Detecção de Alcalóides Ergot Regulados em Matrizes de Alimentos por Cromatografia Líquida - Espectrometria de Mobilidade Iônica Aprisionada - Espectrometria de Massa por Tempo de Voo

O objetivo do nosso grupo é a proposta de uma nova metodologia analítica que possibilite um controle eficiente de contaminantes e resíduos em diferentes matrizes através da identificação única de compostos em cubículos. Tentamos resolver alguns desafios relacionados à segurança alimentar usando plataformas analíticas avançadas e tratamento sustentável de amostras. Pesquisas recentes de micotoxinas destacam avanços nos métodos de detecção como espectrometria maciça e biossensores.

Também explora o impacto na saúde e as estratégias para a redução da contaminação, com o objetivo de melhorar a segurança alimentar e desenvolver processos eficientes de desintoxicação nas práticas agrícolas. A espectrometria de massa é fundamental para detectar resíduos químicos e contaminantes, incluindo micotoxinas em alimentos. Avanços recentes na espectrometria de massa mudaram a pesquisa do método analítico alvo para o não-alvo, com a comercialização da mobilidade iônica, a espectrometria de massa de alta resolução contribuindo para essa tendência crescente.

Permite a quantificação analítica de cada alcalóide da cravagem regulada. A análise cromatográfica desses compostos pode levar a uma quantificação incorreta, especialmente se os picos não forem resolvidos o suficiente. Portanto, a implementação da espectrometria de mobilidade iônica fornece outra dimensão para quantificá-los com base em seus valores de mobilidade.

Nosso interesse em pesquisas futuras não é apenas continuar abordando o controle de contaminantes emergentes em alimentos, mas também focar no biomonitoramento expossômico e humano. É crucial entender a conexão entre exposição ambiental e saúde, medindo produtos químicos, toxinas e outros metabólitos em fluidos biológicos. Para começar, prepare dois frascos âmbar de 1,5 mililitro com 500 microlitros de solução intermediária e outro frasco com uma mistura de solventes como solução de lavagem.

Enquanto condiciona a coluna de cromatografia líquida, escreva a lista de trabalho, incluindo as duas soluções. Na coluna de arquivo de método da lista de trabalho, carregue o arquivo de método de aquisição, salvo com os parâmetros necessários. Crie uma pasta para salvar todos os arquivos de dados adquiridos.

Encaminhe todas as amostras para a pasta selecionada na coluna do caminho da amostra. Vá para a barra de ferramentas superior do software e execute a lista de trabalho. Uma vez executada a lista de trabalho, abra o software qualitativo.

Para carregar todas as amostras analisadas, selecione o arquivo, seguido de abrir lista de trabalhos. Clique com o botão direito do mouse em uma amostra correspondente à solução EA. Vá para editar cromatograma e selecione o tipo, seguido pelo cromatograma de íons extraído.

Insira a massa molecular teórica do íon protonado para cada EA, clique em adicionar e em OK. Aparecerão seis cromatogramas de íons extraídos, correspondendo a seis EAs e seus epímeros. Em cada cromatograma de íons extraído, aparecerão dois picos correspondentes ao EA principal e seu epímero. Clique com o botão direito enquanto seleciona toda a área de um pico e o espectro de mobilidade iônica aparecerá.

Vá para o eixo x do espectro de mobilidade iônica, clique com o botão direito e clique na seção transversal de colisão. Se o valor CCS não aparecer, clique com o botão direito do mouse no espectro de mobilidade e selecione copiar para o mobilograma, clique com o botão direito do mouse novamente no espectro de mobilidade e selecione o estado de carga atribuído. Introduza a massa exata e a carga do íon.

Em seguida, com base em dados de fragmentação da literatura e bancos de dados, compare e selecione o íon de produto mais intenso como um ponto de identificação complementar. Observe o tempo de retenção, o valor CCS e a massa exata do aduto de íons principal para cada EA para criar um método de quantificação. Em seguida, abra o software de processamento de dados e clique na guia de gerenciamento de métodos e, em seguida, clique nas configurações do analito.

Insira o nome de cada EA junto com seu tempo de retenção, valor CCS e a massa dos adutos protonados. Ajuste a tolerância para cada ponto de identificação conforme necessário ao usar as configurações padrão. Para começar, condicione a coluna de cromatografia líquida e configure os parâmetros de aquisição.

Pesar um grama de amostra em um tubo de centrífuga de 50 mililitros. Adicione quatro mililitros da solução de extração e vortex a amostra por um minuto. Centrifugue a amostra durante cinco minutos a 9.750 G e a quatro graus Celsius.

Transferir todo o sobrenadante para um tubo de centrifugação de 15 mililitros contendo 150 miligramas de mistura adsorvente e vortex da amostra durante um minuto. Depois de centrifugar a amostra, recolher o sobrenadante e transferi-lo para um frasco de vidro âmbar de quatro mililitros. Evaporar o extracto sob uma corrente suave de azoto e, em seguida, reconstituir a amostra em 750 microlitros de mistura de metanol e água.

Usando uma seringa de dois mililitros, filtre a amostra através de um filtro de náilon de 0,22 micrômetro em um frasco cromatográfico âmbar de 1,5 mililitro. Para começar, prepare o alcalóide da cravagem, ou amostras de EA, e obtenha a curva de calibração compatível com a matriz usando cromatografia líquida. Abra o software quantitativo e navegue até a guia rápida da tarefa.

Clique em importar lote. Depois que o lote for importado, clique em processar lote abaixo de importar lote. Após a conclusão do processamento dos dados, vá para revisar a triagem e verifique se há problemas relacionados à integração automática, como picos cromatográficos incorretos muito próximos uns dos outros.

Em caso afirmativo, restrinja ou amplie os valores referentes à tolerância do tempo de retenção, tolerância do valor CCS e/ou erro de massa inicialmente estabelecido no arquivo de método quantitativo e reprocesse os dados. Se a integração automática de pico ainda selecionar picos incorretos, selecione manualmente a área no cromatograma que aparece na janela de triagem de revisão. Na guia gerenciamento de lotes, navegue até a janela de concentração de lotes e especifique um valor de concentração para cada nível estabelecido anteriormente.

Uma vez feito isso, clique em salvar concentrações. Clique em quantificar lote e ajuste os parâmetros, como o modelo, para ajustar os dados de calibração, aguardando e forçando o modelo a cruzar zero. Quando a quantificação dos alcalóides da cravagem estiver concluída, clique na guia de quantificação, clique com o botão direito do mouse na pasta do lote na extrema esquerda e selecione gerar relatório.

Por fim, escolha a quantificação do analito e exporte o relatório no formato desejado. A separação cromatográfica revelou picos claros para cada par de epímeros de EA, exceto ergotamina e ergotamina, que apresentaram ligeira sobreposição devido aos seus tempos de retenção próximos. A espectrometria de mobilidade iônica permitiu a separação basal de ergotamina e ergotamina, fornecendo valores de CCS distinguíveis.

A supressão de sinal ou análise do efeito de aprimoramento mostrou interferência mínima da matriz com uma faixa de menos 32% a 18%, permitindo uma quantificação precisa usando a curva de calibração padrão, exceto para ergametranina que exigia da curva de calibração combinada com a matriz. A precisão do método foi confirmada pelas taxas de recuperação para todos os analitos entre 72 e 117%, exceto para a ergotamina, que apresentou valores de recuperação de 43 a 45% Os valores limite de quantificação variaram de 0,65 a 2,6 nanogramas por mililitro, confirmando a sensibilidade do método.