Procedimento de implante cirúrgico e configuração de fiação para monitoramento contínuo de EEG/ECG de longo prazo em coelhos

Usando registros contínuos de EEG e ECG, o objetivo do estudo é monitorar simultaneamente a atividade elétrica no cérebro e no coração. Isso fornece uma plataforma para nos permitir examinar a cascata multissistêmica de eventos que cercam arritmias cardíacas, crises epilépticas e, finalmente, levam à morte súbita. Este sistema de registro adquire EEGs e ECGs 24 horas por dia, 7 dias por semana, de vários coelhos não contidos durante vários estados fisiológicos e eventos episódicos raros circundantes.

Ele facilita gravações contínuas sem a necessidade de supervisão direta, é acessível, fornece dados imediatos diretamente ao pesquisador e não requer a substituição de baterias de terceiros. O desenvolvimento de uma configuração de gravação personalizada e com fio foi construído para facilitar o coelho a se mover livremente em seu ambiente natural. Os fios são envoltos para protegê-los de serem mordidos.

Assim, o chicote de fios e o tunelamento de todos os eletrodos sob a pele permitem registros contínuos durante vários estados fisiológicos. Com nosso sistema, acumulamos uma grande quantidade de dados de alta qualidade que nos permitem investigar a prevalência, o substrato e os gatilhos da atividade elétrica anormal no cérebro e no coração. Também nos permite avaliar a concordância entre as anormalidades do EEG e do ECG, que podem levar à morte súbita.

Para começar, obtenha o plugue complementar para a porta alon com o giro retendo nove fios pré-conectados de cada lado. Usando alicates, apare os fios em cinco centímetros no lado giratório menor e retire cinco milímetros do revestimento do fio das extremidades. Deslize um pedaço de dois centímetros de um pequeno tubo retrátil sobre cada fio do plugue complementar.

Solde bem os fios. Para cada fio, deslize o tubo retrátil sobre as conexões soldadas. Usando uma pistola de ar quente, encolha o tubo para fixá-lo firmemente no lugar.

Em seguida, passe um longo pedaço de tubo retrátil grande sobre o plugue, deslizando-o para cobrir todo o comprimento do feixe de fios. No lado giratório maior, retire cinco milímetros de revestimento de arame da extremidade de cada fio usando um descascador de fios e deslize um pedaço de revestimento de metal com mais de 45 centímetros de comprimento sobre o feixe de arame. Em seguida, conecte os fios do lado maior do giro aos fios do eletrodo cortado.

Fixe um pequeno tubo retrátil sobre cada conexão e use uma pistola de calor para prender o tubo no lugar. Agora deslize o revestimento de metal sobre os fios recém-conectados e gire. Depois de esticar o revestimento de metal, marque o local no revestimento de náilon para referência.

Em seguida, deslize um pedaço de um centímetro de tubo de borracha de 15 milímetros de diâmetro externo sobre o revestimento de náilon e o feixe de arame. Coloque um pedaço de três centímetros de tubo retrátil grande sobre o tubo de borracha e fixe-o. Adicione dois pedaços de tubo termorretrátil de um centímetro de comprimento sobre o revestimento de metal não esticado a distâncias de 20 e 24 centímetros do plugue.

Para começar, monte todo o chicote de fios necessário para o procedimento. Depois de posicionar o coelho anestesiado, faça quatro pequenas marcas usando um marcador de ponta estéril nos locais de eletrocardiograma ou eletrodo de ECG pretendidos. Faça uma incisão longitudinal medindo 2,5 a 3,5 centímetros no flanco direito do coelho.

Usando hemostáticos, realize a dissecção ventralmente para criar uma bolsa subdérmica, garantindo que a bolsa se estenda para os quatro locais marcados. Usando a extremidade sem agulha da sutura de monofilamento 3-0, amarre três conjuntos de nós cirúrgicos ao redor da base do eletrodo de ECG. Passe a agulha presa ao eletrodo de ECG pela bolsa subdérmica e saia no local marcado correspondente.

Aplique tração suave para posicionar o eletrodo de ECG no local marcado. Solte a tração e palpe a área para verificar se o eletrodo permanece no lugar. Para prender o eletrodo, passe a sutura de monofilamento 3-O e a agulha pela pele do coelho adjacente ao local de saída do eletrodo.

Puxe a sutura parcialmente através da pele e dê um nó cirúrgico padrão. A partir da incisão no flanco do coelho, disseque sem corte em direção ao ângulo inferior das escápulas e depois à base da cabeça. Depois de virar o coelho para uma posição de bruços, use um marcador de ponta estéril para colocar cinco pequenos pontos nos locais de eletroencefalograma ou eletrodo de EEG pretendidos.

Faça uma pequena incisão transversal na cabeça medindo 1,5 centímetros entre os aspectos anteriores da base das orelhas. Sem rodeios, disseque caudal e cranialmente a partir da incisão até formar uma bolsa subdérmica. Insira uma pinça grande na incisão no flanco antes de abrir a pinça e levantar a pele no local marcado para a porta.

Usa uma ferramenta de biópsia por punção de seis milímetros para criar um orifício circular no local marcado. Depois de cobrir o plugue do fio com plástico ou borracha, empurre o lado do plugue da porta através do orifício feito pela biópsia por punção. Em seguida, pressione a pele até a base da porta para que fique esticada.

Coloque uma junta de borracha sobre a porta e empurre-a para baixo até que fique nivelada com a pele. Coloque o excesso de fio no bolso subdérmico nas costas e no flanco. Agora, junte suavemente a pele e feche todos os locais de incisão usando pontos simples interrompidos.

Aplique uma mistura acrílica na parte externa da porta, criando uma pequena cúpula que veda o local da porta na pele. Depois que o acrílico solidificar, coloque gaze estéril sobre o local da incisão no flanco e enrole o coelho frouxamente com filme veterinário. Passe o chicote de fios por um orifício localizado na parte superior central da gaiola do coelho.

Conecte os conectores DIN no dispositivo de monitoramento apropriado e fixe um cabo retrator na parte superior interna da gaiola perto do orifício para o chicote de fios. Estenda o fio do cabo retrator que tem um clipe de plástico na extremidade e prenda o clipe ao chicote de fios no local entre as duas peças do tubo retrátil. Por fim, conecte o plugue do chicote de fios ao plugue nas costas do coelho e registre o sinal do dispositivo de monitoramento.

Sinais estáveis de EEG e ECG foram registrados em um coelho de três meses de idade usando eletrodos implantados cronicamente que mantiveram seu posicionamento sem rejeição ou infecção. Observou-se que dados de alta resolução da variabilidade da frequência cardíaca e métricas cardíacas circulam a cada 30 minutos. Os sinais de EEG e ECG capturados durante a preparação demonstraram estabilidade robusta do sinal, apesar do movimento do coelho manter alta qualidade de sinal para análise.

A administração de drogas pró-convulsivantes induziu explosões distintas nas derivações occipitais do EEG, que foram registradas juntamente com sinais normais de ECG do ritmo sinusal. Doses mais altas do pró-convulsivante desencadearam convulsões, com EEG mostrando explosões pré-ictal, artefatos crônicos e sinais do período tônico ictal. O ECG demonstrou anormalidades da onda T indicativas de hipóxia durante o período tônico ictal, retornando à normalidade pré-ictal após a convulsão.