Name: Desenvolvimento de um sistema de protoplastos de repolho para estudo da tolerância à hipóxia em brássicas (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-09-20T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 9 s
Description: Aprenda a desenvolver um sistema de protoplastos de repolho para estudar respostas moleculares à hipóxia em Brassicaceae. Este método permite analisar genes responsivos à baixa oxigenação e melhorar a tolerância ao alagamento em cultivares de repolho.

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<meta charset="utf8"></head><body>Sistema eficiente de protoplastos de repolho para estudar mecanismos de tolerância a inundações

<ol><li>Tanoue, M., Hirabayashi, Y., Ikeuchi, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global-scale+river+flood+in+the+last+50+years%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Global-scale river flood in the last 50 years.</a> Sci Rep. 6 (1), 36021(2016).</li>
<li>Voesenek, L. aC. J., Bailey-Serres, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flood+adaptive+traits+and+processes%3A+An+overview%5BTitle%5D)+AND+%22New+Phytol%22%5BJournal%5D)">Flood adaptive traits and processes: An overview.</a> New Phytol. 206 (1), 57-73 (2015).</li>
<li>Sheen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Signal+transduction+in+maize+and+Arabidopsis+mesophyll+protoplasts%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Physiol%22%5BJournal%5D)">Signal transduction in maize and Arabidopsis mesophyll protoplasts.</a> Plant Physiol. 127 (4), 1466-1475 (2001).</li>
<li>Chen, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+highly+efficient+transient+protoplast+system+for+analyzing+defense+gene+expression+and+protein-protein+interactions+in+rice%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Plant+Pathol%22%5BJournal%5D)">A highly efficient transient protoplast system for analyzing defense gene expression and protein-protein interactions in rice.</a> Mol Plant Pathol. 7 (5), 417-427 (2006).</li>
<li>Yoo, S. -D., Cho, Y. -H., Sheen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Arabidopsis+mesophyll+protoplasts%3A+A+versatile+cell+system+for+transient+gene+expression+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Arabidopsis mesophyll protoplasts: A versatile cell system for transient gene expression analysis.</a> Nat Protoc. 2 (7), 1565-1572 (2007).</li>
<li>Wang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+protoplast+isolation%2C+transformation%2C+and+its+application+in+sugarcane+%28Saccharum+spontaneum+L%29%5BTitle%5D)+AND+%22Crop+J%22%5BJournal%5D)">Optimization of protoplast isolation, transformation, and its application in sugarcane (Saccharum spontaneum L).</a> Crop J. 9 (1), 133-142 (2021).</li>
<li>Adedeji, O. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+protocol+for+efficient+protoplast+isolation+and+transient+gene+expression+in+carnation%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Hortic%22%5BJournal%5D)">Optimization of protocol for efficient protoplast isolation and transient gene expression in carnation.</a> Sci Hortic. 299, 111057(2022).</li>
<li>Lin, H. -Y., Chen, J. -C., Fang, S. -C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+protoplast+transient+expression+system+to+enable+molecular%2C+cellular%2C+and+functional+studies+in+Phalaenopsis+orchids%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Plant+Sci%22%5BJournal%5D)">A protoplast transient expression system to enable molecular, cellular, and functional studies in Phalaenopsis orchids.</a> Front Plant Sci. 9, (2018).</li>
<li>Wang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+highly+efficient+mesophyll+protoplast+isolation+and+PEG-mediated+transient+expression+system+in+eggplant%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Hortic%22%5BJournal%5D)">A highly efficient mesophyll protoplast isolation and PEG-mediated transient expression system in eggplant.</a> Sci Hortic. 304, 111303(2022).</li>
<li>Lin, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+protoplast+isolation+system+for+functional+gene+expression+and+characterization+using+petals+of+Camellia+oleifera%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Physiol+Biochem%22%5BJournal%5D)">Development of a protoplast isolation system for functional gene expression and characterization using petals of Camellia oleifera.</a> Plant Physiol Biochem. 201, 107885(2023).</li>
<li>Guo, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Highly+efficient+isolation+of+Populus+mesophyll+protoplasts+and+its+application+in+transient+expression+assays%5BTitle%5D)+AND+%22PLOS+One%22%5BJournal%5D)">Highly efficient isolation of Populus mesophyll protoplasts and its application in transient expression assays.</a> PLOS One. 7 (9), e44908(2012).</li>
<li>Gottschald, O. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TIAR+and+TIA-1+mRNA-binding+proteins+co-aggregate+under+conditions+of+rapid+oxygen+decline+and+extreme+hypoxia+and+suppress+the+HIF-1%CE%B1+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">TIAR and TIA-1 mRNA-binding proteins co-aggregate under conditions of rapid oxygen decline and extreme hypoxia and suppress the HIF-1α pathway.</a> J Mol Cell Biol. 2 (6), 345-356 (2010).</li>
<li>Cho, H. -Y., Chou, M. -Y., Ho, H. -Y., Chen, W. -C., Shih, M. -C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ethylene+modulates+translation+dynamics+in+Arabidopsis+under+submergence+via+GCN2+and+EIN2%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Adv%22%5BJournal%5D)">Ethylene modulates translation dynamics in Arabidopsis under submergence via GCN2 and EIN2.</a> Sci Adv. 8 (22), eadm7863(2022).</li>
<li>Boudreau, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Excitation+light+dose+engineering+to+reduce+photo-bleaching+and+photo-toxicity%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Excitation light dose engineering to reduce photo-bleaching and photo-toxicity.</a> Sci Rep. 6 (1), 30892(2016).</li>
<li>Shcherbakova, D. M., Cox Cammer, N., Huisman, T. M., Verkhusha, V. V., Hodgson, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+multiplex+imaging+and+optogenetics+of+Rho+GTPases+enabled+by+near-infrared+FRET%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Chem+Biol%22%5BJournal%5D)">Direct multiplex imaging and optogenetics of Rho GTPases enabled by near-infrared FRET.</a> Nat Chem Biol. 14 (6), 591-600 (2018).</li>
<li>Jiang, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sodium+sulfite+is+a+potential+hypoxia+inducer+that+mimics+hypoxic+stress+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Inorg+Chem%22%5BJournal%5D)">Sodium sulfite is a potential hypoxia inducer that mimics hypoxic stress in Caenorhabditis elegans.</a> J Biol Inorg Chem. 16 (2), 267-274 (2011).</li>
<li>Lin, C. -C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SUB1A-1+anchors+a+regulatory+cascade+for+epigenetic+and+transcriptional+controls+of+submergence+tolerance+in+rice%5BTitle%5D)+AND+%22PNAS+Nexus%22%5BJournal%5D)">SUB1A-1 anchors a regulatory cascade for epigenetic and transcriptional controls of submergence tolerance in rice.</a> PNAS Nexus. 2 (7), pgad229(2023).</li>
<li>Zhang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bis-molybdopterin+guanine+dinucleotide+modulates+hemolysin+expression+under+anaerobiosis+and+contributes+to+fitness+in+vivo+in+uropathogenic+Escherichia+coli%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Bis-molybdopterin guanine dinucleotide modulates hemolysin expression under anaerobiosis and contributes to fitness in vivo in uropathogenic Escherichia coli.</a> Mol Microbiol. 116 (4), 1216-1231 (2021).</li>
<li>Liu, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+light+and+hypoxia-induced+gene+zmPORB1+determines+tocopherol+content+in+the+maize+kernel%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+China+Life+Sci%22%5BJournal%5D)">The light and hypoxia-induced gene zmPORB1 determines tocopherol content in the maize kernel.</a> Sci China Life Sci. 67 (3), 435-448 (2024).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Ácido etanossulfônico 2-(N-morfolino) (MES)</td><td>PhytoTech Labs</td><td>M825</td><td>Para preparação de solução enzimática</td></tr><tr><td>228 sementes de repolho</td><td>Takii & Co., Ltd. (Kyoto, Japão)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tubo cônico de 50 mL</td><td>SPL Life Sciences</td><td>50050</td><td>Para preparação de solução enzimática</td></tr><tr><td>Placa de cultura de tecidos de 6 poços</td><td>Alpha Plus</td><td>16106</td><td>Para incubação de protoplastos</td></tr><tr><td>70 &mu; filtro de células m</td><td>Sorfa&nbsp;</td><td>SCS701</td><td>Para filtração de protoplastos</td></tr><tr><td>Placa de Petri de 9 cm</td><td>Alpha Plus</td><td>16001</td><td>Para digestão enzimática</td></tr><tr><td>Jarra anaeróbica</td><td>HIMEDIA</td><td>Jarra anaeróbica 3,5 L</td><td>Para tratamento de hipóxia&nbsp;</td></tr><tr><td>Albumina de soro bovino</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A7906</td><td>Para preparação de solução W5 e revestimento de placa de cultura</td></tr><tr><td>Cloreto de cálcio</td><td>J.T.Baker</td><td>131301</td><td>Para solução W5 e preparação de solução PEG</td></tr><tr><td>Celulase R10</td><td>Yakult</td><td></td><td>Para preparação de solução enzimática</td></tr><tr><td>Desiccator</td><td>Tarsons&nbsp;</td><td>402030</td><td>Para infiltração a vácuo</td></tr><tr><td>D-Glucose</td><td>Bioshop</td><td>GLU501</td><td>Para preparação de solução W5</td></tr><tr><td>Medidor de oxigênio dissolvido</td><td>Thermo Scientific</td><td>Orion Star A223</td><td>Para medição de oxigênio</td></tr><tr><td>D-Mannitol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M1902</td><td>Para solução enzimática, solução PEG e preparação de solução MMG</td></tr><tr><td>Sistema de ensaio Reporter de Luciferase</td><td>Dupla Promega</td><td>E1960</td> Para ensaio de <td>repórter de luciferase</td></tr><tr><td>dupla EC-Oxyrase</td><td>Oxyrase Inc.</td><td>EC-0005</td><td>Para tratamento de hipóxia</td></tr><tr><td>Sementes de repolho Fuyudori</td><td>Kobayashi Seed Co., Ltd. (Kakogawashi, Japão)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Centrífuga refrigerada de alta velocidade</td><td>Hitachi</td><td>CR21GIII</td><td>Para colheita de protoplastos</td></tr><tr><td>Macerozyme R10&nbsp;</td><td>Yakult</td><td></td><td>Para preparação de solução enzimática</td></tr><tr><td>Cloreto de magnésio</td><td>Alfa Aesar</td><td>12315</td><td>Para preparação de solução MMG</td></tr><tr><td>Microcentrífuga</td><td>Hitachi</td><td>CT15RE</td><td>Para colheita de protoplasto</td></tr><tr><td>Microplate</td><td>Greiner</td><td>655075</td><td>Para ensaio repórter de luciferase dupla</td></tr><tr><td>Leitor de microplacas</td><td>Dispositivos moleculares</td><td>SpectraMax Mini</td><td>para Ensaio repórter de luciferase dupla</td></tr><tr><td>Millex 0,22 &mu; Filtro de seringa M</td><td>Merck</td><td>SLGP033RS</td><td>Para preparação de solução enzimática</td></tr><tr><td>Bomba de Vácuo Livre de Óleo</td><td>Rocker&nbsp;</td><td>Rocker 300</td><td>Para infiltração a vácuo</td></tr><tr><td>OxyFluor</td><td>Oxyrase Inc.</td><td>OF-0005</td><td>Para tratamento de hipóxia</td></tr><tr><td>Pacote de absorvedor de oxigênio</td><td>Mitsubishi Gas Chemical Company</td><td>AnaeroPack, MGCC1</td><td>Para tratamento de hipóxia</td></tr><tr><td>Concentrador de oxigênio</td><td>ULTIMATE PERFECT</td><td>AII-X</td><td>Para borbulhar oxigênio em solução W5</td></tr><tr><td>Substrato vegetal</td><td>Klasmann-Deilmann</td><td>Substrato Potgrond H</td><td>Para preparação de mudas de repolho</td></tr><tr><td>Kit Midi de plasmídeo</td><td>QIAGEN</td><td>12145</td><td>Para purificação de DNA de plasmídeo de grau de transfecção&nbsp;</td></tr><tr><td>Polietilenoglicol 4000</td><td>Fluka</td><td>81240</td><td>Para transfecção de protoplasto</td></tr><tr><td>Cloreto de potássio</td><td>J.T.Baker</td><td>304001</td><td>Para preparação de solução W5</td></tr><tr><td>Lâmina de barbear</td><td>Gillette</td><td></td><td>Para preparação de tiras de folhas de repolho</td></tr><tr><td>Cloreto de sódio</td><td>Bioshop</td><td>SOD002</td><td>Para preparação de solução W5</td></tr><tr><td>Sulfito de sódio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S0505</td><td>Para tratamento de hipóxia</td></tr><tr><td>Banho-maria</td><td>Yihder</td><td>BU-240D</td><td>Para preparação de solução enzimática</td></tr></tbody></table>

desenvolvimento de um sistema de protoplastos de repolho para estudo da tolerância à hipóxia em brássicas

Development of a Cabbage Protoplast System for Studying Hypoxia Tolerance in Brassica

Este trabalho desenvolveu com sucesso um sistema de expressão transitória utilizando protoplastos de repolho (consulte a Figura 1 para fluxo de trabalho). Os protoplastos foram isolados de folhas verdadeiras de repolho de 2 a 3 semanas de idade de tamanho apropriado (Figura 2A) das cultivares comerciais de repolho 'Fuyudori' e '228' usando digestão de celulase / macerozima e infiltração a vácuo escuro (Figura 2B, C). Para mitigar as condições hipóxicas experimentadas pelos protoplastos submersos durante a incubação, a solução W5 foi oxigenada usando um borbulhador de pedra de ar conectado a uma máquina de oxigênio (Figura 2D). Este processo elevou significativamente a concentração de oxigénio dissolvido na solução W5 de 7,84 mg· L-1 ± 0,05 mg· L-1 a 29,18 mg· L-1 ± 0,43 mg· L-1 após 5 min de oxigênio borbulhando. Após o processo de isolamento, o rendimento dos protoplastos foi de 1,04 x 107 para 'Fuyudori' e 4,00 x 106 protoplastos · g − 1 de peso fresco para '228' após um período de digestão durante a noite ( Figura 2E ). Posteriormente, o GFP foi utilizado como gene repórter para avaliar a eficiência de transformação do método de transfecção mediado por PEG, demonstrando que a eficiência de transfecção de protoplastos em repolho foi superior a 40% em ambas as cultivares (Figura 2F), confirmando assim a viabilidade deste sistema.
Além disso, construções promotoras de genes de resposta respiratória anaeróbica de repolho, vetores BoADH1p::Luc e BoSUS1Lp::Luc (Figura 3A), foram introduzidas em protoplastos de repolho como repórteres para avaliar os efeitos de indução hipóxica de vários tratamentos. Vários tratamentos de ajuste de oxigênio também foram aplicados a este sistema modelo de expressão transitória. Os resultados mostraram que todos os tratamentos de sequestro de oxigênio, com exceção do sulfito de sódio, induziram com sucesso uma resposta de hipóxia em protoplastos de repolho (Figura 3B). Especificamente, a atividade promotora do BoADH1 aumentou aproximadamente 2,6 vezes e 3,2 vezes em comparação com o controle após o tratamento com EC-Oxirase e OxyFluor, respectivamente, e, notavelmente, em mais de 7,0 vezes com o tratamento com pacote absorvedor de oxigênio (Figura 3B). Da mesma forma, a atividade do promotor BoSUS1L aumentou cerca de 1,7 vezes e 1,8 vezes com o tratamento com EC-Oxirase e OxyFluor, respectivamente, enquanto o tratamento com pacote absorvedor de oxigênio induziu um aumento substancial de mais de 5,6 vezes ( Figura 3B ). Esses resultados sugerem que o pacote absorvedor de oxigênio demonstra eficácia superior na criação de um ambiente hipóxico neste sistema experimental de protoplastos de repolho.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67444/67444fig01.jpg"> 
Figura 1: Representação gráfica do fluxo de trabalho de isolamento de protoplastos. Esta figura ilustra o processo passo a passo envolvido no isolamento de protoplastos do tecido foliar do repolho. O fluxo de trabalho é representado visualmente para fornecer uma compreensão clara do procedimento. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67444/67444fig01large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67444/67444fig02v2.jpg"> 
Figura 2: Isolamento de protoplastos do tecido foliar do repolho. (A) A aparência das variedades comerciais de repolho 'Fuyudori' e '228' no estágio de crescimento recomendado é mostrada. As segundas folhas verdadeiras recém-expandidas (indicadas pela ponta da seta) de repolhos no estágio de 2 folhas são selecionadas para isolamento de protoplastos. Barra de escala: 2 cm. (B) Uma bomba de vácuo e um dessecador são empregados para o processo de infiltração a vácuo de tiras de folhas de repolho, com uma infiltração de 30 min realizada antes da digestão enzimática. (C) A condição das tiras de folhas de repolho durante a digestão enzimática é descrita. A digestão completa do tecido foliar requer um total de 4-16 h. Barra de escala: 3 cm. (D) As fotos demonstram o uso de um concentrador de oxigênio conectado a uma pedra de ar para aumentar a concentração de oxigênio dissolvido na solução W5. Barra de escala: 5 cm. (E) Mais de 4,00 x 106 protoplastos de mesofilo por grama de peso fresco (FW) foram obtidos das variedades de repolho 'Fuyudori' e '228' e foram observados ao microscópio. Barra de escala: 200 μm. (F) A eficiência de transfecção de protoplastos de ambos os genótipos de repolho, usando um repórter GFP expresso constitutivamente, mostra-se acima de 40%. Barra de escala: 200 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67444/67444fig02largev2.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67444/67444fig03.jpg"> 
Figura 3: Resposta à hipóxia de protoplastos de repolho em condições de deficiência de oxigênio. (A) As construções gênicas de resposta à hipóxia, promotores BoADH1 e BoSUS1L , são utilizadas como repórteres para avaliar a resposta à hipóxia em protoplastos de repolho 'Fuyudori'. (B) Um total de 5 μg de plasmídeos repórteres são transfectados em protoplastos de repolho 'Fuyudori', que são incubados em uma solução W5 borbulhada com oxigênio antes da exposição a tratamentos de hipóxia por 4 h. Os níveis de oxigênio são reduzidos durante a incubação pela adição de EC-oxirase (0,6 unidades · mL-1), OxyFluor (0,6 unidades · mL-1) e sulfito de sódio (1 g · mL-1) à solução W5. O tratamento do pacote absorvedor de oxigênio é realizado colocando duas bolsas absorvedoras de oxigênio em um frasco anaeróbico de 3,5 L. O grupo "CK" representa o grupo controle sem qualquer tratamento para hipóxia. Após o tratamento, os protoplastos são colhidos para um ensaio duplo de luciferase. Cada valor representa a média ± DP, com n = 4. Letras diferentes indicam diferenças significativas (P &lt; 0,05) com base em uma ANOVA de uma via com teste post-hoc de LSD. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67444/67444fig03large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
Tabela 1: Preparação da solução enzimática, solução W5 e solução MMG. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67444/Table%201.xlsx" target="_blank">Clique aqui para baixar esta tabela.</a>
Arquivo Suplementar 1: Detalhes do plasmídeo para transfecção de protoplasto. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67444/Plasmids.zip" target="_blank">Clique aqui para baixar este arquivo.</a>

Desenvolvimento de um sistema de protoplastos de repolho para estudo da tolerância à hipóxia em brássicas

As climate change brings more heavy rainfall, cabbage, a key Brassicaceae vegetable, faces significant yield losses due to flooding-induced hypoxia ...

development-cabbage-protoplast-system-for-studying-hypoxia-tolerance

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Este vídeo mostra um procedimento para isolar protoplastos intactos a partir de tecidos de 14 dias de idade, mudas de Arabidopsis. Dado que o protoplastos isolados permanecem intactos por pelo menos 96h e são isoladas de mudas, em vez de um mês de idade plantas maduras, esse procedimento agiliza ensaios exigindo protoplastos intactos.

Isolamento de Protoplastos de tecidos de 14 dias de idade, mudas de Arabidopsis thaliana</em

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Aqui nós descrevemos um novo método para estudar importação proteína em cloroplastos isolados sob estresse. O método é simples e rápida, e pode ser aplicado para estudar as consequências das diferentes condições de estresse para a importação de proteína do cloroplasto, e os mecanismos de regulação correspondentes.

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Apresenta-se aqui uma técnica simples para imagens em tempo real confocal de alta resolução de desenvolvimento de raiz e hipocótilo por até 3 dias utilizando objectivos de elevada abertura numérica e perfluorodecalina como meio de imersão.

Uma câmara simples para a imagem confocal a longo prazo do desenvolvimento da raiz e do hipocótilo

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Descrevemos uma abordagem para medir mudanças na eficiência fotossintética em plantas após tratamento com baixo CO2 usando fluorescência de clorofila.

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Combinando Microscopia de Limpeza e Fluorescência para Visualização de Mudanças na Expressão Gênica e Respostas Fisiológicas a Plasmodiophora brassicae

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Transformação e regeneração de raízes pilosas em Arabidopsis thaliana e Brassica napus

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Fenotipagem baseada em imagem de alto rendimento para determinar respostas morfológicas e fisiológicas a estresses únicos e combinados em batata

Aprenda a desenvolver um sistema de protoplastos de repolho para estudar respostas moleculares à hipóxia em Brassicaceae. Este método permite analisar genes responsivos à baixa oxigenação e melhorar a tolerância ao alagamento em cultivares de repolho.

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