Planimetria digital para avaliar a cinética de fechamento de feridas em um modelo de camundongo

Nossa pesquisa se concentra em padronizar a medição macroscópica de feridas usando uma configuração de imagem controlada, garantindo consistência e posição e distância de luz ou protocolos que visam minimizar a variabilidade e melhorar a moeda da medição de fechamento de feridas em modelos pré-clínicos. Abordamos a falta de padronização nas medições microscópicas de feridas. As metodologias atuais muitas vezes carecem de condições de controle, levando a dados inconsistentes.

Nosso protocolo oferece nossa configuração aplicável que garante iluminação uniforme, posicionamento e distância, reduzindo a probabilidade e aumentando a reprodutibilidade. Nosso protocolo elimina fontes comuns de viés de medição padronizando as condições de imagem. Ao contrário dos métodos manuais, garante consistência entre os experimentos, permitindo comparações precisas e reduzindo a variabilidade nas medições de área e perímetro das feridas.

Nosso resultado permite dados de medição de feridas mais precisos e reprodutíveis, fornecendo uma metodologia padronizada. Esta é a base para avaliar intervenções terapêuticas e pesquisas pré-clínicas de feridas. Para começar, fixe um perfil de alumínio com fenda na área interna da borda lateral do telhado.

Coloque duas placas retangulares de alumínio com centros de polietileno nas ranhuras dos perfis do telhado para permitir o deslizamento através de ambos os perfis. Monte uma luz tubular LED RGB de 20 centímetros em um ângulo de 45 graus na borda inferior do primeiro painel usando fita dupla face. Em seguida, monte um painel retangular de placa de espuma com um recorte circular central de 7,82 centímetros em cada painel do telhado para permitir a instalação da lente da câmera.

Para a construção do piso, primeiro corte quadrados com comprimentos laterais de 2,54 centímetros de cada canto da placa de espuma branca de 40 por 40 centímetros. Esta etapa garante que a placa de espuma se encaixe corretamente nos perfis da área do piso. Depois de aparar os cantos, coloque a placa de espuma em cima dos perfis da área do piso.

Prenda tiras de fixação de gancho e laço aos perfis de alumínio A e B para manipular facilmente os elementos internos da cabine de fotos. Um fixador adesivo fixo a um centímetro da borda de dois quadrados de papelão de espuma de um lado e posicione-os nas paredes frontal e traseira. Usando silicone, cole dois painéis nos lados C e D para formar as paredes laterais esquerda e direita.

Coloque uma máscara impressa em 3D a 11,5 centímetros da borda de um retângulo de placa de espuma branca pré-cortada de 40 por 28 centímetros para manter os ratos sob anestesia inalatória. Em seguida, cole-o no centro da base de referência. Fixe o bloco de régua impresso em 3D a um centímetro do lado esquerdo da base do mouse para acomodar o elemento de referência de medição para processamento de imagem digital.

Em seguida, conecte uma régua graduada de aço inoxidável de 15 centímetros ao bloco da régua e instale a base de referência completa dentro da cabine para dimensionamento de imagem. Depois de anestesiar o camundongo, use um punção de biópsia estéril de cinco milímetros para aplicar pressão com movimentos circulares para criar uma incisão dermoepidérmica no nível da omoplata. Remova a aba com uma pinça serrilhada e corte com uma tesoura de ponta de íris.

Usando uma pinça de joalheiro, coloque uma película dérmica circular de um centímetro de diâmetro sobre a ferida para evitar contaminação e contração. Para capturar imagens das feridas, posicione a base de referência no centro do piso da cabine de fotos. Em seguida, posicione o mouse anestesiado em decúbito ventral na plataforma do mouse.

Instale a parede frontal da cabine de fotos e capture imagens macroscópicas. Para abrir a imagem de backup criada no imagej, navegue até Arquivo, Abrir e Pesquisar. Em seguida, clique em Abrir.

Agora maximize a imagem, selecione a ferramenta de linha reta e, em seguida, usando a tecla de adição, amplie a régua ao lado do mouse. Desenhe uma linha reta de 10 milímetros na imagem da régua. Vá para analisar e definir a escala.

Insira 10 como a distância conhecida. Defina a unidade de comprimento para milímetros e clique em OK. Em seguida, use a ferramenta retângulo para selecionar a área ao redor da ferida com largura e altura de 150 e registre os valores X e Y.

Em seguida, clique com o botão direito do mouse no retângulo e selecione duplicar. Nomeie a imagem duplicada e pressione Enter. Na nova imagem, pressione mais duas vezes para aumentar o zoom.

Para separar a imagem em canais de cores, navegue até Imagem, Tipo e Pilha RGB. Na imagem do canal vermelho, clique com o botão direito do mouse na imagem, selecione duplicar e pressione OK na janela duplicada. Em seguida, clique na imagem do canal vermelho, selecione a imagem, ajuste e limite para segmentá-la.

Escolha Padrão e clique em Aplicar para aplicar o limite. Retifique a região de interesse ou ROI para garantir a cobertura completa da ferida e evitar distorções de segmentação. Para definir o perímetro da área de interesse, selecione Editar, vá para seleção e escolha Criar seleção.

Depois disso, selecione Editar, depois Seleção e clique em Adicionar ao gerente para adicioná-lo ao gerenciador de ROI. Para validar a segmentação, abra a janela do gerenciador de ROI e selecione o ROI a ser revisado. Clique em Mais, Traduzir, insira os valores X e Y registrados e pressione OK.

Maximize a imagem original e selecione o ROI no gerenciador de ROI. Use as setas do teclado para ajustar a ROI até que ela se alinhe com a ferida. Assim que a segmentação for confirmada, obtenha as medidas da ferida selecionando Analisar e medir.

A porcentagem de fechamento da ferida aumentou inicialmente para 138,04% no segundo dia devido a processos inflamatórios antes de diminuir e progredir para as fases de reparo e consolidação com fechamento consistente observado após o sétimo dia. A distância de retração da borda da ferida aumentou inicialmente durante a fase inflamatória, mas começou a diminuir após o terceiro dia, conforme mostrado pela Equação de Gilman, indicando contração gradual da ferida.