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Técnicas de Patch-Clamp para Análise de Vesícula Endolisossômica Única
Técnicas de Patch-Clamp para Análise de Vesícula Endolisossômica Única
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JoVE Journal Biology
Patch-Clamp Techniques for Single Endolysosomal Vesicle Analysis

Técnicas de Patch-Clamp para Análise de Vesícula Endolisossômica Única

Full Text
1,212 Views
05:47 min
April 4, 2025

DOI: 10.3791/67519-v

Hsuan-Ti Wang1, Cheng-Chang Chen1,2

1Clinical Laboratory Sciences and Medical Biotechnology, College of Medicine,National Taiwan University, 2Department of Laboratory Medicine,National Taiwan University Hospital

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Este protocolo detalha um método para medir diretamente a atividade do canal iônico em vesículas intracelulares usando um sistema manual de patch-clamp endolisossomal. Ilustramos o método que envolve o aumento dos endolisossomos e o isolamento manual dessas vesículas. Essa abordagem garante que os pesquisadores possam replicar e aplicar o procedimento com precisão.

Os compartimentos endolisossômicos são as menores organelas das células. As técnicas eletrofisiológicas tradicionais são incapazes de medir diretamente suas mudanças de tensão e corrente. A técnica de patch-clamp do endolisossomo permite gravações diretas, permitindo-nos estudar previamente nos canais iônicos.

O principal desafio experimental é que nem todos os compostos aumentam efetivamente os lisossomos. Identificar células adequadas é difícil e, mesmo com lisossomos ideais, o registro bem-sucedido do canal iônico não é garantido. Desenvolvemos a técnica de endolisossomo-patch clamp para permitir registros eletrofisiológicos diretos das membranas endolisossômicas.

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