Name: Transplante de Pulmão de Bioengenharia Usando Pulmões de Camundongos Descelularizados e Células Endoteliais Humanas Primárias (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-03-28T13:25:00.000+00:00
Duration: 10 min 13 s
Description: Aprenda a bioengenharia de pulmões usando camundongos descelularizados e células endoteliais humanas primárias. Este protocolo padronizado permite pesquisa escalável em transplante de órgãos.

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</ol>

<table><tbody><tr><td>DESCELULARIZAÇÃO</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>27 G x 1/2 pol. Agulha BD PrecisionGlide</td><td>BD</td><td>305109</td><td>Ou equivalente Agulha de injeção 27 G</td></tr> BD <tr><td>Insyte IV Cateter 20 GA X 1,8 8IN</td><td>BD</td><td></td><td>381237 Ou equivalente 20 G IV</td></tr><tr><td>cateter Lâmina de seda sutura (4-0)</td><td>Nesco</td><td>GA04SB</td><td>Ou equivalente</td></tr><tr><td>CaCl2</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C5670</td><td></td></tr><tr><td>Cateter para veia jugular de rato, PU 2Fr 10 cm</td><td>Instech</td><td>C20PU-MJV1301</td><td>Recomendado para camundongos com peso igual ou inferior a 30 g.</td></tr><tr><td>Cateter para veia jugular de rato, PU 3Fr 10 cm</td><td>Instech</td><td>C30PU-RJV1307</td><td>Recomendado para camundongos pesa mais de 30 g.</td></tr><tr><td>DNase I</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>DN25</td><td></td></tr><tr><td>MgSO4</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M7506</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Injetores Sigma-Aldrich</td><td>S3014</td><td></td></tr><tr><td>PinPort</td><td>Instech</td><td>PNP3M</td><td></td></tr><tr><td>PinPorts, 22 G</td><td>Instech</td><td>PNP3F22-50</td><td>Serve para C30PU-RJV1307</td></tr><tr><td>PinPorts, 25 G</td><td>Instech</td><td>PNP3F25-50</td><td>Compatível com C20PU-MJV1301</td></tr><tr><td>Desoxicolato de sódio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D6750</td><td></td></tr><tr><td>Seringa estéril, 5 mL</td><td>Triton</td> X-100 Genérico <td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>Sigma-Aldrich</td><td>9036-19-5</td><td></td></tr><tr><td>CULTURA</td><td></td><td></td><td></td>DE CÉLULAS</tr><tr><td>EGM-2 Meio de Crescimento de Células Endoteliais-2 BulletKit Lonza</td><td></td><td>CC-3162</td><td></td></tr><tr><td>HUVEC - ndash; Células endoteliais da veia umbilical humana</td><td>Lonza</td><td>C2519A</td><td></td></tr><tr><td>BIORREATOR BASEADO EM PERFUSÃO Agulha</td><td></td><td></td><td></td></tr> de <tr><td>20 G</td><td>Torneira genérica</td><td></td><td></td></tr><tr><td>de 3 vias</td><td>Broca de</td> cortiça genérica <td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>Tamanho</td><td></td><td>genérico do furo, cabeça de</td></tr><tr><td>bomba EasyLoad III</td> de 6-10 mm <td>Cole-Parmer</td><td>243934</td><td></td></tr><tr><td>Glass recipiente</td><td>Hario</td><td>SCN-200T</td><td>Diâmetro interno: 80 mm</td></tr><tr><td>Agitador magnético de aquecimento</td><td>Encaixe de</td> isca genérico<td></td><td></td></tr><tr><td>, PVDF, Para Tubo Macio</td><td>Nordson Medical</td><td>2-9965-01</td><td>Fêmea, encaixa tubulação com ID 1,5 mm (L/S 14)</td></tr><tr><td>Encaixe de isca, PVDF, Para Tubo Macio</td><td>Nordson Medical</td><td>2-9964-01</td><td>Macho, encaixa tubos com ID 1,5 mm (L/S 14)</td></tr><tr><td>Encaixe de isca, PVDF, Para Tubo Macio</td><td>Nordson Medical</td><td>2-9965-03</td><td>Fêmea, se encaixa em tubulação com ID 3 mm (L / S 16)</td></tr> <tr><td>Encaixe de isca, PVDF, Para tubo macio</td><td>Nordson Medical</td><td>2-9964-03</td><td>Macho, se encaixa em tubos com ID 3 mm (L / S 16)</td></tr> <tr><td>Barra de agitação magnética</td><td>Genérico</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Masterflex L / S Digital Precision Modular Drive com E/S Remota e Controlador de Bancada</td><td>Cole-Parmer</td><td>07557-00</td><td></td></tr><tr><td>Tubulação de Bomba de Precisão Masterflex L/S, PharMed BPT, L/S 16</td><td>Cole-Parmer</td><td>06508-16</td><td></td></tr><tr><td>Masterflex L/S Tubulação de Bomba de Precisão, Silicone Curado com Platina, L/S 14</td> Unidade de Filtro de Seringa <td>Millex-GP Cole-Parmer</td><td>96410-14</td><td></td></tr><tr><td>, 0.22 &micro; m, polietersulfona, 33 mm, esterilizado por gama</td><td>Millipore</td><td>SLGPR33RS</td><td></td></tr><tr><td>Pyrex 250 mL frasco de grama, tampa de rosca GL-45</td><td>Corning</td><td>1395-250</td><td></td></tr><tr><td>Septos de silício para GL45 Tampa de rosca PBT aberta</td><td>Corning</td><td>1395-455S</td><td></td></tr><tr><td>Rolha de luz de silicone</td><td>IMG</td><td>07763-18</td><td>Diâmetro superior: 87 mm, Diâmetro inferior: 75 mm</td></tr><tr><td>Seringa estéril, 10 mL, 50 mL</td><td>Genérico</td><td></td><td></td></tr><tr><td>CIRURGIA DE CAMUNDONGO (Isolamento do bloqueio coração-pulmão | Transplante de pulmão)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>10-0 Gravatas de nylon</td><td>Kono Seisakusho</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>10-0 Gravatas de seda</td><td>Kono Seisakusho</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>4-0 Gravatas de seda</td><td>Kono Seisakusho</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Grampo arterial, 45 mm curvo, ranhurado</td><td>Natsume seisakusyo</td><td>C-17-45</td><td></td></tr><tr><td>BD Insyte IV Cateter 24GA</td><td>BD</td><td>381512</td><td>Ou equivalente 24G i.v. cateter</td></tr><tr><td>Bulldog Vascular Forceps 45mm curvado</td><td>Natsume seisakusyo</td><td>M2</td><td></td></tr><tr><td>Tartarato de Butorfanol&nbsp;</td><td>Meiji Seika Pharma</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Cefazolina de Sódio</td><td>Otsuka Pharmaceutical</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Pinça Dumont #5/45</td><td>Fine Science Tools</td><td>1251-35</td><td></td></tr><tr><td>Tesoura de mola estilo vannas fina</td><td>Ferramentas de Ciência Fina</td><td>15403-08</td><td>45&deg; ponta, 0.01 x 0.06 mm</td></tr><tr><td>Gemini Cautery Kit</td><td>Harvard Apparatus</td><td>RS-300</td><td></td></tr><tr><td>Ponta curva de grampo Halsted-Mosquito, centro de</td><td>biopesquisa</td><td>de</td> 125 mm 16181670 <td></td></tr><tr><td>porta-agulha Hegar, 150 mm</td><td>B Braun / Aesculap</td><td>BM065R</td><td></td></tr><tr><td>Solução de heparina</td><td>Mochida Seiyaku</td><td>N / A</td><td></td></tr><tr><td>Medetomidina</td><td>Nippon Zenyaku Kogyo</td><td>N / A</td><td></td></tr><tr><td>Micro fórceps reto</td><td>B Braun / Aesculap</td><td>BD33R</td><td></td></tr><tr><td>Midazolam</td>Ventilador de Mouse <td>Sandoz</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Modelo de Aparelho Harvard</td><td>687&trade;</td><td></td></tr><tr><td>Solução salina normal, placa</td> de Petri <td>farmacêutica Otsuka</td> N<td>/A</td><td></td>de grau clínico</tr><tr><td>, 60 x 15 mm</td><td>BD</td><td>351007</td><td></td></tr><tr><td>Safelet Cath PU 20 calibre cateter de poliuretano</td><td>Nipro</td><td>09-031</td><td></td></tr><tr><td>Tesoura inoxidável Sakaki curvada 14 cm</td><td>Centro de pesquisa</td><td>64152034</td><td></td></tr><tr><td>Suporte para bisturi</td> Centro de <td>pesquisa biológica</td><td>16101040</td><td></td></tr><tr><td>Sistema de retração de pequenos animais</td><td>Fine Science Tools</td><td>18200-20</td><td></td></tr><tr><td>Bisturi de lâmina sobressalente #11</td><td>Muranaka Medical Instruments</td><td>567-001-03</td><td></td></tr><tr><td>Tesoura de mola, 15 cm</td><td>Centro de biopesquisa</td><td>PRI13-3736</td><td></td></tr><tr><td>Estereomicroscópio</td><td>Leica Microsystems</td><td>M525</td><td>Microscópio cirúrgico de grau clínico com um sistema de braço flexível é preferível.</td></tr><tr><td>Clipe de aneurisma de titânio Sugita curvo fino, No.98</td><td>Mizuho medical</td><td>17-001-98</td><td></td></tr><tr><td>Aplicador de clipe de titânio Sugita, 110 mm</td><td>Mizuho medical</td><td>17-013-53</td><td></td></tr><tr><td>Aquecedor elétrico de temperatura ajustável</td><td>Genérico</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cotonete ultrafino</td><td>Genérico</td><td></td><td></td></tr><tr><td>MANGUITO</td><td></td><td></td><td></td>VASCULAR E BRÔNQUICO</tr><tr><td>Fino lixa</td><td>Genérico</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Venula 20 gauge Teflon angiocatheter</td><td>Top</td><td>1160</td><td></td></tr><tr><td>Venula 22 gauge Teflon angiocatheter</td><td>Top</td><td>1161</td><td></td></tr><tr><td>Venula 24 gauge Teflon</td><td>angiocatheter Top</td><td>1124</td><td></td></tr></tbody></table>

transplante de pulmão de bioengenharia usando pulmões de camundongos descelularizados e células endoteliais humanas primárias

Transplantation of Bioengineered Lung Using Decellularized Mouse Lungs and Primary Human Endothelial Cells

Seguindo o protocolo de descelularização, os pulmões dos camundongos são visivelmente brancos e translúcidos (Figura 6A). Os componentes celulares devem ser totalmente removidos, mas a estrutura alveolar permanece intacta na observação histológica (Figura 6B,C). Pulmões de camundongos recelularizados usando 3 × 107 HUVECs com cultura de biorreator baseada em perfusão de 2 dias mostram uma distribuição homogênea de HUVECs ( <strong cla...

Transplante de Pulmão de Bioengenharia Usando Pulmões de Camundongos Descelularizados e Células Endoteliais Humanas Primárias

Lung transplantation is a critical treatment for patients with end-stage lung diseases like idiopathic pulmonary fibrosis, but challenges such as donor ...

transplantation-bioengineered-lung-using-decellularized-mouse-lungs

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Bioengenharia

Nós desenvolvemos uma matriz extracelular e de pulmão decelularizado biorreator romance biomimético que pode ser usado para gerar tecido pulmonar funcional. Por semeadura de células na matriz e cultura no biorreator, geramos tecido que demonstra a troca gasosa eficaz quando transplantadas in vivo por curtos períodos de tempo.

Procedimento para a Engenharia de pulmão

A descelularização de órgãos inteiros produz andaimes biológicos naturais que podem ser usados para medicina regenerativa. A descrição de um modelo de regeneração pulmonar de primatas não humanos em que pulmões inteiros são descelularizados e depois semeados com células-tronco adultas e células endoteliais em um biorreator que facilita a circulação vascular e a ventilação em meio líquido é apresentada.

Descelularização e recelularização pulmonar de primatas não humanos usando um biorreator especializado de órgãos grandes

De modo a compreender os mecanismos celulares e moleculares subjacentes neotissue formação e desenvolvimento de estenose em válvulas cardíacas de engenharia de tecidos, foi desenvolvido um modelo murino de transplante heterotópico de válvula cardíaca. A válvula cardíaca pulmonar foi transplantado para destinatário usando o coração técnica de transplante heterotópico.

O transplante de válvula pulmonar Usando um modelo do rato de Heterotópica Transplante de Coração

A recapitulação do microambiente órgão-específico, que estimula a angiogênese local, é indispensável para a regeneração bem-sucedida dos tecidos danificados. Este relatório demonstra um novo método para implantar géis de fibrina na superfície pulmonar de camundongos vivos, a fim de explorar como o microambiente específico do pulmão modula a angiogênese e a regeneração alveolar em camundongos adultos.

Implantação de fibrina Gel no tapete do pulmão para o Estudo de angiogênese Lung-specific

Aqui, apresentamos um protocolo para gerar engenharia de tecidos enxertos de vasos que são funcionais para enxerto em camundongos por semeadura dupla parcialmente célula-tronco pluripotentes induzidas (PPCPE) - derivados de células musculares lisas e PPCPE - células endoteliais derivadas em um biorreator descelulada navio andaime.

Geração e Alongamento das embarcações da engenharia de tecidos em um modelo de rato

Este protocolo eficiente dirige rato estaminais embrionárias endoderme definitivo de células-derivadas para amadurecer as células epiteliais das vias respiratórias. Esta técnica utiliza a diferenciação 3-dimensionais andaimes pulmonares descelularizados para dirigir especificação das linhagens celulares de pulmão, em, uma configuração de cultura isento de soro definido.

Geração de células de camundongo Airway epiteliais derivados de ESC Usando descelularizado Lung Scaffolds

Este protocolo descreve um método para gerar tecidos pulmonares projetíveis, de pequena escala, repovoando fatias pulmonares descelularizadas cortadas com células epiteliais tipo 2 alveolares, fibroblastos e células endoteliais.

Tecidos pulmonares projetados preparados a partir de fatias pulmonares descelularizadas

Neste artigo, células endoteliais primárias do pulmão foram isoladas e cultivadas de camundongos neonatais.

Isolamento de Células Endoteliais Primárias de Pulmão de Camundongo

Apresenta-se um protocolo para o isolamento de tecido pulmonar decelularizado regional. Este protocolo fornece uma ferramenta poderosa para o estudo de complexidades na matriz extracelular e interações célula-matriz.

Dissecção e Isolamento de Tecido Pulmonar Descelularizado Regional-Específico

Aqui, apresentamos um protocolo para obter imagens intravitais do pulmão esquerdo de camundongo transplantado usando microscopia de dois fótons. Isso representa uma ferramenta valiosa para estudar a dinâmica e as interações celulares em tempo real após o transplante de pulmão murino.

Microscopia intravital de dois fótons do pulmão de camundongo transplantado

Aprenda a bioengenharia de pulmões usando camundongos descelularizados e células endoteliais humanas primárias. Este protocolo padronizado permite pesquisa escalável em transplante de órgãos.

Transplante de Pulmão de Bioengenharia Usando Pulmões de Camundongos Descelularizados e Células Endoteliais Humanas Primárias

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