac1+depletion+contributes+to+attenuated+proliferation+of+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Increase in primary cilia number and length upon vdac1 depletion contributes to attenuated proliferation of cancer cells.</a> Exp Cell Res. 429 (2), 113671(2023).</li>
<li>De, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hyperphosphorylation+of+cdh1+in+glioblastoma+cancer+stem+cells+attenuates+apc%2Fc%28cdh1%29+activity+and+pharmacologic+inhibition+of+apc%2Fc%28cdh1%2Fcdc20%29+compromises+viability%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Hyperphosphorylation of cdh1 in glioblastoma cancer stem cells attenuates apc/c(cdh1) activity and pharmacologic inhibition of apc/c(cdh1/cdc20) compromises viability.</a> Mol Cancer Res. 17 (7), 1519-1530 (2019).</li>
<li>Yang, S., Zheng, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+immunofluorescence-based+detection+of+hedgehog+pathway+components+in+primary+cilia+of+cultured+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">The immunofluorescence-based detection of hedgehog pathway components in primary cilia of cultured cells.</a> Methods Mol Biol. 2374, 89-94 (2022).</li>
<li>Wang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mir-669a-5p%2Fg3bp%2Fhdac6%2Fakap12+axis+regulates+primary+cilia+length%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Sci+%28Weinh%29%22%5BJournal%5D)">The mir-669a-5p/g3bp/hdac6/akap12 axis regulates primary cilia length.</a> Adv Sci (Weinh). 11 (6), e2305068(2024).</li>
<li>Alanazi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identifying+the+roles+of+mir-17+in+ciliogenesis+and+cell+cycle%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Identifying the roles of mir-17 in ciliogenesis and cell cycle.</a> Front Cell Dev Biol. 12, 1397931(2024).</li>
<li>Bustin, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+miqe+guidelines%3A+Minimum+information+for+publication+of+quantitative+real-time+pcr+experiments%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Chem%22%5BJournal%5D)">The miqe guidelines: Minimum information for publication of quantitative real-time pcr experiments.</a> Clin Chem. 55 (4), 611-622 (2009).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>DMSO, filtrado estéril</td><td>Sigma</td><td>D2650</td><td></td></tr><tr><td>Burro, anti-Mouse IgG (H+L) Alexa Fluor 488</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>A21202</td><td></td></tr><tr><td>Burro, anti-Coelho IgG (H+L) Alexa Fluor 568</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>A10042</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM)</td><td>Gibco, ThermoFisher Scientific</td><td>41965039</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco's phosphate-buffered salina (DPBS)</td><td>Gibco, ThermoFisher Scientific</td><td>14190144</td><td></td></tr><tr><td>Fetal bovine serum (FBS)</td><td>Himedia</td><td>RM1112</td><td></td></tr><tr><td>Microscópio de Fluorescência equipado com objetiva 60X</td><td>Carl Zeiss&nbsp;</td><td></td><td>Axio observador colibri 5</td></tr><tr><td>células hTERT-RPE1</td><td>ATCC</td><td>CRL-4000</td><td></td></tr><tr><td>iScript cDNA Synthesis Kit</td><td>Bio-Rad Laboratories</td><td>1708891</td><td></td></tr><tr><td>Mouse, anticorpo monoclonal anti-tubulina acetilada</td><td>Milipore Sigma-Aldrich</td><td>T7451</td><td>Diluição final 1:1000</td></tr><tr><td>Penicilina-estreptomicina, 100X</td><td>Gibco, ThermoFisher Scientific</td><td>15140122</td><td></td></tr><tr><td>Máquina de PCR quantitativa, CFX 96</td><td>Bio-Rad Laboratories</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Coelho, anticorpo policlonal Arl13B</td><td>ProteinTech</td><td>17711-1-AP</td><td>Diluição final 1:250</td></tr><tr><td>Coelho, anticorpo policlonal Cep135</td><td>ProteinTech</td><td>24428-1-AP</td><td>Diluição final 1:500</td></tr><tr><td>SlowFade gold Antifade moutant</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>S36940</td><td></td></tr><tr><td>Suavizado Agonista (SAG)&nbsp;</td><td>Abmole</td><td>M4865</td><td>Solução de estoque: em DMSO, 5 mM</td></tr><tr><td>SsoAdvanced Universal SYBR Green Supermix</td><td>Bio-Rad Laboratories</td><td>1725271</td><td></td></tr><tr><td>TRIzol Reagent</td><td>Invitrogen</td><td>15596026</td><td></td></tr><tr><td>TrypLE</td><td>Gibco, ThermoFisher Scientific</td><td>12605028</td><td></td></tr></tbody></table>

ensaio quantitativo baseado em pcr para medir a sinalização sonic hedgehog em modelo celular de ciliogênese

Quantitative PCR-based Assay to Measure Sonic Hedgehog Signaling in Cellular Model of Ciliogenesis

A ativação da via de transdução de sinal SHH mediada por PC é uma forma de entender a função adequada do PC7. Aqui, a expressão relativa dos genes-alvo da via SHH é medida usando o ensaio RT-qPCR após a ativação mediada por SAG da via SHH em células RPE1 que são principalmente ciliadas. As saídas transcricionais diretas da via SHH GLI1 e PTCH1 são frequentemente empregadas para avaliar a atividade dessa via11. Este protocolo também inclui o transcrito HHIP, que é regulado p...

Ensaio quantitativo baseado em PCR para medir a sinalização Sonic Hedgehog em modelo celular de ciliogênese

Ciliopathy refers to a collection of multisystemic and polygenic human diseases and disorders that arise due to aberration of structure or function of ...

quantitative-pcr-based-assay-to-measure-sonic-hedgehog-signaling

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Biologia

Nós descrevemos o uso de um ensaio de células de rato ES base para identificar janelas de tempo crítico para Wnt / β-catenina e ativação do sinal BMP durante a indução cardiogênico. O método fornece uma plataforma padronizada, que quantifica a eficiência confiável cardiogênico, e é aplicável ao estudo de linhagens de célula.

Modificado embrionárias de camundongos com células-tronco Ensaio baseado para quantificar a eficiência de indução cardiogênico

Tissue-specific análise de um modelo de regeneração do cabelo folicular usando lentivírus para mediar o ganho ou perda de função.

Análise Genética rápida de epitelial-mesenquimal sinalização durante a regeneração do cabelo

O manuscrito aqui fornece um simples conjunto de métodos que permitam analisar a secreção e difusão de ligantes marcados fluorescentes em Xenopus. Isto proporciona um contexto para testar a capacidade de outras proteínas para modificar a distribuição de ligando e permitindo experiências que podem dar uma visão sobre os mecanismos que regulam a gradientes de morfogénio.

Utilizando Análise de confocal<em&gt; Xenopus laevis</em&gt; Para Investigar moduladores de Wnt e Shh morfogénio gradientes

Os cílios primários influenciam várias vias de sinalização. A cóclea de mamíferos é ideal para examinar a sinalização da polaridade das células planares (PCP). A disfunção dos cílios afeta o crescimento coclear, a padronização celular e a orientação das células ciliadas, as leituras de PCP. Nosso objetivo é analisar a sinalização de PCP na cóclea de camundongo por meio de análise fenotípica, imuno-histoquímica e microscopia eletrônica de varredura.

Avaliação da Planar-Cell-Polaridade fenótipos em Ciliopathy rato mutante cóclea

Este artigo de vídeo detalha uma simples em metodologia in vivo que pode ser utilizado para caracterizar de forma eficiente e sistematicamente componentes de vias de sinalização complexas e redes reguladoras em muitos embriões de invertebrados.

O Poder da Simplicidade: Sea Urchin embriões<em&gt; Na Vivo</em&gt; Modelos de desenvolvimento para estudar células de células-complexo de sinalização de rede Interações

Estamos com sucesso geraram dois ensaios de substrato específico γ-secretase. Ambos os ensaios cell-based aqui apresentados destinam-se para quantificar o γ-secretase actividades enzimáticas através da saída de repórteres de luciferase de vaga-lume.

Medida quantitativa da proteína precursora amiloide γ-Secretase-mediada e clivagem de entalhe em plataformas de ensaio baseada em célula Luciferase Reporter

Um protocolo para a cultura e manipulação do tecido embrionário do rato em um chip microfluido é fornecido. Aplicando pulsos de moduladores de via, este sistema pode ser usado para controlar externamente as oscilações de sinalização para a investigação funcional da sonorênese do mouse.

Uma abordagem microfluidics para a investigação funcional de oscilações de sinalização que regem a Somitogênese

Apresentamos protocolos detalhados para a geração e caracterização de células-tronco pluripotentes induzidas por humanos 2D e 3D (hIPSC) de desenvolvimento neocortical, bem como metodologias complementares que permitem análise qualitativa e quantitativa da biogênese e função do cilium primário (PC).

Modelos pluripotentes 2D e 3D induzidos por humanos para dissecar o envolvimento do círio primário durante o desenvolvimento neocortical

Aqui, apresentamos um protocolo de eletroporação in vitro reprodutível para manipulação genética de precursores primários de células de grânulo cerebelar (GCPs) que é econômico, eficiente e viável. Além disso, este protocolo também demonstra um método simples para o estudo molecular de vias primárias de sinalização de Ouriço dependentes de cílios em células GCP primárias.

Método de eletroporação eficiente e econômico para estudar vias de sinalização dependentes de cítio primário no precursor da célula de grânulo

Proboscis resposta extensão ou PER é um ensaio de comportamento gosto que tem sido utilizado em moscas, bem como em abelhas. Quando a tromba faz contato com uma substância atrativa, a mosca estende sua tromba para consumir a substância. Soluções dos vários açúcares, são muito atraentes para a mosca.

Extensão Proboscis Response Assay (PER) em Drosophila

Aprenda a desenvolver um ensaio quantitativo baseado em PCR para avaliar a sinalização Sonic Hedgehog em células RPE-1 ciliadas. Este método sensível permite examinar alterações genéticas e epigenéticas associadas à disfunção de cílios primários.

Ensaio quantitativo baseado em PCR para medir a sinalização Sonic Hedgehog em modelo celular de ciliogênese

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