Name: Visualização intraoperatória de injeção sub-retiniana e descolamento de retina em ratos (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-03-07T13:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 16 s
Description: Aprenda a técnica de injeção sub-retiniana em ratos com visualização intraoperatória para pesquisa em descolamento de retina. Este protocolo reprodutível e seguro utiliza microscopia oftalmológica e tomografia de coerência óptica para validação.

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<ol><li>Guymer, R. H., Campbell, T. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-related+macular+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Age-related macular degeneration.</a> Lancet. 401 (10386), 1459-1472 (2023).</li>
<li>Hartong, D. T., Berson, E. L., Dryja, T. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinitis+pigmentosa%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Retinitis pigmentosa.</a> Lancet. 368 (9549), 1795-1809 (2006).</li>
<li>Cheung, N., Mitchell, P., Wong, T. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diabetic+retinopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Diabetic retinopathy.</a> Lancet. 376 (9735), 124-136 (2010).</li>
<li>Murakami, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photoreceptor+cell+death+and+rescue+in+retinal+detachment+and+degenerations%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Retin+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Photoreceptor cell death and rescue in retinal detachment and degenerations.</a> Prog Retin Eye Res. 37, 114-140 (2013).</li>
<li>Russell, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficacy+and+safety+of+voretigene+neparvovec+%28AAV2-hRPE65v2%29+in+patients+with+RPE65-mediated+inherited+retinal+dystrophy%3A+A+randomised%2C+controlled%2C+open-label%2C+phase+3+trial%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Efficacy and safety of voretigene neparvovec (AAV2-hRPE65v2) in patients with RPE65-mediated inherited retinal dystrophy: A randomised, controlled, open-label, phase 3 trial.</a> Lancet. 390, 849-860 (2017).</li>
<li>Gagliardi, G., Ben M'Barek, K., Goureau, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photoreceptor+cell+replacement+in+macular+degeneration+and+retinitis+pigmentosa%3A+A+pluripotent+stem+cell-based+approach%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Retin+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Photoreceptor cell replacement in macular degeneration and retinitis pigmentosa: A pluripotent stem cell-based approach.</a> Prog Retin Eye Res. 71, 1-25 (2019).</li>
<li>Zeng, R., Zhang, Y., Shi, F., Kong, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+experimental+mouse+model+of+retinal+detachment%3A+Complete+functional+and+histologic+recovery+of+the+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">A novel experimental mouse model of retinal detachment: Complete functional and histologic recovery of the retina.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 53, 1685-1695 (2012).</li>
<li>Matsumoto, H., Miller, J. W., Vavvas, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinal+detachment+model+in+rodents+by+subretinal+injection+of+sodium+hyaluronate%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Retinal detachment model in rodents by subretinal injection of sodium hyaluronate.</a> J Vis Exp. 79, e50660(2013).</li>
<li>Timmers, A. M., Zhang, H., Squitieri, A., Gonzalez-Pola, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subretinal+injections+in+rodent+eyes%3A+Effects+on+electrophysiology+and+histology+of+rat+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Vis%22%5BJournal%5D)">Subretinal injections in rodent eyes: Effects on electrophysiology and histology of rat retina.</a> Mol Vis. 7, 131-137 (2001).</li>
<li>Benner, J. D., Hay, A., Landers, M. B., Hjelmeland, L. M., Morse, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibrinolytic-assisted+removal+of+experimental+subretinal+hemorrhage+within+7+days+reduces+outer+retinal+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Fibrinolytic-assisted removal of experimental subretinal hemorrhage within 7 days reduces outer retinal degeneration.</a> Ophthalmology. 101, 672-681 (1994).</li>
<li>Secondi, R., Kong, J., Blonska, A. M., Staurenghi, G., Sparrow, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fundus+autofluorescence+findings+in+a+mouse+model+of+retinal+detachment%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Fundus autofluorescence findings in a mouse model of retinal detachment.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 53, 5190-5197 (2012).</li>
<li>Becker, S., Wang, H., Stoddard, G. J., Hartnett, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+subretinal+injection+on+retinal+structure+and+function+in+a+rat+oxygen-induced+retinopathy+model%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Vis%22%5BJournal%5D)">Effect of subretinal injection on retinal structure and function in a rat oxygen-induced retinopathy model.</a> Mol Vis. 23, 832-843 (2017).</li>
<li>Sene, A., Apte, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammation-induced+photoreceptor+cell+death%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Exp+Med+Biol%22%5BJournal%5D)">Inflammation-induced photoreceptor cell death.</a> Adv Exp Med Biol. 1074, 203-208 (2018).</li>
<li>Zhang, Z. Y., Sun, Y. J., Song, J. Y., Fan, B., Li, G. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+models+and+examination+methods+of+retinal+detachment%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res+Bull%22%5BJournal%5D)">Experimental models and examination methods of retinal detachment.</a> Brain Res Bull. 169, 51-62 (2021).</li>
<li>Machemer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+retinal+detachment+in+the+owl+monkey.+IV.+The+reattached+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Experimental retinal detachment in the owl monkey. IV. The reattached retina.</a> Am J Ophthalmol. 66, 1075-1091 (1968).</li>
<li>Dentel, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adaptive+optics+flood+illumination+ophthalmoscopy+in+nonhuman+primates%3A+Findings+in+normal+and+short-term+induced+detached+retinae%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmol+Sci%22%5BJournal%5D)">Adaptive optics flood illumination ophthalmoscopy in nonhuman primates: Findings in normal and short-term induced detached retinae.</a> Ophthalmol Sci. 3 (4), 100316(2023).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Atipemazol (Antidorm 4,27mg/mL)</td><td>Axience SAS, Pantin, França/</td><td></td><td>Despertar</td></tr><tr><td>Cloranfenicol-retinol (Ophtalon 10mg/g)</td><td>TVM, Lempdes, França</td><td>FR/V/3787889 6/1989</td><td>Cuidados pós-operatórios</td></tr><tr><td>Lamínulas Mini 8mm</td><td>World Precision Instruments, Sarasota, FL</td><td>/</td><td>https://www.wpiinc.com/var-1040-cover-slips-pkg-100.html?srsltid=AfmBOoraZfMhuUuY_7rQbM5YKfqM2VR1PT0L-UHQ5uQUdjaeZuogbKP1&utm_source=chatgpt.com</td></tr><tr><td>Hidroxipropilmetilcelulose</td><td>FCI S.A.S., Paris, França</td><td>/</td><td>Entrega sub-retiniana viscosa</td></tr><tr><td>Cetamina (Ketamidor 100 mg/mL)</td><td>Axience SAS, Pantin, França</td><td>/</td><td>Anestesia geral</td></tr><tr><td>Lumera 700</td><td>Carl Zeiss, Oberkochen, Alemanha</td><td>https://www.zeiss.com/meditec/en/products/surgical-microscopes/ophthalmic-microscopes/opmi-lumera-700.html?utm_source=chatgpt.com</td><td>Microscópio oftálmico</td></tr><tr><td>Medetomidina (Domitor 0,85 mg/mL)</td><td>Vetoquinol S.A., Paris, França</td><td>https://www.vetoquinol.com/en</td> Microinjetor <td>de anestesia geral</td></tr><tr><td>Micro 4</td><td>World Precision Instruments, Sarasota, FL</td><td>Injeção de SYS-MICRO4</td><td></td></tr><tr><td>Oxibuprocaína 1,6 mg/0,4 mL</td><td>Th&eacute; a, Clermont-Ferrand, França</td><td>https://www.laboratoires-thea.com/en/chlorhydrate-doxybuprocaine-thea?utm_source=chatgpt.com</td><td>Anestesia local</td></tr><tr><td>PBS</td><td>Life Technologies Europe B.V., Bleiswijk, Holanda</td><td>14190-094</td> Seringa <td>de administração sub-retiniana aquosa</td></tr><tr><td>(10 ou 20 &micro; L)</td> <td>Hamilton, Reno, NV</td><td>80300</td><td>Injeção</td></tr><tr><td>de gel lacrimal (Lubrithal)</td> <td>Dechron, Shrewsbury, Reino Unido</td><td>https://www.dechra.ca/our-products/ca/companion-animal/dog/non-prescription/lubrithal?utm_source=chatgpt.com</td><td>Proteção da córnea</td></tr><tr><td>Tropicamida (Mydriaticum 1 mg / mL)</td> <td>Th&eacute; a, Clermont-Ferrand, França/</td><td></td><td>Dilatação da pupila</td></tr></tbody></table>

visualização intraoperatória de injeção sub-retiniana e descolamento de retina em ratos

Intraoperative Visualization of Subretinal Injection and Retinal Detachment in Rats

O sucesso de uma injeção sub-retiniana depende da entrega precisa e exclusiva no espaço sub-retiniano (ou seja, entre os fotorreceptores e as camadas de EPR) através da retinotomia, evitando hemorragia sub-retiniana, pois o sangue é tóxico para os fotorreceptores e células de EPR. O parto bem-sucedido é confirmado por visualização intraoperatória (Figura 2L), retinografia pós-operatória imediata e tomografia de coerência óptica (OCT). A fotografia do fundo de olho descarta hemorragia sub-retiniana, enquanto os exames de OCT B confirmam o descolamento de retina (DR) com líquido sub-retiniano claro (Figura 1 e Figura 3). Além disso, a fotografia de fundo de olho pode identificar o toque da lente ou catarata induzida que pode passar despercebida durante o procedimento (Figura 3C, D). Tanto a fotografia quanto as varreduras de OCT podem estimar o tamanho da área destacada ou bolha (Figura 1B-E).
Vários fatores influenciam o tamanho da bolha: (1) Localização do local da injeção: Quanto mais distante o local da injeção estiver do disco óptico, menor será a área destacada; (2) Volume injetado: Um volume de injeção de 20-25 μL pode desprender aproximadamente metade da retina em ratos; (3) Qualidade do descolamento de retina: Em modelos de degeneração retiniana (por exemplo, P23H, RCS), o descolamento pode ser desafiador devido ao aumento da resistência entre fotorreceptores e células RPE causada por processos degenerativos, como gliose e acúmulo de material sub-retiniano. Nesses casos, os descolamentos de retina induzidos são tipicamente planos, e as OCT são cruciais para delinear claramente a área descolada.
Uma pequena hemorragia intravítrea pode ocorrer no local da injeção porque os microvasos da retina nem sempre podem ser completamente evitados (Figura 3E). No entanto, essas hemorragias geralmente não se estendem para o espaço sub-retiniano.
Em casos de descolamento insuficiente, o problema deve ser reconhecido no intraoperatório, necessitando de reinjeção imediata através da retinotomia pré-formada. Durante uma sessão experimental com 20 ratos, dois cirurgiões (um experiente e um iniciante) realizaram o método passo a passo. O cirurgião experiente obteve sucesso em 9 de 10 procedimentos, enquanto o iniciante obteve sucesso em 6 de 10.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67483/67483fig1.jpg"> 
Figura 1: Visão geral do processo e resultados. (A) Representação esquemática do processo de injeção sub-retiniana em um olho de rato, mostrando o volume significativo da lente. (B, C) Fotografia de fundo de olho imediatamente após a injeção (B) e 6 dias após a injeção (C). As pontas das setas indicam o local da injeção. A área de descolamento de retina é delineada por uma linha tracejada. (D, E) Tomografia de coerência óptica B-scan imediatamente após a injeção (D) e 6 dias após a injeção (E). ON: nervo óptico. Ampliação: 1x. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67483/67483fig1large.jpg" target="_blank">Por favor, clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67483/67483fig2.jpg"> 
Figura 2: Etapas do protocolo de injeção sub-retiniana. O protocolo é demonstrado em um rato Long Evans de 8 semanas de idade sob anestesia geral. Para uma descrição detalhada de cada etapa, consulte o vídeo ou a seção "Protocolo" no texto. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67483/67483fig2large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67483/67483fig3.jpg"> 
Figura 3: Exemplos de vários resultados de fotografia de fundo de olho pós-operatório. (A) Aparência pós-operatória normal com menor dispersão de pigmento no local da injeção (seta). (B) Aparência pós-operatória normal com uma pequena bolha de ar intravítrea no local da injeção. Essas pequenas bolhas de ar se originam da seringa e são inofensivas, mesmo no espaço sub-retiniano. (C, D) Toque da lente resultando em opacificação menor (C) ou significativa (D) da lente (catarata). (E, F) Sangramento intravítreo menor (E) ou mais extenso (F) localizado próximo ao local da injeção, sem disseminação para o espaço sub-retiniano. (G) Sangramento no local da injeção se espalhando predominantemente para o espaço sub-retiniano. Nesse caso, a retinotomia causou uma lesão de um vaso sanguíneo da retina. (H) Hemorragia intravítrea extensa resultante de penetração escleral. Ampliação: 1x. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67483/67483fig3large.jpg" target="_blank">Por favor, clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>

Visualização intraoperatória de injeção sub-retiniana e descolamento de retina em ratos

Subretinal injection, the delivery of a solution between the photoreceptors and the retinal pigment epithelium (RPE), creates a subretinal space where ...

intraoperative-visualization-subretinal-injection-retinal-detachment

Research

JoVE Journal

Medicine

Medicina

Fonte: Park, S. W., et al. Abordagem límbica-injeção sub-retiniana de vetores virais para terapia gênica no epitélio pigmentar da retina de camundongos. J. Vis. Exp. (2015)O vídeo descreve o método de injeção sub-retiniana de vetores virais no epitélio pigmentar da retina (EPR) em um modelo de camundongo. Ele detalha o procedimento desde a anestesia e preparação ocular até a entrega precisa do vetor lentiviral, garantindo a integração e expressão do gene no EPR.

Injeção sub-retiniana de vetores virais no epitélio pigmentar da retina em um modelo de camundongo

Criação de descolamento de retina experimentais com uma altura reprodutível e sustentada de desapego, e sem hemorragia sub-retiniana, é importante para o estudo da fisiopatologia da perda de células fotorreceptoras da retina na doença e avaliar intervenções terapêuticas potenciais. Relatamos tal método em detalhes.

Descolamento de Retina modelo em roedores por injeção sub-retiniana de hialuronato de sódio

Aqui apresentamos um protocolo aceito pela comunidade em formato multimídia para injeção sub-retina de um bolus de células RPE em ratos e camundongos. Essa abordagem pode ser usada para determinar potenciais de resgate, perfis de segurança e capacidades de sobrevivência de células RPE enxertadas após implantação em modelos animais de degeneração retiniana.

Realizando Subretinal Injeções em roedores para entregar epitélio pigmentar da retina células em suspensão

A injeção direta no nervo óptico do rato é útil para a pesquisa regenerativa. Demonstramos uma técnica minimamente invasiva para injeção direta em um nervo óptico de rato que não envolve a abertura do crânio. Usando este método, as complicações cirúrgicas são minimizadas e a recuperação é mais rápida.

Técnica minimamente invasiva para a injeção em Rat Optic Nerve

As injeções sub-retinianas são a técnica mais comum para administrar grandes agentes terapêuticos, como proteínas e vetores virais, aos fotorreceptores e ao epitélio pigmentar da retina. Um método alternativo em camundongos que atinge com sucesso o espaço sub-retiniano com danos colaterais mínimos e tempos de recuperação rápidos é descrito aqui.

Um método de injeção Alternativa e validado para acessar o espaço sub-retiniano<i&gt; via</i&gt; Uma abordagem transcleral Posterior

Subretinal injeção tem sido amplamente aplicada em estudos pré-clínicos de terapia de reposição de células-tronco para degeneration macular age-related. Neste artigo visualizado, descrevemos uma técnica de injeção subretinal menos arriscado, reproduzíveis e precisamente modificados através da abordagem trans-escleral para entregar as células nos olhos de rato.

Desenvolvimento de um protocolo refinado para Trans-escleral apresentam transplante de células epiteliais de pigmento Retinal humano nos olhos de rato

Aqui vamos demonstrar uma nova abordagem para usando a tomografia de coerência óptica espectral-domínio de alta resolução (HR-SD-OCT) para auxiliar entrega de agentes de terapia do gene para o espaço subretinal, avaliar sua cobertura areal e caracterizar vitalidade fotoreceptor.

Tomografia de coerência óptica Mouse ultra alta resolução para auxiliar a injeção intra-ocular em pesquisa de terapia de genes da retina

Células epiteliais de pigmento retinal podem servir como uma terapia de reposição celular para a forma avançada de degeneration macular age-related seco. Este protocolo descreve a geração de um modelo de grandes olhos de atrofia geográfica e o subretinal transplante de células epiteliais de pigmento retinal embrionárias humanas células-tronco derivadas para este modelo de doença.

Subretinal transplante de células epiteliais de pigmento retinal derivado de células-tronco embrionárias humanas em um modelo de grandes olhos de atrofia geográfica

Este protocolo descreve uma técnica única usando uma abordagem transconjuntival para acessar o nervo óptico de rato para injeções.

Abordagem transconjuntival para injeção no nervo óptico de rato

Este estudo apresenta uma metodologia para a administração de terapêutica na retina e nos nervos ópticos do rato adulto. Além disso, um método exclusivo de recuperação de tecido é introduzido para uma coleção em bloco de cima para baixo do nervo óptico e da retina em um rato adulto.

Entrega terapêutica ocular e recuperação avançada de tecidos em ratos adultos

Aprenda a técnica de injeção sub-retiniana em ratos com visualização intraoperatória para pesquisa em descolamento de retina. Este protocolo reprodutível e seguro utiliza microscopia oftalmológica e tomografia de coerência óptica para validação.

Visualização intraoperatória de injeção sub-retiniana e descolamento de retina em ratos

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