Name: Isolamento de células estromais mesenquimais derivadas do cordão umbilical alto BAMBIhumanoMFGE8alto (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-01-10T14:20:00.000+00:00
Duration: 6 min 5 s
Description: Aprenda a isolar células estromais mesenquimais BAMBI alto MFGE8 alto do cordão umbilical humano. Este método utiliza citometria de fluxo para caracterizar subpopulações específicas e selecionar grupos ideais para terapias regenerativas.

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<meta charset="utf8"></head><body>Análise funcional de subpopulações de BAMBIcom altoMFGE8e alto UC-MSC

<ol><li>Liechty, K. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+mesenchymal+stem+cells+engraft+and+demonstrate+site-specific+differentiation+after+in+utero+transplantation+in+sheep%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Human mesenchymal stem cells engraft and demonstrate site-specific differentiation after in utero transplantation in sheep.</a> Nat Med. 6 (11), 1282-1286 (2000).</li>
<li>Zhou, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Challenges+and+advances+in+clinical+applications+of+mesenchymal+stromal+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Hematol+Oncol%22%5BJournal%5D)">Challenges and advances in clinical applications of mesenchymal stromal cells.</a> J Hematol Oncol. 14 (1), 24(2021).</li>
<li>Xie, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tnf-alpha-mediated+m%286%29a+modification+of+elmo1+triggers+directional+migration+of+mesenchymal+stem+cell+in+ankylosing+spondylitis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Tnf-alpha-mediated m(6)a modification of elmo1 triggers directional migration of mesenchymal stem cell in ankylosing spondylitis.</a> Nat Commun. 12 (1), 5373(2021).</li>
<li>Mcguire, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stem+cell-derived+interleukin-28+drives+the+selection+of+apoptosis+resistant+bone+metastatic+prostate+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stem cell-derived interleukin-28 drives the selection of apoptosis resistant bone metastatic prostate cancer.</a> Nat Commun. 12 (1), 723(2021).</li>
<li>Yuan, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stem+cell+therapy+induces+flt3l+and+cd1c%28%2B%29+dendritic+cells+in+systemic+lupus+erythematosus+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stem cell therapy induces flt3l and cd1c(+) dendritic cells in systemic lupus erythematosus patients.</a> Nat Commun. 10 (1), 2498(2019).</li>
<li>Wang, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Umbilical+cord+mesenchymal+stem+cell+transplantation+in+active+and+refractory+systemic+lupus+erythematosus%3A+A+multicenter+clinical+study%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+Res+Ther%22%5BJournal%5D)">Umbilical cord mesenchymal stem cell transplantation in active and refractory systemic lupus erythematosus: A multicenter clinical study.</a> Arthritis Res Ther. 16 (2), R79(2014).</li>
<li>Ortiz, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stem+cell+engraftment+in+lung+is+enhanced+in+response+to+bleomycin+exposure+and+ameliorates+its+fibrotic+effects%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stem cell engraftment in lung is enhanced in response to bleomycin exposure and ameliorates its fibrotic effects.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 100 (14), 8407-8411 (2003).</li>
<li>Phinney, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+heterogeneity+of+mesenchymal+stem+cells%3A+Implications+for+cell+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biochem%22%5BJournal%5D)">Functional heterogeneity of mesenchymal stem cells: Implications for cell therapy.</a> J Cell Biochem. 113 (9), 2806-2812 (2012).</li>
<li>Wang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+transcriptome+atlas+of+human+mesenchymal+stem+cells+exploring+cellular+heterogeneity%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Single-cell transcriptome atlas of human mesenchymal stem cells exploring cellular heterogeneity.</a> Clin Transl Med. 11 (12), e650(2021).</li>
<li>Chen, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+and+spatial+transcriptomics+decodes+wharton%27s+jelly-derived+mesenchymal+stem+cells+heterogeneity+and+a+subpopulation+with+wound+repair+signatures%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Sci+%28Weinh%29%22%5BJournal%5D)">Single-cell and spatial transcriptomics decodes wharton's jelly-derived mesenchymal stem cells heterogeneity and a subpopulation with wound repair signatures.</a> Adv Sci (Weinh). 10 (4), e2204786(2023).</li>
<li>Chen, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dissecting+heterogeneity+reveals+a+unique+bambi%28high%29+mfge8%28high%29+subpopulation+of+human+uc-mscs%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Sci+%28Weinh%29%22%5BJournal%5D)">Dissecting heterogeneity reveals a unique bambi(high) mfge8(high) subpopulation of human uc-mscs.</a> Adv Sci (Weinh). 10 (1), e2202510(2022).</li>
<li>Tsuji, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+different+cell-detaching+methods+on+the+viability+and+cell+surface+antigen+expression+of+synovial+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Transplant%22%5BJournal%5D)">Effects of different cell-detaching methods on the viability and cell surface antigen expression of synovial mesenchymal stem cells.</a> Cell Transplant. 26 (6), 1089-1102 (2017).</li>
<li>Lai, T. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Different+methods+of+detaching+adherent+cells+and+their+effects+on+the+cell+surface+expression+of+fas+receptor+and+fas+ligand%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Different methods of detaching adherent cells and their effects on the cell surface expression of fas receptor and fas ligand.</a> Sci Rep. 12 (1), 5713(2022).</li>
<li>Avinash, K., Malaippan, S., Dooraiswamy, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+of+isolation+and+characterization+of+stem+cells+from+different+regions+of+oral+cavity+using+markers%3A+A+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Methods of isolation and characterization of stem cells from different regions of oral cavity using markers: A systematic review.</a> Int J Stem Cells. 10 (1), 12-20 (2017).</li>
<li>Galvao, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rock+inhibition+drives+resolution+of+acute+inflammation+by+enhancing+neutrophil+apoptosis%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">Rock inhibition drives resolution of acute inflammation by enhancing neutrophil apoptosis.</a> Cells. 8 (9), 964(2019).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Tubo de microcentrífuga de 0,6 mL</td><td>Corning&nbsp;</td>Tubos de microcentrífuga <td>Axygen MCT-060-A</td><td></td></tr><tr><td>1.5 mL Tecnologia</td><td>Labgica de Pequim</td><td>MCT-001-150</td><td></td></tr><tr><td>Placa de cultura de células de 100 mm&nbsp;</td><td>Tecnologia Labgica de Pequim</td><td>12311</td><td></td></tr><tr><td>Placa de 12 poços</td><td>Tecnologia Labgica de Pequim</td><td>11210</td><td></td></tr><tr><td>Tubo de centrífuga de 15 mL</td> Tecnologia de material <td>Nanjing Vazyme</td><td>TCF00115</td><td></td></tr><tr><td>placa de 24 poços</td><td>Tecnologia Labgica de Pequim</td><td>11310</td><td></td></tr><tr><td>Tubo de centrífuga de 50 mL Tecnologia de centrífuga</td><td>Nanjing Vazyme Material Technology</td><td>TCF00150</td><td></td></tr><tr><td>5 mL Tubos de Fundo Redondo</td><td>Corning</td><td>FALCON 352003</td><td></td></tr><tr><td>70 &mu; filtro de células m</td><td>Falcon</td><td>352350</td><td>Diluição: 1:1000</td></tr><tr><td>APC anti-humano CD79a (Ig&alfa;) Anticorpo</td><td>BioLegend</td><td>333505</td><td>581 Diluição: 1:200</td></tr><tr><td>APC/Cyanine7 anti-CD73 humano (Ecto-5'-nucleotidase) Anticorpo</td><td>BioLegend</td><td>344022</td><td>G46-6 Diluição: 1:200</td></tr><tr><td>APC-Cy7 Camundongo IgG1, &kappa; Controle de</td><td>Isotipo BD Bioscience</td><td>557873</td><td>MOPC-31C (Controle de Isotipo) Diluição: 1:200</td></tr><tr><td>BAMBI anticorpo</td><td>Bioss</td><td>bs-12418R</td><td></td></tr><tr><td>Violeta Brilhante 510 anti-camundongo/humano CD44 Anticorpo BioLegend</td><td></td><td>103044</td><td>5E10 Diluição: 1:200</td></tr><tr><td>Violeta Brilhante 510 Rato IgG2b, &kappa; Anticorpo Isotype Ctrl</td><td>BioLegend</td><td>400646</td><td>MOPC-21 (Controle de Isotype) Diluição: 1:200</td></tr><tr><td>CD105 (Endoglin) Anticorpo Monoclonal&nbsp; APC</td><td>eBioscience</td><td>17-1057-42</td><td>HM47 Diluição: 1:200</td></tr><tr><td>Lâminas da Câmara de Contagem de Células</td><td>Shanghai QIUJING</td><td>XB-K-25</td><td></td></tr><tr><td>Centrífuga</td><td>Beijing BAIYANG</td><td>BY-320C</td><td></td></tr><tr><td>ChamQ Universal SYBR qPCR Master Mix</td><td>Vazyme</td><td>Q711-02</td><td></td></tr><tr><td>Clorofórmio</td><td>XILONG Scientific</td><td>13700908</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F-12 (1:1) básico (1x)</td><td>Gibco</td><td>C11330500BT</td><td></td></tr><tr><td>EDTA (0.5 M), pH 8.0, livre de Rnase</td><td>Invitrogen</td><td></td><td>AM9260G Diluição: 1:1000</td></tr><tr><td>Etanol&nbsp; &nbsp;</td><td>XILONG Scientific</td><td>12803405</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Soro Bovino (FBS)</td><td>Gibco</td><td>10099-141C&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>FITC Mouse Anti-Human CD34</td><td>BD Bioscience</td><td>555821</td><td>IM7 Diluição: 1:200</td></tr><tr><td>FITC Mouse Anti-Human CD45</td><td>BD Bioscience</td><td>555482</td><td>AD2 Diluição: 1:200</td></tr><tr><td>FITC Mouse Anti-Human HLA-DR</td><td>BD Bioscience</td><td>555811</td><td>SN6 Diluição: 1:200</td></tr><tr><td>Citômetro de Fluxo</td><td>BD Bioscience</td><td>FACSAria&trade; III Cell SorterAria</td><td></td></tr><tr><td>Flowjo</td><td>BD Bioscience</td><td>V10</td><td></td></tr><tr><td>Reagente de Dissociação Celular Suave</td><td>STEMCELL Technologies</td><td>100-0485</td><td></td></tr><tr><td>Cabra Anti-Rato IgG H& L (Alexa Fluor 488)</td><td>abcam</td><td>ab150113</td><td>HI30 Diluição: 1:200</td></tr><tr><td>IgG H& Anti-Coelho de Cabra L (AlexaFluor 594)</td><td>abcam</td><td>ab150080</td><td>Diluição: 1:1000</td></tr><tr><td>HiScript II Q RT SuperMix para qPCR (+gDNA wiper)</td><td>Vazyme</td><td>R223-01</td><td></td></tr><tr><td>Microscópios Invertidos</td><td>Nikon</td><td>ECLIPSE Ts2</td><td></td></tr><tr><td>Álcool Isopropílico</td><td>XILONG Scientific 12802505</td><td></td><td></td></tr><tr><td>MFGE8 anticorpo</td><td>Biorbyt</td><td>orb388429</td><td>Diluição: 1:100</td></tr><tr><td>Microcentrífuga</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>FRESCO 21</td><td></td></tr><tr><td>Mouse IgG1 kappa Controle de Isotipo APC</td><td>eBioscience</td><td>17-4714-42</td><td>P3.6.2.8.1 (Controle de Isotipo) Diluição: 1:200</td></tr><tr><td>Controle de Isotipo IgG1 kappa de Camundongo FITC</td><td>eBioscience</td><td>11-4714-42</td><td>eBMG2b (Controle de Isotipo) Diluição: 1:200</td></tr><tr><td>Controle de Isotipo de IgG2b kappa de Camundongo FITC</td><td>eBioscience</td><td>11-4732-42</td><td>RTK4530 (Controle de Isotipo) Diluição: 1:200</td></tr><tr><td>PBS (10x)</td><td>Sangon Biotech (Shanghai)</td><td>E607016-0500</td><td></td></tr><tr><td>PE-Cy5 Mouse Anti-Human CD90&nbsp;</td><td>BD Bioscience</td><td>555597</td><td>P3.6.2.8.1 (Controle de Isotipo) Diluição: 1:200</td></tr><tr><td>PE-Cy5 Camundongo IgG1 &kappa; Controle de</td><td>Isotipo BD Bioscience</td><td>550618</td><td></td></tr><tr><td>Penicilina-Estreptomicina 100x</td><td>Cytiva</td><td>SV30010</td><td>Diluição: 1:100</td></tr><tr><td>Sistema de PCR em Tempo Real</td><td>Applied Biosystems byThermo Fisher Scientific</td><td>Q6</td><td></td></tr><tr><td>Água livre de RNase</td><td>QIAGEN</td><td></td> 129112 <td></td></tr><tr><td>Espectrofotômetro</td><td>Thermo Fisher Scientific NanoDrop</td><td>One(840-317400)</td><td></td></tr><tr><td>Pontas de micropipeta estéril</td> Tecnologia <td></td><td>Labgica de Pequim</td><td>Diluição: frasco de cultura de células T75 1:100</td></tr> Tecnologia <tr><td></td><td>Labgica de Pequim</td><td>13212A</td><td></td></tr><tr><td>Termociclador</td><td>Aplicado Biosystems byThermo Fisher Scientific</td><td>Veriti</td><td></td></tr><tr><td>Tri reagente</td><td>Sigma Aldrich</td><td>T9424</td><td></td></tr><tr><td>Typsin-EDTA Solução</td><td>Bio-Canal Biotecnologia</td><td>BC-CE-005</td><td></td></tr><tr><td>CO2&nbsp; Incubadora</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>3111</td><td></td></tr></tbody></table>

isolamento de células estromais mesenquimais derivadas do cordão umbilical alto bambihumanomfge8alto

Isolation of Human BAMBIhighMFGE8high Umbilical Cord-Derived Mesenchymal Stromal Cells

A Figura 1 mostra os perfis de expressão de marcadores de superfície celular de UC-MSCs humanas. As MSCs cultivadas foram fortemente positivas para a expressão de CD44, CD73, CD90 e CD105 e negativas para a expressão de CD14, CD34, CD45, CD79 e HLA-DR. As MSCsaltasde MFGE8BAMBI foram classificadas de UC-MSCs humanas cultivadas, e sua expressão de BAMBI e MFGE8 foi reanalisada por citometria de fluxo após expansão por 3-4 passagens (Figura 2...

Isolamento de células estromais mesenquimais derivadas do cordão umbilical alto BAMBIhumanoMFGE8alto

Umbilical cord-derived mesenchymal stromal/stem cells (UC-MSCs) present low immunogenicity and potent immunomodulatory effects for treating various ...

isolation-human-bambihighmfge8high-umbilical-cord-derived-mesenchymal

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Este protocolo descreve o isolamento ea subsequente expansão de células mesenquimais estromais e as células endoteliais que formam colônias sem o uso de animais soro autólogo para gerar pares para fins de transplante experimental.

Isolamento e animais de Expansão de soro livre de cordão umbilical humano Derivado células mesenquimais estromais (MSCs) e endoteliais Células Progenitoras Colony Forming (ECFCs)

As células-tronco mesenquimais (CTMs) têm potencial de diferenciação em relação à linhagem osteoblástica quando estimuladas com fatores solúveis ou biomateriais específicos. Este trabalho apresenta uma nova opção para a entrega de MSCs a partir de membrana amniótica humana (AM-hMSCs) que emprega a matriz óssea bovina Nukbone (NKB) como um andaime.

Isolamento de mesenquimais humanas células-tronco e seu cultivo na matriz óssea Porous

Aqui, apresentam-se um protocolo para a dissecção de cordão umbilical humano (UC) e a amostra da placenta fetal em cordão de revestimento (CL), geleia de Wharton (WJ), junção de cabo-placenta (CPJ), e na placenta fetal (FP) para o isolamento e caracterização de células estromais mesenquimais (MSCs), utilizando a técnica de cultura de explante.

Isolamento e Caracterização de células mesenquimais do estroma a partir de cordão umbilical humano e Fetal Placenta

Cordão umbilical humano (UC) podem ser obtido durante o período perinatal como resultado de pré-termo, termo e postterm entrega. Neste protocolo, descrevemos o isolamento e caracterização de UC-derivado células-tronco mesenquimais (UC-MSCs) de fetos/recém-nascidos com 19-40 semanas de gestação.

Isolamento e caracterização de células humanas de Cordão Umbilical-derivados mesenquimais haste de prematuros e recém-nascidos de termo

Este estudo apresenta um procedimento único de dissecção romba para preservar a integridade da geléia de Wharton (WJ), resultando em WJ menos danificado e uma maior quantidade e viabilidade das células-tronco mesenquimais (MSCs) colhidas. O método demonstra rendimento superior e capacidade proliferativa em comparação com os métodos convencionais de dissecção aguda.

Isolamento de células-tronco mesenquimais derivadas do cordão umbilical com alto rendimento e baixo dano

Neste relatório, nós demonstramos um sistema para isolar e cultura de células de doadores da glândula mamária do mouse, e ortotopicamente transplante dessas células em ratos para analisar estroma destinatário: interações epiteliais durante o desenvolvimento do tumor mamário.

Transplante mamária de células estromais e células de carcinoma em camundongos C57BL/6J

Carcinoma associado fibroblastos (FAC) rico em miofibroblastos presentes no estroma tumoral, desempenhar um papel importante na condução de progressão do tumor. Nós desenvolvemos um modelo coimplantation xengraft tumor para gerar FAC experimentalmente a partir de fibroblastos humanos mamária. O protocolo descreve como estabelecer miofibroblastos CAF que adquirem uma capacidade de promover tumourigenesis.

Geração Experimental de Carcinoma Associado fibroblastos (FAC) de Fibroblastos Humanos mamária

O método descrito o isolamento e caracterização de células pulpares humanas estaminais (hDPSCs)...

Isolamento, caracterização e comparativa Diferenciação de células-tronco da polpa dentária Derivado de dentes permanentes usando dois métodos diferentes

O isolamento de células-tronco cancerosas (CSCs) diretamente a partir de tecidos humanos é requisito para a sua caracterização biológica. Este manuscrito descreve uma metodologia para o isolamento de CSCs próstata de tecidos humanos, além de fornecer dicas sobre solução de problemas etapas difíceis.

Isolamento de células-tronco cancerosas em amostras de câncer de próstata humano

Estabelecimento de sistemas de cultura primária de células do estroma endometrial a partir de espécimes de histerectomia é uma técnica biológica valioso e um passo crucial antes de prosseguir uma vasta gama de pesquisa objetiva. Aqui, descrevemos dois métodos utilizados para estabelecer culturas de tecidos do estroma endometriais ressecados cirurgicamente de pacientes humanos.

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Aprenda a isolar células estromais mesenquimais BAMBI alto MFGE8 alto do cordão umbilical humano. Este método utiliza citometria de fluxo para caracterizar subpopulações específicas e selecionar grupos ideais para terapias regenerativas.

Isolamento de células estromais mesenquimais derivadas do cordão umbilical alto BAMBI^humanoMFGE8^alto

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