Name: Isolamento e captação de células dendríticas de pequenas vesículas extracelulares de Echinococcus granulosus (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-03-28T13:15:00.000+00:00
Duration: 9 min 4 s
Description: Aprenda a isolar e caracterizar vesículas extracelulares de Echinococcus granulosus e estudar sua captação por células dendríticas. Este método revela mecanismos de imunomodulação parasita-hospedeiro.

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<table><tbody><tr><td>Tubos de 1,5 mL</td><td>Henso</td><td>N14059</td><td></td></tr><tr><td>Placa de 24 poços</td><td>JetBiofil</td><td>CAP011024</td><td>Poliestireno, fundo plano, Placa estéril</td></tr><tr><td>de 6 poços&nbsp; &nbsp;</td><td>Fornecedor:Henso Medical Co., Ltd.</td><td>N14221</td><td>Fundo plano, material PS,</td></tr><tr><td>filtro de células de polipropileno estéril de 70 mm</td><td>Biologix Group Limited</td><td>15-1070</td><td>Corante</td></tr><tr><td>Alcian azul 8 GX estéril&nbsp;</td><td>Santa Cruz</td><td>sc-214517B</td><td></td></tr><tr><td>Incubadora automática de CO2</td><td>Nuarire</td><td>UN-5100E/G DH</td><td></td></tr><tr><td>Albumina de soro bovino</td><td>Wiener lab</td><td>1443151</td><td></td></tr><tr><td>anticorpo monoclonal CD11c-PECy5&nbsp; &nbsp; 100 &micro; g</td><td>eBioscience</td><td>15-0114-82</td><td>clone (N418)</td></tr><tr><td>CD40 Anticorpo monoclonal-FITC 100 &micro; g</td><td>eBioscience</td><td>11-0402-82</td><td>clone (HM40-3)</td></tr><tr><td>CD80 Anticorpo monoclonal-APC 100 &micro; g</td><td>eBioscience</td><td>17-0801-82</td><td>clone (16-10A-1)</td></tr><tr><td>CD86 Anticorpo monoclonal-FITC&nbsp; 100 &micro; g</td><td>eBioscience</td><td>11-0862-82</td><td>clone (GL-1)</td></tr> <tr><td>Centrífuga</td><td>Thermo Scientific</td><td>IEC CL31R</td> Microscópio Confocal Multispeed <td></td></tr><tr><td></td><td>Nikon</td><td>Nikon Microscópio Confocal C1</td><td></td></tr><tr><td>Tubos cônicos 15 mL dia.17 x 120 mm</td><td>Citotest</td><td>4610-1865</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Sigma</td><td>107K4034</td><td></td></tr><tr><td>D-Glucose</td><td>Merk</td><td>1.78343</td><td></td></tr><tr><td>Dimetil Sulfóxido&nbsp;</td><td>Anedra</td><td>6646</td><td></td></tr><tr><td>Soro Fetal Bovino 500 mL</td><td>Sigma-Aldrich&nbsp; &nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>12352207 Sistema de Citometria de Fluxo</td><td>BD Biosciences</td><td>BD FACSCanto&trade; II</td><td></td></tr><tr><td>Célula Zeta Capilar Dobrada</td><td>Malvern Panalytical</td><td>DTS1070</td><td></td></tr><tr><td>Sal de sulfato de gentamicina</td><td>Sigma</td><td>G1264</td><td></td></tr><tr><td>Solução de glutaraldeído</td><td>Fluka</td><td>49630</td><td></td></tr><tr><td>Hepes</td><td>Gibco</td><td>11344041</td><td></td></tr><tr><td>Hypodermic&nbsp; agulha 21 G x 1"25/8</td><td>Weigao</td><td></td> Agulha <td></td></tr><tr><td>Hipodermica Estéril 25 G x 5/8"</td><td>Weigao</td><td></td><td>estéril</td></tr><tr><td>Microscópio invertido&nbsp;</td><td>Leica</td><td>DMIL LED Fluo&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Lipopolissacarídeo de Cetamina</td><td>Holliday</td><td></td><td></td></tr><tr><td>&nbsp; 5 mg</td><td>Invitrogen</td><td>tlrl-rslps</td><td>LPS da bactéria Gram-negativa E. coli K12. TLR2/4 Agonistas</td></tr><tr><td>Cloridrato de Loperamida</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>5.08162</td><td></td></tr><tr><td>Medium 199&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>11150059</td><td></td></tr><tr><td>Azul de Metileno</td><td>Anedra</td><td>6337</td><td></td></tr><tr><td>MHC classe I (H2kb) Anticorpo monoclonal-PE 100 &micro; g</td><td>eBioscience</td><td>12-5958-82</td><td>clone (AF6-88.5.5.3)</td></tr><tr><td>MHC classe II (IA/IE) Anticorpo monoclonal-FITC&nbsp; 100 &micro; g</td><td>eBioscience</td><td>11-5321-82</td><td>clone (M5 / 114.15.2)</td></tr> <tr><td>Microscópio</td><td>Olympus</td><td>CX31</td><td></td></tr><tr><td>Mouse murino recombinante Flt3L.</td><td>PrepoTech</td><td>250-31L-10UG</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Nanodrop Thermo Scientific</td><td>ND-One</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldeído</td><td>Agar Scientific</td><td>R1018</td><td></td></tr><tr><td>Penicilina G sal de sódio</td><td>Sigma</td><td>P3032-10MU</td><td></td></tr><tr><td>PKH26</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>MINI26</td><td></td></tr><tr><td>Fosfato de potássio Monobasic</td><td>Timper</td><td></td><td>para fosfato tamponado Tampão de lise salina (PBS)</td></tr><tr><td>RBC 100 mL</td><td>Roche</td><td>11814389001</td><td></td></tr><tr><td>meio RPMI&nbsp; 1640 1x 500 mL</td><td>Sigma-Aldrich (Gibco)</td><td>11875093</td><td></td></tr><tr><td>Cacodilato de Sódio&nbsp; &nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C0250</td><td></td></tr><tr><td>Cloreto de Sódio</td><td>Anedra</td><td>7647-14-5</td><td>Para Fosfato Salino Tampolado (PBS)</td></tr> <tr><td>Fosfato de Sódio Dibásico (Anidro) p. a.</td><td>Biopack</td><td>1639.07</td><td>Para Salino Tampolado com Fosfato (PBS)</td></tr><tr><td>Sal de sulfato de estreptomicina</td><td>Seringa Sigma</td><td>S9137</td><td></td></tr><tr><td>10 mL</td><td>Bremen</td><td></td> Tubos de policarbonato de parede espessa <td>estéreis</td></tr><tr><td></td><td>Beckman Coulter</td><td></td><td>13 x 55 mm, capacidade nominal 4 mL</td></tr><tr><td>Microscópio Eletrônico de Transmissão</td><td>Jeol</td><td>JEOL JSM 100CX II</td><td></td></tr><tr><td>Ultracentrífuga</td><td>Beckman</td><td>Optima LE-80k&nbsp;</td><td>Rotor de 90 Ti</td></tr><tr><td>Xylazine</td><td>Richmond</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Zetasizer Nano&nbsp;</td><td>Malvern&nbsp;</td><td>Nano ZSizer-ZEN3600</td><td>Para realizar medições dinâmicas de espalhamento de luz e potencial zeta</td></tr></tbody></table>

isolamento e captação de células dendríticas de pequenas vesículas extracelulares de echinococcus granulosus

Isolation And Dendritic Cell-Uptake of Small Extracellular Vesicles from Echinococcus granulosus

Um fluxograma resumindo as principais etapas para a manutenção de culturas puras do estágio larval de E. granulosus , o isolamento e caracterização de sEVs e sua captação por células dendríticas murinas são mostrados na Figura 1. Para alcançar alta produção de sEV a partir de protoscoleces e metacestóides de E. granulosus , um método de cultura in vitro previamente desenvolvido em laboratório foi empregado para maximizar a sobrevivência e a homeostase metabólica do...

Isolamento e captação de células dendríticas de pequenas vesículas extracelulares de Echinococcus granulosus

The secretion of extracellular vesicles by cestodes is crucial for enabling cellular communication not only among parasites but also with host tissues. In ...

isolation-dendritic-cell-uptake-small-extracellular-vesicles-from

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Imunologia e Infecção

Fonte: Watson, D. C., et.al. Isolamento e purificação escaláveis de vesículas extracelulares de Escherichia coli e outras bactérias. J. Vis. Exp. (2021)Este vídeo demonstra o isolamento e a concentração de vesículas extracelulares (EVs) derivadas da membrana externa de bactérias geneticamente modificadas. O processo envolve a cultura das bactérias para liberar EVs, seguido por etapas sequenciais de centrifugação e filtração para remover células e detritos. Finalmente, a ultrafiltração é usada...

Isolamento e Enriquecimento de Vesículas Extracelulares Derivadas da Membrana Externa de Bactérias

Este vídeo descreve um método baseado em cromatografia de exclusão de tamanho (SEC) para isolar vesículas extracelulares ou EVs derivadas das células imunológicas do cérebro - a microglia. Os EVs atuam como carga molecular para fornecer mediadores, que regulam uma resposta imune. Portanto, os EVs isolados podem ser usados como um modelo in vitro para estudar a interferência microglia-neurônio durante uma resposta imune neuronal.

Isolamento baseado em SEC de vesículas extracelulares derivadas de microglia: uma técnica para isolar vesículas extracelulares de meios de cultura condicionados por microglia

Existe um interesse crescente na compreensão das funções imunológicas de subpopulações específicas de células em placas de Peyer (PP), os locais primários indutivos de tecidos linfóide associado ao intestino. Aqui destacamos protocolos paralelos para preparar PP preparações de células individuais para análise por citometria de fluxo e criosseções PP para imunocoloração.

Isolar e imunocoloração linfócitos e células dendríticas a partir de placas de Peyer Murino

Este protocolo detalha um método para isolar células apresentadoras de antigénio a partir de timo humano por meio de diferentes passos de digestão enzimática do tecido seguida por centrifugação de densidade da suspensão de células individuais e finalmente separação magnética e / ou FACS das populações de células de interesse.

O isolamento de células dendríticas mielóides e células epiteliais de timo humano

Descrevemos aqui um método para isolar e purificar as células dendríticas de diferentes compartimentos anatômicas no aparelho reprodutor feminino humano para a avaliação de suas características fenotípica e funcionais. Esse método pode ser adaptado para isolar outras células do sistema imunológico ou células dendríticas de outros tecidos da mucosa.

Isolamento de células dendríticas do tracto reprodutivo feminino humano para estudos fenotípica e funcionais

Aqui, apresentamos um protocolo para descrever o isolamento de vesículas extracelulares (EVs) em vitro culta médio de adultos Schistosoma japonicum.

Isolamento e caracterização de vesículas extracelulares de adultos Schistosoma japonicum

O presente relatório destaca os requisitos cronológicos para o isolamento da vesícula extracelular (EV) de microglia ou macrófagos sanguíneos. Os EVs derivados de microglia foram avaliados como reguladores do crescimento do neurite, enquanto os EVs derivados do macrófago sanguíneo foram estudados no controle da invasão celular C6 glioma em ensaios in vitro. O objetivo é entender melhor essas funções de EV como mediadores imunológicos em microambientes específicos.

Caracterização de vesículas extracelulares derivadas de células imunes e estudo do impacto funcional no ambiente celular

Descrevemos uma técnica de transdução transitória rápida em diferentes estágios de desenvolvimento do Echinococcus granulosus usando vetores lentivirais de terceira geração.

Transdução Transitória das Formas Estrofes estropidas de Echinococcus granulosus

As bactérias secretam vesículas extracelulares (EVs) de tamanho nanométrico que transportam moléculas biológicas bioativas. A pesquisa EV se concentra na compreensão de sua biogênese, papel nas interações micróbio-micróbio e hospedeiro-micróbio e doença, bem como suas potenciais aplicações terapêuticas. Um fluxo de trabalho para isolamento escalável de EVs de várias bactérias é apresentado para facilitar a padronização da pesquisa de EV.

Isolamento escalável e purificação de vesículas extracelulares de Escherichia coli e outras bactérias

O protocolo proposto inclui diretrizes sobre como evitar a contaminação com endotoxina durante o isolamento de vesículas extracelulares de sobrenadantes de cultura celular e como avaliá-las adequadamente.

Isolamento de Vesículas Extracelulares de Baixo Conteúdo de Endotoxinas Derivadas de Linhagens Celulares Cancerígenas

Aprenda a isolar e caracterizar vesículas extracelulares de Echinococcus granulosus e estudar sua captação por células dendríticas. Este método revela mecanismos de imunomodulação parasita-hospedeiro.

Isolamento e captação de células dendríticas de pequenas vesículas extracelulares de Echinococcus granulosus

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