Uma abordagem cirúrgica para esmagamento do nervo óptico em um modelo de coelho

Olá e bem-vindo. Neste vídeo, demonstraremos um protocolo para realizar o esmagamento do nervo óptico, ou ONC, em um modelo de coelho usando técnicas cirúrgicas oftálmicas padrão. Esta técnica experimental gera modelos controlados de lesão do nervo óptico essenciais para estudar neuropatias ópticas e explorar intervenções terapêuticas. Ao aplicar ONC em coelhos, pretendemos melhorar nossa compreensão das lesões do nervo óptico em doenças neurodegenerativas e desenvolver novas estratégias terapêuticas. Vamos prosseguir para a seção detalhada do protocolo. Primeiro, coloque uma sutura corneana de espessura parcial através da córnea periférica superior perto do limbo. Execute uma conjuntival superior das 10 às duas horas usando uma tesoura Westcott e uma pinça de 12 milímetros. Disseque cuidadosamente a cápsula de Tenon para expor o reto superior subjacente e os músculos ópticos superiores. Use um gancho muscular para isolar o músculo reto superior. Agora, a sutura de Vicryl de dois braços passará por toda a espessura através do centro do reto superior. Isso está amarrado com um nó de cirurgião. A agulha é passada espessura parcial através do comprimento do músculo, do centro para a borda do músculo. A agulha é carregada na parte traseira e, em seguida, passada em toda a espessura da parte inferior do músculo para a frente. O porta-agulha é passado pelo laço e a agulha é agarrada. Quando a agulha é puxada, a sutura trava essa metade do músculo. A segunda agulha é usada para proteger a outra metade do músculo de maneira semelhante. Use uma tesoura Westcott para separar o músculo reto superior do globo, tomando cuidado para não cortar as suturas. Infraduto suave Disseque suavemente o tecido orbital circundante para expor totalmente o nervo óptico. Evite cortar o tecido e use apenas dissecção romba. Deve-se tomar cuidado para evitar danificar a veia do vórtice. Um gancho muscular pode ser usado para isolar o nervo óptico. O nervo óptico do coelho é ligeiramente superior e cercado por gorduras retro-orbitais. O nervo é branco e tem cerca de um milímetro de diâmetro. Clamp o nervo óptico usando um porta-agulha por 60 segundos para induzir lesão por esmagamento. O local do esmagamento é cerca de três milímetros posterior à cabeça do nervo óptico para evitar danos à artéria oftálmica. Agora, reaproxime o músculo reto superior de volta à sua localização original no globo. Passe as duas agulhas, que foram usadas anteriormente, para prender o músculo reto superior parcialmente através da inserção muscular original. Aperte a sutura e coloque um nó de cirurgião. Complete o procedimento suturando a conjuntiva ao limbo com três suturas neuroptivas. Durante a recuperação e o período pós-operatório, forneça analgesia e cuidados de suporte ao animal. Para avaliar a função visual, medimos a proporção entre o diâmetro da pupila e o diâmetro branco-branco sob condições de iluminação mesópica e flash. Antes do ONC, a pupila se contraía significativamente em resposta à luz. Já no primeiro dia após a ONC, o diâmetro da pupila mostrou pouca ou nenhuma alteração, indicando perda significativa da função visual. Também registramos potenciais evocados visuais flash, VEPs, tanto do esmagamento do nervo óptico quanto dos olhos contralaterais não tratados. As medições de VEP flash refletem a resposta da retina, através do nervo óptico, ao cérebro. Enquanto a latência P1 permaneceu consistente, a amplitude P1 diminuiu significativamente nos olhos ONC, indicando perda significativa da função visual. Para avaliar a perda de axônios após o procedimento de ONC, usamos imagens de fluorescência de cortes longitudinais do nervo óptico. No grupo não tratado, o traçador de axônio anterógrado CTB mostrou marcação contínua em todo o nervo óptico. No entanto, no grupo esmagado, a marcação do axônio parou no local do esmagamento, indicando lesão nervosa. Os perfis de intensidade de fluorescência confirmaram isso quantitativamente, mostrando uma queda significativa na intensidade média do axônio marcado com CTB distal ao local do esmagamento. Em conclusão, apresentamos um guia passo a passo para o procedimento ONC em um modelo de coelho, garantindo uma replicação confiável. Não observamos complicações. A eficácia da técnica ONC na criação de lesão do nervo óptico e deficiência visual foi validada por meio de avaliações de resposta pupilar e VEP. Este modelo de coelho oferece uma alternativa econômica aos modelos animais maiores, com maior semelhança anatômica e fisiológica com os humanos. Obrigado por assistir.