Name: Modelagem do consumo de álcool em roedores usando o consumo de álcool em gaiola doméstica de escolha de duas garrafas e análise microestrutural (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-11-08T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 45 s
Description: Aprenda a modelar o consumo voluntário de álcool em ratos usando o paradigma de escolha entre duas garrafas com sistema de detecção de lambidas. Este método permite análise microestrutural detalhada do comportamento de ingestão.

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Os autores agradecem a Joseph Pitock e Katie Przybysz, PhD, pela assistência técnica durante o desenvolvimento do LIQ HDR. Também agradecemos a Nicholas Petersen e Marie Doyle, PhD, por muitas conversas úteis durante o desenvolvimento do LIQ HDR. Este trabalho foi apoiado pelo Instituto Nacional de Abuso de Álcool e Alcoolismo dos Institutos Nacionais de Saúde (P50 AA022538 e R01 AA029130 ao EJG).

Intermittent-Access Two-Bottle Choice Drinking with Lick Detection in Rats

<ol><li>GBD 2016 Alcohol Collaborators. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alcohol+use+and+burden+for+195+countries+and+territories%2C+1990-2016%3A+a+systematic+analysis+for+the+Global+Burden+of+Disease+Study+2016%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Alcohol use and burden for 195 countries and territories, 1990-2016: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2016.</a> Lancet. 392 (10152), 1015-1035 (2018).</li>
<li>Fillmore, K. M., Stockwell, T., Chikritzhs, T., Bostrom, A., Kerr, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Moderate+alcohol+use+and+reduced+mortality+risk%3A+systematic+error+in+prospective+studies+and+new+hypotheses%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+Epidemiol%22%5BJournal%5D)">Moderate alcohol use and reduced mortality risk: systematic error in prospective studies and new hypotheses.</a> Annals Epidemiol. 17 (5 Suppl), S16-S23 (2007).</li>
<li>GBD 2020 Alcohol Collaborators. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Population-level+risks+of+alcohol+consumption+by+amount%2C+geography%2C+age%2C+sex%2C+and+year%3A+a+systematic+analysis+for+the+Global+Burden+of+Disease+Study+2020%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Population-level risks of alcohol consumption by amount, geography, age, sex, and year: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2020.</a> Lancet. 400 (10347), 185-235 (2020).</li>
<li>Esser, M. B., Sherk, A., Liu, Y., Naimi, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deaths+from+excessive+alcohol+use+-+United+States%2C+2016-2021%5BTitle%5D)+AND+%22Morbidity+Mortality+Weekly+Rep%22%5BJournal%5D)">Deaths from excessive alcohol use - United States, 2016-2021.</a> Morbidity Mortality Weekly Rep. 73, 154-161 (2024).</li>
<li>Melendez, R. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intermittent+%28every-other-day%29+drinking+induces+rapid+escalation+of+ethanol+intake+and+preference+in+adolescent+and+adult+C57BL%2F6J+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Alcohol+Clin+Exp+Res%22%5BJournal%5D)">Intermittent (every-other-day) drinking induces rapid escalation of ethanol intake and preference in adolescent and adult C57BL/6J mice.</a> Alcohol Clin Exp Res. 35 (4), 652-658 (2011).</li>
<li>Wise, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Voluntary+ethanol+intake+in+rats+following+exposure+to+ethanol+on+various+schedules%5BTitle%5D)+AND+%22Psychopharmacologia%22%5BJournal%5D)">Voluntary ethanol intake in rats following exposure to ethanol on various schedules.</a> Psychopharmacologia. 29 (3), 203-210 (1973).</li>
<li>Simms, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intermittent+access+to+20%25+ethanol+induces+high+ethanol+consumption+in+Long-Evans+and+Wistar+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Alcohol+Clin+Exp+Res%22%5BJournal%5D)">Intermittent access to 20% ethanol induces high ethanol consumption in Long-Evans and Wistar rats.</a> Alcohol Clin Exp Res. 32 (10), 1816-1823 (2008).</li>
<li>Carnicella, S., Ron, D., Barak, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intermittent+ethanol+access+schedule+in+rats+as+a+preclinical+model+of+alcohol+abuse%5BTitle%5D)+AND+%22Alcohol%22%5BJournal%5D)">Intermittent ethanol access schedule in rats as a preclinical model of alcohol abuse.</a> Alcohol. 48 (3), 243-252 (2014).</li>
<li>Loi, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increase+in+alcohol+intake%2C+reduced+flexibility+of+alcohol+drinking%2C+and+evidence+of+signs+of+alcohol+intoxication+in+Sardinian+alcohol-preferring+rats+exposed+to+intermittent+access+to+20%25+alcohol%5BTitle%5D)+AND+%22Alcohol+Clin+Exp+Res%22%5BJournal%5D)">Increase in alcohol intake, reduced flexibility of alcohol drinking, and evidence of signs of alcohol intoxication in Sardinian alcohol-preferring rats exposed to intermittent access to 20% alcohol.</a> Alcohol Clin Exp Res. 34 (12), 2147-2154 (2010).</li>
<li>Rhodes, J. S., Best, K., Belknap, J. K., Finn, D. A., Crabbe, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+a+simple+model+of+ethanol+drinking+to+intoxication+in+C57BL%2F6J+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Behavior%22%5BJournal%5D)">Evaluation of a simple model of ethanol drinking to intoxication in C57BL/6J mice.</a> Physiol Behavior. 84 (1), 53-63 (2005).</li>
<li>Thiele, T. E., Navarro, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%26%2334%3BDrinking+in+the+dark%26%2334%3B+%28DID%29+procedures%3A+a+model+of+binge-like+ethanol+drinking+in+non-dependent+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Alcohol%22%5BJournal%5D)">&#34;Drinking in the dark&#34; (DID) procedures: a model of binge-like ethanol drinking in non-dependent mice.</a> Alcohol. 48 (3), 235-241 (2014).</li>
<li>Rimondini, R., Sommer, W., Heilig, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+temporal+threshold+for+induction+of+persistent+alcohol+preference%3A+behavioral+evidence+in+a+rat+model+of+intermittent+intoxication%5BTitle%5D)+AND+%22J+Studies+Alcohol%22%5BJournal%5D)">A temporal threshold for induction of persistent alcohol preference: behavioral evidence in a rat model of intermittent intoxication.</a> J Studies Alcohol. 64 (4), 445-449 (2003).</li>
<li>Sommer, W. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Upregulation+of+voluntary+alcohol+intake%2C+behavioral+sensitivity+to+stress%2C+and+amygdala+crhr1+expression+following+a+history+of+dependence%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Upregulation of voluntary alcohol intake, behavioral sensitivity to stress, and amygdala crhr1 expression following a history of dependence.</a> Biol Psychiatry. 63 (2), 139-145 (2008).</li>
<li>Nentwig, T. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+lateral+habenula+is+not+required+for+ethanol+dependence-induced+escalation+of+drinking%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropsychopharmacol%22%5BJournal%5D)">The lateral habenula is not required for ethanol dependence-induced escalation of drinking.</a> Neuropsychopharmacol. 47 (12), 2123-2131 (2022).</li>
<li>Becker, H. C., Lopez, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+ethanol+drinking+after+repeated+chronic+ethanol+exposure+and+withdrawal+experience+in+C57BL%2F6+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Alcohol+Clin+Exp+Res%22%5BJournal%5D)">Increased ethanol drinking after repeated chronic ethanol exposure and withdrawal experience in C57BL/6 mice.</a> Alcohol Clin Exp Res. 28 (12), 1829-1838 (2004).</li>
<li>Lopez, M. F., Becker, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+pattern+and+number+of+chronic+ethanol+exposures+on+subsequent+voluntary+ethanol+intake+in+C57BL%2F6J+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Psychopharmacology%22%5BJournal%5D)">Effect of pattern and number of chronic ethanol exposures on subsequent voluntary ethanol intake in C57BL/6J mice.</a> Psychopharmacology. 181 (4), 688-696 (2005).</li>
<li>Griffin, W. C., Lopez, M. F., Becker, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intensity+and+duration+of+chronic+ethanol+exposure+is+critical+for+subsequent+escalation+of+voluntary+ethanol+drinking+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Alcohol+Clin+Exp+Res%22%5BJournal%5D)">Intensity and duration of chronic ethanol exposure is critical for subsequent escalation of voluntary ethanol drinking in mice.</a> Alcohol Clin Exp Res. 33 (11), 1893-1900 (2009).</li>
<li>Hwa, L. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Persistent+escalation+of+alcohol+drinking+in+C57BL%2F6J+mice+with+intermittent+access+to+20%25+ethanol%5BTitle%5D)+AND+%22Alcohol+Clin+Exp+Res%22%5BJournal%5D)">Persistent escalation of alcohol drinking in C57BL/6J mice with intermittent access to 20% ethanol.</a> Alcohol Clin Exp Res. 35 (11), 1938-1947 (2011).</li>
<li>Vierkant, V., Xie, X., Wang, X., Wang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+models+of+alcohol+use+disorder+and+their+application+for+pathophysiological+investigations%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Prot%22%5BJournal%5D)">Experimental models of alcohol use disorder and their application for pathophysiological investigations.</a> Curr Prot. 3 (6), e831(2023).</li>
<li>Greenfield, T. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Risks+of+alcohol+use+disorders+related+to+drinking+patterns+in+the+U.S.+general+population%5BTitle%5D)+AND+%22J+Studies+Alcohol+Drugs%22%5BJournal%5D)">Risks of alcohol use disorders related to drinking patterns in the U.S. general population.</a> J Studies Alcohol Drugs. 75 (2), 319-327 (2014).</li>
<li>Rehm, J., Greenfield, T. K., Rogers, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Average+volume+of+alcohol+consumption%2C+patterns+of+drinking%2C+and+all-cause+mortality%3A+results+from+the+US+National+Alcohol+Survey%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Epidemiol%22%5BJournal%5D)">Average volume of alcohol consumption, patterns of drinking, and all-cause mortality: results from the US National Alcohol Survey.</a> Am J Epidemiol. 153 (1), 64-71 (2001).</li>
<li>Grant, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drinking+typography+established+by+scheduled+induction+predicts+chronic+heavy+drinking+in+a+monkey+model+of+ethanol+self-administration%5BTitle%5D)+AND+%22Alcohol+Clin+Exp+Res%22%5BJournal%5D)">Drinking typography established by scheduled induction predicts chronic heavy drinking in a monkey model of ethanol self-administration.</a> Alcohol Clin Exp Res. 32 (10), 1824-1838 (2008).</li>
<li>Nathan, P. E., O'Brien, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+experimental+analysis+of+the+behavior+of+alcoholics+and+nonalcoholics+during+prolonged+experimental+drinking%3A+A+necessary+precursor+of+behavior+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Behav+Ther%22%5BJournal%5D)">An experimental analysis of the behavior of alcoholics and nonalcoholics during prolonged experimental drinking: A necessary precursor of behavior therapy.</a> Behav Ther. 2 (4), 455-476 (1971).</li>
<li>Godynyuk, E., Bluitt, M. N., Tooley, J. R., Kravitz, A. V., Creed, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+open-source%2C+automated+home-cage+sipper+device+for+monitoring+liquid+ingestive+behavior+in+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22eNeuro%22%5BJournal%5D)">An open-source, automated home-cage sipper device for monitoring liquid ingestive behavior in rodents.</a> eNeuro. 6 (5), (2019).</li>
<li>Frie, J. A., Khokhar, J. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+open+source+automated+two-bottle+choice+test+apparatus+for+rats%5BTitle%5D)+AND+%22HardwareX%22%5BJournal%5D)">An open source automated two-bottle choice test apparatus for rats.</a> HardwareX. 5, e00061(2019).</li>
<li>Melo, M. C., Alves, P. E., Cecyn, M. N., Eduardo, P. M. C., Abrahao, K. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+eight+wireless+automated+cages+system+with+two+lick-o-meters+each+for+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22eNeuro%22%5BJournal%5D)">Development of eight wireless automated cages system with two lick-o-meters each for rodents.</a> eNeuro. 9 (4), (2022).</li>
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<li>Frie, J. A., Khokhar, J. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FARESHARE%3A+An+open-source+apparatus+for+assessing+drinking+microstructure+in+socially+housed+rats%5BTitle%5D)+AND+%22NPP-Digit+Psychiatry+Neurosci%22%5BJournal%5D)">FARESHARE: An open-source apparatus for assessing drinking microstructure in socially housed rats.</a> NPP-Digit Psychiatry Neurosci. 2 (1), 1-7 (2024).</li>
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<li>Nentwig, T. B., Margaret Starr, E., Judson Chandler, L., Glover, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Absence+of+compulsive+drinking+phenotype+in+adult+male+rats+exposed+to+ethanol+in+a+binge-like+pattern+during+adolescence%5BTitle%5D)+AND+%22Alcohol%22%5BJournal%5D)">Absence of compulsive drinking phenotype in adult male rats exposed to ethanol in a binge-like pattern during adolescence.</a> Alcohol. 79, 93-103 (2019).</li>
<li>Patwell, R., Yang, H., Pandey, S. C., Glover, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+operant+ethanol+self-administration+paradigm+that+discriminates+between+appetitive+and+consummatory+behaviors+reveals+distinct+behavioral+phenotypes+in+commonly+used+rat+strains%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropharmacology%22%5BJournal%5D)">An operant ethanol self-administration paradigm that discriminates between appetitive and consummatory behaviors reveals distinct behavioral phenotypes in commonly used rat strains.</a> Neuropharmacology. 201, 108836(2021).</li>
<li>Bito-Onon, J. J., Simms, J. A., Chatterjee, S., Holgate, J., Bartlett, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Varenicline%2C+a+partial+agonist+at+neuronal+nicotinic+acetylcholine+receptors%2C+reduces+nicotine-induced+increases+in+20%25+ethanol+operant+self-administration+in+Sprague-Dawley+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Addict+Biol%22%5BJournal%5D)">Varenicline, a partial agonist at neuronal nicotinic acetylcholine receptors, reduces nicotine-induced increases in 20% ethanol operant self-administration in Sprague-Dawley rats.</a> Addict Biol. 16 (3), 440-449 (2011).</li>
<li>Mill, D. J., Bito-Onon, J. J., Simms, J. A., Li, R., Bartlett, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fischer+rats+consume+20%25+ethanol+in+a+long-term+intermittent-access+two-bottle-choice+paradigm%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Fischer rats consume 20% ethanol in a long-term intermittent-access two-bottle-choice paradigm.</a> PloS One. 8 (11), e79824(2013).</li>
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<li>Moore, C. F., Lynch, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alcohol+preferring+%28P%29+rats+as+a+model+for+examining+sex+differences+in+alcohol+use+disorder+and+its+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacol+Biochem+Behav%22%5BJournal%5D)">Alcohol preferring (P) rats as a model for examining sex differences in alcohol use disorder and its treatment.</a> Pharmacol Biochem Behav. 132, 1-9 (2015).</li>
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<li>Moolten, M., Kornetsky, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oral+self-administration+of+ethanol+and+not+experimenter-administered+ethanol+facilitates+rewarding+electrical+brain+stimulation%5BTitle%5D)+AND+%22Alcohol%22%5BJournal%5D)">Oral self-administration of ethanol and not experimenter-administered ethanol facilitates rewarding electrical brain stimulation.</a> Alcohol. 7 (3), 221-225 (1990).</li>
</ol>

Todos os autores declaram não haver conflitos de interesse.

O protocolo atual fornece instruções passo a passo para capturar dados de consumo de etanol usando um procedimento de gaiola doméstica de acesso intermitente de duas garrafas. Este método pode ser implementado com relativa facilidade e com pouco ou nenhum custo ou necessidade de equipamentos de pesquisa especializados. Usando os procedimentos fornecidos aqui para construir e implementar o LIQ HDR - um sistema de detecção de lambedura para uso em ratos - os pesquisadores podem capturar dados de microestrutura de consumo de alta resolução, além de medidas padrão de ingestão e preferência.
O esquema de acesso intermitente descrito no protocolo atual é um procedimento amplamente utilizado em grande parte porque é bem conhecido por gerar níveis mais altos de ingestão de etanol do que muitos esquemas alternativos de acesso ao etanol. De fato, pesquisas anteriores mostraram que ratos com acesso em um horário intermitente têm maior ingestão média diária de etanol do que ratos com acesso contínuo de 24 horas 6,7. No entanto, diferentes esquemas de acesso ao etanol podem ser desejáveis, dependendo da questão de pesquisa ou de outros parâmetros de projeto experimental. Os pesquisadores podem modificar facilmente o protocolo atual para acomodar diferentes horários (por exemplo, acesso contínuo, beber no escuro, etc.) simplesmente alterando o horário e os dias de ligar/desligar a garrafa.
Embora o consumo de duas garrafas seja um paradigma relativamente simples de implementar, podem surgir problemas que têm o potencial de comprometer a coleta de dados. É, portanto, crucial que os experimentadores inspecionem os dados diariamente para identificar rapidamente possíveis problemas. Em particular, os pesquisadores devem prestar muita atenção a mudanças muito grandes ou muito pequenas no peso das garrafas que podem ser indicativas de um gole com vazamento ou entupido, respectivamente. Detectar sinais desses problemas precocemente pode impedir a exclusão de todos os dados de um determinado assunto da análise. De fato, se os pesquisadores notarem mudanças drásticas (ou ausência de mudança) no peso da garrafa em um período de 24 horas, uma simples mudança para uma nova garrafa pode ajudar a confirmar se uma determinada garrafa deve ser retirada de circulação. Por esses motivos, é aconselhável ter garrafas e goles extras à mão. No entanto, deve-se notar que alguns ratos exibem naturalmente níveis muito baixos de consumo de etanol, por exemplo,35. Isso é particularmente verdadeiro para ratos de certas cepas, consulte8 para revisão. Assim, os pesquisadores não devem se alarmar se uma pequena população de animais em um determinado experimento tiver baixo ou nenhum consumo de etanol. Da mesma forma, alguns animais são propensos a brincar com o bebedor/garrafa de maneiras que podem promover derramamento. Embora raros, casos repetidos de altas mudanças no peso da garrafa que não estão associados ao consumo podem exigir que um determinado animal seja removido do experimento.
Nosso protocolo passo a passo detalhado demonstra a facilidade de implementação e uso do sistema LIQ HDR para ratos. Pesquisadores sem conhecimento prévio ou habilidades em eletrônica e programação de microcontroladores podem adaptar prontamente este sistema às suas necessidades experimentais com pouca ou nenhuma modificação. Nossos dados representativos demonstram ainda mais sua aplicação bem-sucedida para estudos de consumo de álcool em gaiolas domésticas de ratos e sua poderosa capacidade de capturar inúmeras medidas de microestrutura de consumo em alta resolução temporal. O LIQ HDR inclui várias modificações de design em relação ao seu antecessor de mouse30. Isso foi feito não apenas como uma necessidade para uma adaptação bem-sucedida para uso em ratos, mas também para melhorar a funcionalidade e a experiência do usuário. Os componentes da gaiola, incluindo o porta-garrafas impresso em 3D, o bloqueador de sipper e os componentes eletrônicos, são realocados para a parte superior da gaiola para proteger contra a mastigação, o que pode resultar em perda frequente e significativa de dados e rotatividade de hardware. A adição de um painel de acrílico cortado a laser ajuda ainda mais a evitar a destruição desses componentes vulneráveis. Além do painel de acrílico, que é o mesmo material de uma gaiola de rato de caixa de sapatos padrão, todos os outros componentes LIQ HDR são inacessíveis ao animal de dentro da gaiola ou acessíveis apenas por um breve momento durante a troca da garrafa. Este projeto limita o potencial de destruição dos componentes do dispositivo e o risco para o animal por meio da ingestão de itens não alimentares. Em contraste com as garrafas personalizadas relativamente trabalhosas usadas no design LIQ HD, o porta-garrafas impresso em 3D da LIQ HDR foi projetado para ser compatível com garrafas comerciais de roedores prontas para uso. As mamadeiras são instaladas no topo da gaiola e acessíveis aos ratos da mesma forma que as mamadeiras são aplicadas durante o tratamento padrão e a criação. A adição de bloqueadores sipper é uma solução simples, mas eficaz, que melhora a confiabilidade do sistema e evita a perda de dados valiosos que, na ausência do bloqueador, pode resultar do consumo que ocorre antes de iniciar a captura de dados na interface do Arduino ou medidas errôneas de lambida que ocorrem quando os ratos interagem com os sipers durante a calibração diária. Embora as gaiolas de rato consideravelmente maiores exijam a ampliação do tamanho do design de hardware original, o uso de cabos significativamente mais longos pode afetar negativamente a sensibilidade e a precisão da detecção capacitiva devido à interferência, bem como a integridade da comunicação I2C entre as placas de sensor encadeadas e a interface Arduino. Contornamos esse problema com a adoção do sistema de comunicação diferencial I2C para obter transmissão de sinal de alcance ultralongo e quase sem perdas por meio de cabos Ethernet. Os materiais usados para os componentes da gaiola permitem fácil limpeza e desinfecção entre os usos. O lickômetro pode ser esterilizado e limpo com solução de EtOH a 70%, enquanto deve-se tomar cuidado para garantir que os componentes elétricos, como a fita de cobre condutora, permaneçam intactos. Equipamentos não elétricos que estão em contato direto com o animal, como o bloqueador de sorvete e o painel de acrílico, podem ser bem lavados com água morna e sabão.
A confiabilidade e a eficácia de qualquer sistema de detecção de lambedura requerem construção e instalação adequadas, bem como testes extensivos, monitoramento diligente de erros e solução de problemas eficaz. Todos os componentes DIY precisam ser feitos e montados com habilidade e cuidado. Isso é especialmente importante para etapas que envolvem soldagem, que podem exigir prática para iniciantes. Independentemente disso, testes extensivos de todos os licômetros são necessários antes do uso em experimentos reais. Se o sistema precisar ser modificado para se adaptar às necessidades experimentais individuais, as configurações do sensor (por exemplo, limites de toque e liberação) podem precisar ser ajustadas para uma detecção precisa de lambidas. Para usuários iniciantes, sugerimos testar o sistema em um estudo piloto breve e de pequena amostra usando uma solução altamente palatável que gerará altos níveis de consumo de álcool. A detecção de lambida pode ser verificada em tempo real inspecionando visualmente a placa do sensor, pois o LED pisca sempre que uma lambida é registrada. Correlações fortes, significativas e consistentes entre o número de lambeduras e a mudança no peso da garrafa devem ser usadas como referência para a configuração adequada de hardware e software. Mesmo após a finalização da configuração, recomendamos iniciar a gravação de um determinado experimento em um dia em que os ratos recebem duas garrafas contendo água para solucionar problemas de equipamento que podem ser evidentes no início de um experimento. Também pode ser vantajoso testar a função do lickômetro no dia da água associada à troca da gaiola, pois isso requer que os lickômetros sejam desconectados e reconectados ao sensor. A falha aleatória do lickômetro ou sensor individual, que resultaria em dados discrepantes muito óbvios (por exemplo, nenhuma ou poucas lambidas detectadas apesar de uma mudança substancial no peso da garrafa) consistentemente para o mesmo licômetro, é indicativa de componente(s) defeituoso(s). Recomendamos preparar componentes extras para cada elemento do sistema de licômetro com antecedência para permitir uma fácil substituição conforme necessário. Finalmente, a importância de garantir que os cabos do sensor não se sobreponham ou dobrem excessivamente não pode ser subestimada. Isso pode resultar em casos aleatórios de detecção de lambida ruim, evidente por um número de lambida excessivamente baixo para uma determinada mudança no peso da garrafa ou durações de lambida extremamente grandes (perto de 60.000 ms para uma caixa de 1 minuto) abrangendo minutos ou horas. No entanto, pequenas perdas de dados são inevitáveis em estudos que coletam dados em 24 horas para muitos animais ao longo de muitos dias usando a abordagem padrão ou equipada com licômetro. Os pesquisadores podem excluir dados errôneos para as raras sessões de consumo quando os pesos das garrafas e / ou lambidas claramente não refletem a ingestão (por exemplo, entupimento do bebedor, erro de calibração, etc.). Em ocasiões como essas, o valor médio de uma determinada medida (por exemplo, ingestão (g/kg), lambidas, etc.) durante o período de estudo para esse assunto específico pode ser substituído pelo valor ausente durante a análise dos dados. A ANOVA de efeitos mistos também pode ser usada como uma alternativa para acomodar pontos de dados ausentes.
Uma das vantagens do paradigma de beber com duas garrafas é o aspecto voluntário da ingestão de etanol. Isso proporciona excelente validade de face, particularmente à luz dos achados que mostram que o álcool administrado pelo experimentador pode produzir efeitos significativamente diferentes na função cerebral e no comportamento em comparação com o álcool autoadministrado voluntariamente42. Além disso, a natureza voluntária do paradigma permite que os pesquisadores capturem diferenças individuais na ingestão semelhantes à variabilidade na preferência pelo álcool e nos padrões de consumo observados em humanos. Essas diferenças individuais podem fornecer uma oportunidade poderosa para os pesquisadores correlacionarem o consumo (ingestão e / ou padrões) com a magnitude dos efeitos patológicos observados.
No entanto, algumas limitações do paradigma de beber em gaiola doméstica de duas garrafas devem ser consideradas. Por exemplo, embora a variabilidade individual na ingestão de etanol possa ser vantajosa para alguns experimentos, pode ser uma desvantagem em outros experimentos onde um nível consistente de intoxicação ou exposição ao etanol pode ser desejável. Isso é particularmente verdadeiro para experimentos que examinam as consequências da dependência e abstinência da exposição crônica ao etanol. É importante ressaltar que o consumo de duas garrafas não é caracterizado como um modelo de dependência - mesmo em ratos com acesso ao etanol por períodos prolongados de tempo. Assim, na ausência de sintomas de abstinência associados, os pesquisadores devem ter cautela ao interpretar as consequências do consumo prolongado de etanol como efeitos da dependência e/ou abstinência. De fato, é possível, se não plausível, que ratos que bebem quantidades relativamente grandes de etanol durante o procedimento de escolha de duas garrafas exibam sintomas de abstinência, mas que ratos que bebem volumes totais mais baixos em um determinado período de 24 horas não mostrem sinais semelhantes de dependência. Os padrões de consumo também podem desempenhar um papel importante nessa consideração, pois dois animais que bebem a mesma quantidade durante um período de 24 horas podem experimentar níveis muito diferentes de intoxicação (ou seja, BEC), dependendo do padrão de ingestão de etanol22. Isso destaca a utilidade do LIQ HDR no procedimento de escolha de duas garrafas, pois pode identificar prontamente ratos que consomem uma determinada dose de etanol em um ritmo rápido (ou seja, engolir) versus aqueles que consomem a mesma dose em um ritmo muito mais lento (ou seja, gole). Embora potencialmente indesejável para estudos que investigam os efeitos de uma dose controlada de etanol, a detecção de mudanças nos padrões de consumo (por exemplo, episódios de compulsão alimentar reduzidos) após uma intervenção experimental específica tem valor translacional significativo, dada a abordagem de redução de danos que é cada vez mais adotada na clínica. Finalmente, não é necessário esforço para que os animais tenham acesso ao etanol em paradigmas de consumo doméstico em gaiolas, incluindo o descrito aqui. Portanto, a utilidade desse paradigma é limitada à análise apenas do consumo de álcool, enquanto os métodos operante são favorecidos nos casos em que os pesquisadores estão interessados em examinar a busca de álcool - uma característica importante do AUD.
Em resumo, o protocolo descrito aqui fornece aos pesquisadores todas as informações e recursos necessários para medir a ingestão de etanol em ratos em gaiolas domésticas. Apresentamos opções para abordagens de resolução relativamente baixa e alta, proporcionando aos pesquisadores a flexibilidade de escolher o método mais adequado às suas necessidades de pesquisa.

Embora o uso moderado de álcool tenha sido historicamente associado a benefícios moderados para a saúde, estudos abrangentes recentes em larga escala revelaram que nenhuma quantidade de consumo de álcool é segura1,2. Na verdade, o uso de álcool é o7º principal fator de risco para morte e incapacidade globalmente1 com indivíduos que bebem até mesmo pequenas quantidades de álcool tendo risco aumentado de câncer, doenças infecciosas e lesões1,3. Nos Estados Unidos, as mortes por uso de álcool aumentaram quase 30% entre 2016 e 20214. É importante ressaltar que o risco de morte e incapacidade aumenta monotonicamente com o aumento do consumo1.
Embora estudos em humanos tenham fornecido informações valiosas sobre a neurobiologia do uso e abuso de álcool, o controle experimental proporcionado por modelos animais é crucial para uma compreensão profunda dos mecanismos subjacentes ao comportamento de beber e ao risco de beber muito. Esses modelos também são ferramentas valiosas para o desenvolvimento de tratamentos que visam reduzir o consumo descontrolado. O consumo de duas garrafas em gaiolas domésticas é um dos paradigmas pré-clínicos mais amplamente utilizados para estudar o consumo de álcool em roedores. Isso se deve, em grande parte, à sua facilidade de implementação, pois permite a medição do consumo voluntário total de álcool e preferência sem a necessidade de equipamentos de pesquisa especializados ou análises complexas. Usando essa abordagem, os pesquisadores podem coletar medições nos intervalos desejados (por exemplo, horas, dias, semanas) calculando a mudança no peso da garrafa do início ao fim de uma sessão de bebida. Variações desse método básico têm sido usadas por muitos no campo para facilitar níveis baixos a moderados a excessivos de ingestão de álcool em curtos e longos períodos de tempo. Por exemplo, procedimentos contínuos e intermitentes de escolha de duas garrafas foram usados para facilitar níveis baixos e moderados de ingestão de álcool, respectivamente, em camundongos5 e ratos6,7,8. Os mesmos paradigmas podem promover altos níveis de ingestão em cepas preferenciais ao álcool7,9. Alternativamente, uma adaptação deste método que limita o acesso ao álcool a 2-4 h por dia, começando aproximadamente 3 h após o início do ciclo escuro, demonstrou gerar consumo excessivo de álcool em camundongos (ou seja, Drinking in the Dark)10,11. Variações adicionais desses métodos têm sido usadas em conjunto com métodos que facilitam a dependência do álcool (ou seja, exposição crônica intermitente ao vapor de etanol) para examinar a escalada do consumo voluntário de álcool durante a abstinência12,13,14,15,16,17,18,19.
Embora amplamente adotada pelo campo, a abordagem padrão de medir a ingestão de álcool pela mudança no peso da garrafa é limitada em resolução ao consumo total por sessão de bebida. Consequentemente, essa abordagem é incapaz de capturar padrões de consumo, que são bem conhecidos por afetar tanto o risco quanto a gravidade do transtorno por uso de álcool (AUD)20,21,22. De fato, a ingestão média de um indivíduo ao longo do tempo pode ser consequência de vários episódios de consumo excessivo de álcool ou muitos episódios de consumo, cada um associado a um consumo relativamente baixo, e essas nuances não são detectadas quando o consumo é medido como ingestão total por sessão de consumo. É importante ressaltar que significativamente mais episódios de consumo associados a grandes crises de consumo (ou seja, engolir) são observados em indivíduos com AUD em relação a controles saudáveis23 e dados em primatas não humanos sugerem que indivíduos que estabelecem um padrão de consumo de álcool que inclui grandes crises de consumo de álcool no início de sua história de consumo de álcool correm um risco significativo de AUD22. Além disso, episódios de consumo de álcool que incluem grandes períodos de consumo aumentam significativamente o risco de morbidade e mortalidade, independentemente do diagnóstico de AUD21. Ao todo, esses dados levaram a um aumento do interesse em examinar os padrões de consumo, além dos níveis de ingestão geral em modelos pré-clínicos e levaram ao desenvolvimento de vários sistemas de complexidade variável que são capazes de capturar dados de consumo no nível de lambidas individuais.
Entre os primeiros estava o desenvolvimento de um sistema de duas garrafas equipado com detecção de lambida de feixe de fotos projetado para uso em camundongos24. Este sistema foi posteriormente adaptado por um grupo separado para uso em ratos25. Nos anos seguintes, variações sobre esse tema foram usadas para desenvolver sistemas semelhantes contidos em alojamentos personalizados para roedores26, que permitem a detecção de lambeduras de animais individuais alojados socialmente27,28, e que capturam o comportamento alimentar e de beber29. Entre estes, o LIQ HD (Lick Instance Quantifier Home cage Device)30 atraiu atenção significativa por oferecer um sistema para uso em camundongos que se assemelha à facilidade de implementação e acessibilidade do sistema desenvolvido por Godnyuck et al.24. Este sistema utiliza detecção capacitiva para detectar diretamente o contato entre a língua e o tubo condutor do sipper de metal, ao contrário de medidas indiretas, como abordagem ou interação do sipper, que são oferecidas usando o sistema de detecção de feixe de fotos. Os autores fornecem dados que demonstram que seu sistema de detecção capacitiva oferece precisão e sensibilidade significativamente maiores na detecção de lambidas, produzindo correlações mais fortes entre o número de lambidas e a mudança no peso da garrafa do que a detecção de feixes de fotos. Os autores demonstram ainda a capacidade de usar este sistema em conjunto com um paradigma de consumo doméstico de gaiola de escolha de duas garrafas de acesso contínuo para capturar medidas da microestrutura do consumo de álcool, além de medidas de ingestão diária geral30.
Aqui, descrevemos procedimentos para o consumo de álcool em gaiola doméstica de escolha de duas garrafas usando uma abordagem padrão, bem como métodos que permitem a detecção de lambedas (Figura 1). Também introduzimos métodos para construir e implementar LIQ HDR - uma adaptação do LIQ HD30 para uso em ratos que inclui modificações de hardware para acomodar tamanhos de gaiola maiores e um suporte de garrafa impresso em 3D redesenhado compatível com garrafas padrão prontas para uso. Esses métodos fornecem aos pesquisadores a flexibilidade de usar uma abordagem padrão ou equipada com licômetro, dependendo de seus recursos experimentais e necessidades de coleta de dados.
Abaixo está uma descrição dos materiais necessários e instruções passo a passo para capturar o consumo de bebidas alcoólicas em gaiolas domésticas usando o procedimento de consumo de duas garrafas de acesso intermitente adaptado de Simms et al.7. Neste procedimento, os ratos têm acesso 24 horas a dois bebedouros, 7 dias por semana. Às segundas, quartas e sextas-feiras (MWF), os ratos recebem uma garrafa contendo água (H2O) e outra garrafa contendo etanol (EtOH). Essas garrafas são removidas às terças, quintas e sábados (TRS) e substituídas por duas garrafas de água. Os ratos bebem das mesmas duas garrafas de água aos sábados e domingos. Observe que esses métodos podem ser facilmente ajustados para horários alternativos de acesso ao etanol (por exemplo, contínuo, compulsão, etc.), se desejado. Instruções separadas são fornecidas para abordagens padrão e equipadas com licômetro.

<table><tbody><tr><td><forte>Componentes disponíveis comercialmente</forte></td><td></td><td></td><td><forte>Quantidade</forte></td></tr><tr><td>Quebra do sensor de toque capacitivo de 12 teclas (MPR121)</td><td>Adafruit</td><td>1982</td><td>3</td></tr><tr><td>Par correspondente de cabo de 2 pinos (passo JST XH 2,5 mm)</td><td>Adafruit</td><td>4872</td><td>18</td></tr><tr><td>Jumper de placa de ensaio de 4 pinos (Qwiic)</td><td>SparkFun</td><td>PRT-17912</td><td>1</td></tr><tr><td>Cabo de 4 pinos (Qwiic de 100 mm)</td><td>SparkFun</td><td>PRT-17259</td><td>1</td></tr><tr><td>cabo de 4 pinos (Qwiic de 50 mm)</td><td>SparkFun</td><td>PRT-17260</td><td>3</td></tr><tr><td>breakout de deslocador de nível de 5V para 3V Adafruit</td><td></td><td>5637</td><td>1</td></tr><tr><td>Protetor de toque capacitivo (2,8 polegadas)</td><td>Adafruit</td><td>1947</td><td>1</td></tr><tr><td>Fita condutora de cobre (1/4 de polegada)</td><td>DigiKey</td><td>4393-CFT-1/4-ND</td><td>1</td></tr><tr><td>Dados escudo de registro</td><td>Adafruit</td><td>1141</td><td>1</td></tr><tr><td>Kit de breakout de comunicação diferencial I2C (QwiicBus)</td><td>SparkFun</td><td>KIT-17250</td><td>1</td></tr><tr><td>Fita isolante</td><td>DigiKey</td><td>3M156004-ND</td><td>1</td></tr><tr><td>Tubo termorretrátil (3/16 polegadas várias cores)</td><td>Abraçadeiras e mais</td><td>HS357-S10</td><td>6</td></tr><tr><td>Kit de tubo termorretrátil (4 polegadas preto)</td><td>Jameco</td><td>2095963</td><td>1</td></tr><tr><td>Bateria de lítio para moedas (3V 12.5mm)</td><td>DigiKey</td><td>1908-CR1220JAUCHSB-ND</td><td>1</td></tr><tr><td>arruela plana M5</td><td>Grainger</td><td>54FN66</td><td>1</td></tr><tr><td>porca hexagonal M5</td><td>Grainger</td><td>6CA72</td><td>1</td></tr><tr><td>parafuso de máquina M5 (12mm)</td><td>Grainger</td><td>6GU88</td><td>1</td></tr><tr><td>M5 parafuso de máquina (25mm)</td><td>Grainger</td><td>&nbsp; 6GU91</td><td>2</td></tr><tr><td>Fio jumper macho/macho</td><td>Adafruit</td><td>1957</td><td>1</td></tr><tr><td>Placa microcontroladora (Arduino Mega 2560 Rev3)</td><td>DigiKey</td><td>1050-1018-ND</td><td>1</td></tr><tr><td>filamento PETG (prata 2,85mm)</td><td>MatterHackers</td><td>M-DDH-UZR2</td><td>2</td></tr><tr><td>filamento PLA (2,85mm preto)</td><td>Filamento PLA</td><td>MatterHackers M-SEW-RUAW</td><td>2</td></tr><tr><td>(prata 2,85mm)</td><td>MatterHackers</td><td>M-66P-6CLE</td><td>1</td></tr><tr><td>Fonte de alimentação (DC 9V 1A)</td><td>Newegg</td><td>9SIBPPKJYR5991</td><td>1</td></tr><tr><td>cartão de memória SD/microSD (8GB)</td><td>Adafruit</td><td>1294</td><td>1</td></tr><tr><td>Conectores de empilhamento de blindagem</td><td>Adafruit</td><td>85</td><td>1</td></tr><tr><td>Fio de núcleo sólido (vermelho 22AWG)</td><td>Adafruit</td><td>288</td><td>1</td></tr><tr><td>Fio de núcleo trançado (22AWG preto)</td><td>Adafruit</td><td>2976</td><td>1</td></tr><tr><td>Fio de núcleo trançado (vermelho 22AWG)</td><td>Adafruit</td><td>3068</td><td>1</td></tr><tr><td>Tubo de sipper com tampa de torção com bola</td><td>Design alternativo</td><td>TCCN8.5-ST2.5SB</td><td>38</td></tr><tr><td>Garrafa de água (8oz)</td><td>Design alternativo</td><td>WB8FS</td><td>38</td></tr><tr><td>Custom Componentes impressos em 3D</td><td></td><td></td><td>Quantity</td></tr><tr><td>3D-printed Arduino case bottom</td><td>N/A</td><td>ARDUINO_Bottom.stl</td><td>1</td></tr><tr><td>Tampo de caixa Arduino impresso em 3D</td><td>N/A</td><td>ARDUINO_Top.stl</td><td>1</td></tr><tr><td>Clipe de cabo impresso em 3D L</td><td>N/A</td><td>CLIP_L.stl</td><td>18</td></tr><tr><td>Porca de clipe de cabo impresso em 3D</td><td>N/A</td><td>CLIP_Nut.stl</td><td>18</td></tr><tr><td>Clipe de cabo impresso em 3D R</td><td>N/A</td><td>CLIP_R.stl</td><td>18</td></tr><tr><td>Suporte para garrafa de lickometer impresso em 3D</td><td>N/A</td><td>LICKOMETER_Bottle Holder.stl</td><td>19</td></tr><tr><td>Protetor de cabo de licômetro impresso em 3D L</td><td>N/A</td><td>LICKOMETER_Cable Protector_L.stl</td><td>6</td></tr><tr><td>Protetor de cabo de licômetro impresso em 3D R</td><td>N/A</td><td>LICKOMETER_Cable Protector_R.stl</td><td>12</td></tr><tr><td>letras de licômetro impresso em 3D</td><td>N/A</td><td>LICKOMETER_Letters.stl</td><td>19</td></tr><tr><td>Parafuso de montagem impresso em 3D</td><td>N/A</td><td>Parafuso de montagem.stl</td><td>4</td></tr><tr><td>Estojo do sensor impresso em 3D A inferior</td><td>N/A</td><td>SENSOR_A_Bottom.stl</td><td>1</td></tr><tr><td>Estojo do sensor impresso em 3D A superior</td><td>N/A</td><td>SENSOR_A_Top.stl</td><td>1</td></tr><tr><td>Estojo do sensor impresso em 3D B inferior</td><td>N/A</td><td>SENSOR_B_Bottom.stl</td><td>1</td></tr><tr><td>Estojo do sensor impresso em 3D B superior</td><td>N/A</td><td>SENSOR_B_Top.stl</td><td>1</td></tr><tr><td>Estojo do sensor impresso em 3D C inferior</td><td>N/A</td><td>SENSOR_C_Bottom.stl</td><td>1</td></tr><tr><td>Estojo do sensor impresso em 3D C top</td><td>N/A</td><td>SENSOR_B_Top.stl</td><td>1</td></tr><tr><td>Letras do estojo do sensor impresso em 3D</td><td>N/A</td><td>SENSOR_Letters.stl</td><td>1</td></tr><tr><td>Bloqueador de sipper impresso em 3D</td><td>N/A</td><td>SIPPER_Blocker.stl</td><td>36</td></tr><tr><td>Base do bloqueador de sipper impresso em 3D</td><td>N/A</td><td>SIPPER_Base.stl</td><td>18</td></tr><tr><td>Engrenagem do bloqueador de sipper impresso em 3D</td><td>N/A</td><td>SIPPER_Gear.stl</td><td>18</td></tr><tr><td>Porca bloqueadora de sipper impressa em 3D</td><td>N/A</td><td>SIPPER_Nut.stl</td><td>18</td></tr><tr><td>Worm bloqueador de sipper impresso em 3D</td> N<td>/A</td><td>SIPPER_Worm.stl</td><td>18</td></tr><tr><td>Painel acrílico de lickometer cortado a laser</td><td>N/A</td><td>LICKOMETER_Acrylic Panel_Sketch.dxf</td><td>19</td></tr></tbody></table>

modelagem do consumo de álcool em roedores usando o consumo de álcool em gaiola doméstica de escolha de duas garrafas e análise microestrutural

Modeling Alcohol Consumption in Rodents Using Two-Bottle Choice Home Cage Drinking and Microstructural Analysis

O consumo de bebidas alcoólicas em gaiolas domésticas com duas garrafas é um dos paradigmas mais amplamente utilizados para estudar o consumo de etanol em roedores. Em sua forma mais simples, os animais têm acesso a duas garrafas de bebida, uma das quais contém água da torneira comum e a outra etanol, com ingestão diária medida pela mudança no peso da garrafa durante o período de 24 horas. Consequentemente, essa abordagem não requer equipamento de laboratório especializado. Embora essa facilidade de implementação seja provavelmente o maior contribuinte para sua ampla adoção por pesquisadores pré-clínicos de álcool, a resolução dos dados de consumo adquiridos usando essa abordagem é limitada pelo número de vezes que o pesquisador mede o peso da garrafa (por exemplo, uma vez ao dia). No entanto, o desejo de examinar os padrões de consumo no contexto da ingestão geral, intervenções farmacológicas e manipulações neuronais levou ao desenvolvimento de sistemas de detecção de lambidas em gaiolas domésticas que podem adquirir dados no nível de lambidas individuais. Embora vários desses sistemas tenham sido desenvolvidos recentemente, o sistema de código aberto, LIQ HD (Lick Instance Quantifier Home cage Device), atraiu atenção significativa no campo por sua acessibilidade e facilidade de uso. Embora emocionante, este sistema foi projetado para uso em camundongos. Aqui, revisamos os procedimentos apropriados para beber em gaiola doméstica de escolha de duas garrafas padrão e equipado com lickometer. Também introduzimos métodos para adaptar o sistema LIQ HD a ratos, incluindo modificações de hardware para acomodar um tamanho de gaiola maior e um suporte de garrafa impresso em 3D redesenhado compatível com garrafas padrão prontas para uso. Usando essa abordagem, os pesquisadores podem examinar os padrões diários de consumo, além dos níveis de ingestão em muitos ratos, em paralelo, aumentando assim a resolução dos dados adquiridos com investimento mínimo em recursos adicionais. Esses métodos fornecem aos pesquisadores a flexibilidade de usar garrafas padrão ou um aparelho equipado com licômetro para interrogar os mecanismos neurobiológicos subjacentes ao consumo de álcool, dependendo de suas necessidades experimentais precisas.

Este protocolo descreve um paradigma padrão de consumo doméstico de duas garrafas de acesso intermitente para modelar o consumo de álcool em ratos. Além disso, fornece instruções passo a passo para aumentar o protocolo padrão com um sistema de detecção de lambedura DIY que permite a análise microestrutural do comportamento de beber.

Modelagem do consumo de álcool em roedores usando o consumo de álcool em gaiola doméstica de escolha de duas garrafas e análise microestrutural

Two-bottle choice home cage drinking is one of the most widely used paradigms to study ethanol consumption in rodents. In its simplest form, animals are ...

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Neuroscience

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Modelagem do consumo de álcool em roedores usando o consumo de álcool em gaiola doméstica de escolha de duas garrafas e análise microestrutural

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