Estabelecimento de modelos de ratos imitando terapias hormonais de afirmação de gênero

Nossa pesquisa desenvolveu modelos animais para replicar terapias hormonais de afirmação de gênero para indivíduos transgêneros usando testosterona para homens transgêneros e estrogênio com antiandrógeno para mulheres transgêneros. Estamos examinando se aqueles que se submetem a essas terapias são tão vulneráveis a produtos químicos ambientais quanto a população em geral e se há algum efeito colateral prolongado do tratamento hormonal. Este modelo é único em seu campo, uma vez que dados e ferramentas estão atualmente disponíveis para avaliar a suscetibilidade potencialmente diferente a produtos químicos de pessoas transgênero submetidas à terapia hormonal e seus efeitos colaterais.

Um achado significativo de nosso trabalho é o uso de CPS hepático específico para o sexo como um marcador para avaliar o sucesso das terapias hormonais. Essa abordagem, desenvolvida pela primeira vez em nosso estudo, fornece uma ferramenta valiosa para confirmar a precisão e a eficácia do modelo.

Nosso protocolo aborda a lacuna na compreensão dos efeitos a longo prazo das terapias hormonais. Também investiga se a exposição diária a alimentos e produtos químicos ambientais pode interagir ou alterar os efeitos dos tratamentos hormonais ao longo do tempo.

No futuro, exploraremos se o modelo é adequado para testes de longo prazo e investigaremos biomarcadores adicionais, como testes comportamentais estreitos, para avaliar melhor os efeitos da terapia.

[Instrutor] Comece beliscando e levantando a pele no local da injeção para administrar testosterona e estradiol mais acetato de ciproterona dissolvido em óleo de gergelim. Insira a agulha de uma seringa de um mililitro paralela ao dorso do animal. Assim que a agulha estiver dentro, injete lentamente 100 microlitros de testosterona ou 200 microlitros de estradiol mais acetato de ciproterona, dependendo do modelo. Após duas semanas de tratamento, coloque cada rato anestesiado em decúbito dorsal em uma almofada de aquecimento. Em seguida, prepare uma seringa de cinco mililitros com uma agulha de calibre 21, garantindo que o vácuo seja removido. Use os dedos para localizar o coração. Limpe suavemente a parede torácica e insira a agulha cuidadosamente na parede torácica lateral, perpendicular ao corpo, no ponto alinhado com os cotovelos flexionados, entre as costelas cinco e seis. Assim que a agulha atingir o ventrículo cardíaco, o sangue entrará na seringa por capilaridade. Retraia o pistão da seringa lenta e continuamente até que o sangue seja coletado. Após o sacrifício, coloque cada animal na mesa de dissecação em decúbito dorsal, com as patas dianteiras voltadas para cima e as traseiras voltadas para baixo. Fixe os membros com alfinetes e, em seguida, polvilhe a superfície ventral do animal com uma solução desinfetante para se preparar para a dissecação. Usando uma tesoura, corte ao longo da linha média do púbis até a parte superior do abdômen. Faça dois cortes laterais ao longo das superfícies mediais de cada membro posterior a partir da linha média da incisão abdominal ventral e exponha as vísceras abdominais. Em ratos machos, excisar os testículos localizados no saco escrotal intra-abdominal. Pressione o saco escrotal para garantir que os testículos se projetem e segure-os suavemente. Use um alicate para segurar a gordura visceral e, em seguida, corte cuidadosamente os testículos das vísceras. Pesar os testículos antes de os conservar em solução de Bois para análise histopatológica. Em ratos fêmeas, agarre o útero delicadamente. Identifique os ovários nas extremidades de ambos os chifres uterinos e corte-os do tecido adiposo visceral circundante. Pesar os ovários após a excisão. Em seguida, agarre o fígado com uma pinça, garantindo que ele não se quebre. Use um alicate para agarrar o processo xifóide e corte o diafragma completamente com uma tesoura. Use uma tesoura para separar o fígado do diafragma. Levante o processo xifóide com uma pinça e extraia o fígado da cavidade abdominal. Após a excisão, pese o fígado e armazene-o adequadamente. Usando uma tesoura, corte perpendicularmente ao longo do pescoço do animal. Remova a pele e a musculatura para expor a traqueia, onde a glândula tireoide está localizada. Apare suavemente as extremidades da traqueia para remover a glândula tireoide. Depois de remover o testículo, pegue o epidídimo, que está preso à margem posterior do testículo e está contido no escroto. Para coletar sêmen, limpe a cauda do epidídimo direito removendo a gordura e o tecido conjuntivo usando uma tesoura. Separe a cauda da parte restante e coloque-a em uma placa de Petri contendo um mililitro de DMEM. Corte a cauda com uma tesoura e use uma pipeta passada para fluir suavemente o conteúdo e facilitar a liberação. Agora, transfira o líquido coletado para um tubo de 15 mililitros e ajuste o volume para 10 mililitros com DMEM para obter um fator de diluição de um a 10. Pipetar o conteúdo para homogeneizar e criar uma suspensão. Depois de agitar suavemente, pegue 10 microlitros da suspensão para carregar a câmara de Neubauer.