Name: Avaliação da fagocitose microglial de detritos de mielina in vitro sob estimulação magnética repetida (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-06-17T13:20:00.000+00:00
Duration: 8 min 34 s
Description: Aprenda a avaliar a fagocitose microglial de detritos de mielina in vitro sob estimulação magnética repetida. Este método demonstra potencial terapêutico para neuro-reabilitação e recuperação neural.

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<ol><li>Osso, L. A., Hughes, E. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamics+of+mature+myelin%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Dynamics of mature myelin.</a> Nat Neurosci. 27 (8), 1449-1461 (2024).</li>
<li>Gao, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myelin+debris+phagocytosis+in+demyelinating+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Myelin debris phagocytosis in demyelinating disease.</a> Glia. 72 (11), 1934-1954 (2024).</li>
<li>Kopper, T. J., Gensel, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myelin+as+an+inflammatory+mediator%3A+Myelin+interactions+with+complement%2C+macrophages%2C+and+microglia+in+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Res%22%5BJournal%5D)">Myelin as an inflammatory mediator: Myelin interactions with complement, macrophages, and microglia in spinal cord injury.</a> J Neurosci Res. 96 (6), 969-977 (2018).</li>
<li>Yu, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phagocytic+microglia+and+macrophages+in+brain+injury+and+repair%5BTitle%5D)+AND+%22CNS+Neurosci+Ther%22%5BJournal%5D)">Phagocytic microglia and macrophages in brain injury and repair.</a> CNS Neurosci Ther. 28 (9), 1279-1293 (2022).</li>
<li>Filbin, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myelin-associated+inhibitors+of+axonal+regeneration+in+the+adult+mammalian+CNS%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Myelin-associated inhibitors of axonal regeneration in the adult mammalian CNS.</a> Nat Rev Neurosci. 4 (9), 703-713 (2003).</li>
<li>Sen, M. K., Mahns, D. A., Coorssen, J. R., Shortland, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+roles+of+microglia+and+astrocytes+in+phagocytosis+and+myelination%3A+Insights+from+the+cuprizone+model+of+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">The roles of microglia and astrocytes in phagocytosis and myelination: Insights from the cuprizone model of multiple sclerosis.</a> Glia. 70 (7), 1215-1250 (2022).</li>
<li>Jia, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+microglial+phagocytosis+in+ischemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">The role of microglial phagocytosis in ischemic stroke.</a> Front Immunol. 12, 790201(2021).</li>
<li>Kettenmann, H., Hanisch, U. K., Noda, M., Verkhratsky, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physiology+of+microglia%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Rev%22%5BJournal%5D)">Physiology of microglia.</a> Physiol Rev. 91 (2), 461-553 (2011).</li>
<li>Shen, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophil+nanovesicle+protects+against+experimental+autoimmune+encephalomyelitis+through+enhancing+myelin+clearance+by+microglia%5BTitle%5D)+AND+%22ACS%22%5BJournal%5D)">Neutrophil nanovesicle protects against experimental autoimmune encephalomyelitis through enhancing myelin clearance by microglia.</a> ACS. 16 (11), 18886-18897 (2022).</li>
<li>Cignarella, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TREM2+activation+on+microglia+promotes+myelin+debris+clearance+and+remyelination+in+a+model+of+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathol%22%5BJournal%5D)">TREM2 activation on microglia promotes myelin debris clearance and remyelination in a model of multiple sclerosis.</a> Acta Neuropathol. 140 (4), 513-534 (2020).</li>
<li>Dufor, T., Lohof, A. M., Sherrard, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Magnetic+stimulation+as+a+therapeutic+approach+for+brain+modulation+and+repair%3A+Underlying+molecular+and+cellular+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Magnetic stimulation as a therapeutic approach for brain modulation and repair: Underlying molecular and cellular mechanisms.</a> Int J Mol Sci. 24 (22), 16456(2023).</li>
<li>Martin, D. M., McClintock, S. M., Forster, J. J., Lo, T. Y., Loo, C. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cognitive+enhancing+effects+of+rTMS+administered+to+the+prefrontal+cortex+in+patients+with+depression%3A+A+systematic+review+and+meta-analysis+of+individual+task+effects%5BTitle%5D)+AND+%22Depress+Anxiety%22%5BJournal%5D)">Cognitive enhancing effects of rTMS administered to the prefrontal cortex in patients with depression: A systematic review and meta-analysis of individual task effects.</a> Depress Anxiety. 34 (11), 1029-1039 (2017).</li>
<li>Kamo, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Repetitive+peripheral+magnetic+stimulation+for+impairment+and+disability+in+people+after+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Cochrane+Database+Syst+Rev%22%5BJournal%5D)">Repetitive peripheral magnetic stimulation for impairment and disability in people after stroke.</a> Cochrane Database Syst Rev. 9 (9), CD011968(2022).</li>
<li>Wang, Y., Wang, L., Ni, X., Jiang, M., Zhao, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficacy+of+repetitive+transcranial+magnetic+stimulation+with+different+application+parameters+for+post-stroke+cognitive+impairment%3A+A+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Fron+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Efficacy of repetitive transcranial magnetic stimulation with different application parameters for post-stroke cognitive impairment: A systematic review.</a> Fron Neurosci. 18, 1309736(2024).</li>
<li>Chu, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcranial+magneto-acoustic+stimulation+attenuates+synaptic+plasticity+impairment+through+the+activation+of+Piezo1+in+alzheimer%27s+disease+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Research%22%5BJournal%5D)">Transcranial magneto-acoustic stimulation attenuates synaptic plasticity impairment through the activation of Piezo1 in alzheimer's disease mouse model.</a> Research. 6, 0130(2023).</li>
<li>Zhai, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Repeated+trans-spinal+magnetic+stimulation+promotes+microglial+phagocytosis+of+myelin+debris+after+spinal+cord+injury+through+LRP-1%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Repeated trans-spinal magnetic stimulation promotes microglial phagocytosis of myelin debris after spinal cord injury through LRP-1.</a> Exp Neurol. 379, 114844(2024).</li>
<li>Qin, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Repetitive+transcranial+magnetic+stimulation+ameliorates+cognitive+deficits+in+mice+with+radiation-induced+brain+injury+by+attenuating+microglial+pyroptosis+and+promoting+neurogenesis+via+BDNF+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Comm+Signal%22%5BJournal%5D)">Repetitive transcranial magnetic stimulation ameliorates cognitive deficits in mice with radiation-induced brain injury by attenuating microglial pyroptosis and promoting neurogenesis via BDNF pathway.</a> Cell Comm Signal. 22 (1), 216(2024).</li>
<li>Qian, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+and+astrocytes+responses+contribute+to+alleviating+inflammatory+damage+by+repetitive+transcranial+magnetic+stimulation+in+rats+with+traumatic+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Neurochem+Res%22%5BJournal%5D)">Microglia and astrocytes responses contribute to alleviating inflammatory damage by repetitive transcranial magnetic stimulation in rats with traumatic brain injury.</a> Neurochem Res. 49 (9), 2636-2651 (2024).</li>
<li>Luo, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Repetitive+transcranial+magnetic+stimulation+improves+neurological+function+and+promotes+the+anti-inflammatory+polarization+of+microglia+in+ischemic+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Repetitive transcranial magnetic stimulation improves neurological function and promotes the anti-inflammatory polarization of microglia in ischemic rats.</a> Front Cell Neurosci. 16, 878345(2022).</li>
<li>Jannati, A., Oberman, L. M., Rotenberg, A., Pascual-Leone, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+the+mechanisms+of+brain+plasticity+by+transcranial+magnetic+stimulation%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropsychopharmacol%22%5BJournal%5D)">Assessing the mechanisms of brain plasticity by transcranial magnetic stimulation.</a> Neuropsychopharmacol. 48 (1), 191-208 (2023).</li>
<li>Luo, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intermittent+theta-burst+stimulation+improves+motor+function+by+inhibiting+neuronal+pyroptosis+and+regulating+microglial+polarization+via+TLR4%2FNF%CE%BAB%2FNLRP3+signaling+pathway+in+cerebral+ischemic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuroinflammat%22%5BJournal%5D)">Intermittent theta-burst stimulation improves motor function by inhibiting neuronal pyroptosis and regulating microglial polarization via TLR4/NFκB/NLRP3 signaling pathway in cerebral ischemic mice.</a> J Neuroinflammat. 19 (1), 141(2022).</li>
<li>Eichler, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglial+cytokines+mediate+plasticity+induced+by+10+Hz+repetitive+magnetic+stimulation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Microglial cytokines mediate plasticity induced by 10 Hz repetitive magnetic stimulation.</a> J Neurosci. 43 (17), 3042-3060 (2023).</li>
<li>Kent, S. A., Miron, V. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+regulation+of+central+nervous+system+myelin+health+and+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Microglia regulation of central nervous system myelin health and regeneration.</a> Nat Rev Immunol. 24 (1), 49-63 (2024).</li>
<li>Yong, V. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+in+multiple+sclerosis%3A+Protectors+turn+destroyers%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Microglia in multiple sclerosis: Protectors turn destroyers.</a> Neuron. 110 (21), 3534-3548 (2022).</li>
<li>Sarlus, H., Heneka, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+in+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Microglia in Alzheimer's disease.</a> J Clin Invest. 127 (9), 3240-3249 (2017).</li>
<li>Cantuti-Castelvetri, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defective+cholesterol+clearance+limits+remyelination+in+the+aged+central+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Defective cholesterol clearance limits remyelination in the aged central nervous system.</a> Science. 359 (6376), 684-688 (2018).</li>
<li>Norton, W. T., Poduslo, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myelination+in+rat+brain%3A+Method+of+myelin+isolation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Myelination in rat brain: Method of myelin isolation.</a> J Neurochem. 21 (4), 749-757 (1973).</li>
<li>Gordon, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phagocytosis%3A+An+immunobiologic+process%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Phagocytosis: An immunobiologic process.</a> Immunity. 44 (3), 463-475 (2016).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Meio de montagem antidesbotamento com DAPI</td><td>Beyotime, China</td><td>P0131</td><td></td></tr><tr><td>BCA Kit</td><td>ThermoFisher Scientific, América</td><td>23227</td><td></td></tr><tr><td>Célula Bv-2</td><td>ATCC</td><td>CBP60922</td><td></td></tr><tr><td>Placas de 12 poços de cultura de células</td><td>Biofil, China</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Placas de 24 poços de cultura de células</td><td>Biofil, China</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Varredura a laser confocal Microscópio</td><td>Zeiss, Alemanha</td><td>800</td><td></td></tr><tr><td>Incubadora de temperatura constante</td><td>ThermoFisher Scientific, América</td><td></td><td></td></tr><tr><td>CFSE</td><td>MedChemExpress, América</td><td>HY-158820</td><td></td></tr><tr><td>DMEM-Meio de cultura</td><td>KeyGen, China</td><td>KGL1202-500</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>Gibco, América</td><td>16250078</td><td></td></tr><tr><td>Iba1</td><td>Abcam, América</td><td>ab48004</td><td></td></tr><tr><td>Aparelho de estimulação magnética</td><td>Yiruide, China</td><td>CCY-IA</td><td></td></tr><tr><td>Bobina de estimulação magnética</td><td>Yiruide, China</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldeído</td><td>BioSharp, China</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>KeyGen, China</td><td>KGL2210-500</td><td></td></tr><tr><td>Penicilina-Estreptomicina</td><td>Gibco, América</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>Sacarose</td><td>MedChemExpress, América</td><td>HY-B1779</td><td></td></tr><tr><td>Tripsina</td><td>KeyGen, China</td><td>KGL2107-100</td><td></td></tr><tr><td>Ultracentrífuga</td><td>Beckman, América</td><td>L-100XP</td><td></td></tr></tbody></table>

avaliação da fagocitose microglial de detritos de mielina in vitro sob estimulação magnética repetida

Assessing Microglial Phagocytosis of Myelin Debris in vitro Under Repeated Magnetic Stimulation

Neste estudo, inicialmente alimentamos células de microglia BV-2 in vitro , extraindo detritos de mielina derivados do cérebro e utilizando estimulação magnética repetitiva para aumentar sua capacidade fagocítica. Posteriormente, as células da microglia BV-2 foram cultivadas e submetidas à intervenção LPS antes da estimulação magnética, emulando assim o estado in vivo da microglia sob rigorosa validação neurológica. Posteriormente, a intervenção rMS foi aplicada após a estimulação do LPS. Para validar a...

Avaliação da fagocitose microglial de detritos de mielina in vitro sob estimulação magnética repetida

Microglia, the resident phagocytes of the central nervous system (CNS), play a pivotal role in maintaining CNS integrity and homeostasis by removing ...

assessing-microglial-phagocytosis-myelin-debris-vitro-under-repeated

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurociência

Microglia residem macrófagos que fornecem a primeira linha de defesa e vigilância imune do sistema nervoso central. MicroRNAs são moléculas reguladoras, que desempenham um papel importante em muitos processos fisiológicos, incluindo a activação e diferenciação dos macrófagos. Neste artigo, descrevemos o método para a medição de microRNAs em microglia.

Detecção de MicroRNAs em Microglia por PCR em tempo real no SNC normal e durante Neuroinflammation

Este vídeo demonstra um protocolo para extrair células microgliais de lesões desmielinizantes em cérebros de camundongos usando classificação magnética de células. O protocolo envolve a dissecação do tecido cerebral lesionado contendo células microgliais, o tratamento do tecido com enzimas específicas para obter uma suspensão unicelular e a utilização de esferas magnéticas específicas do receptor microglial para isolar as células microgliais.

Isolando a microglia de lesões desmielinizantes do cérebro de camundongos usando classificação de células ativadas por magnetismo

Microglia são as células do sistema imunológico residentes do sistema nervoso central (SNC), com uma elevada capacidade de fagocitar ou engolir o material no seu ambiente extracelular. Aqui, um ensaio amplamente aplicável, confiável e altamente quantitativa para visualizar e medir engulfment mediada por microglia de componentes sinápticas é descrito.

Uma imersão Ensaio: Um protocolo para avaliar Interações entre CNS fagócitos e Neurônios

fagocitose microglial é crítica para a manutenção da homeostase do tecido e da função fagocítica inadequada tem sido implicada na patologia. No entanto, a avaliação da função microglia in vivo é tecnicamente desafiador. Nós desenvolvemos uma técnica simples, mas robusta para monitorar com precisão e quantificar o potencial fagocítica da microglia em um ambiente fisiológico.

Avaliando Retinal microglia fagocítica Função<em&gt; In Vivo</em&gt; Usando um ensaio baseado em citometria de fluxo

Aqui, nós apresentamos um protocolo para isolar microglia de crias de rato pós-natais (dia 1) para experimentação in vitro. Este método improvisada de isolamento gera tanto rendimento e pureza elevados, uma vantagem significativa em relação aos métodos alternativos que permite a ampla gama de experimentação para efeitos de elucidação da biologia da microglia.

Isolamento magnético rápido e refinado CD11b da Primária Microglia com pureza e versatilidade

Apresentamos métodos para avaliar a capacidade fagocitária de primários macrófagos murino derivadas da medula óssea, usando os restos de mielina fluorescente etiquetadas e lipídios intracelulares da gota mancha.

In Vitro Fagocitose de restos de mielina por macrófagos derivados de medula óssea

Doenças neurodegenerativas estão associadas a funções de microglia disreguladas. Este artigo descreve um ensaio in vitro de fagocitose de células neuroblastoma por macrófagos iPSC. As leituras quantitativas de microscopia são descritas tanto para imagens de lapso de tempo de células vivas quanto para imagens de alto conteúdo de células fixas.

Ensaio de imagem quantitativa in vitro para fagocitose de células de neuroblastoma morto por iPSC-Macrófagos

Culturas primárias de micróglias são comumente usadas para avaliar novas moléculas anti-inflamatórias. O presente protocolo descreve um método reprodutível e relevante para isolar magneticamente a micróglia de filhotes recém-nascidos.

Isolamento Magnético de Células Microgliais de Rato Neonato para Culturas Celulares Primárias

Aqui, apresentamos um protocolo para isolar e purificar a microglia primária em modelos animais de doenças desmielinizantes, utilizando a triagem celular ativada por colunas magnéticas.

Isolamento da Microglia Primária do Rato por Triagem celular ativada por magnético em modelos animais de desmielinização

Aqui apresentamos dois protocolos para quantificar o engolfamento microglial de sinapses positivas para vGLUT1 e sinaptossomos brutos marcados com pHRodo Red usando citometria de fluxo.

Quantificação do engolfamento microglial de material sináptico usando citometria de fluxo

Descrevemos um protocolo para isolar células microgliais do hipotálamo de camundongo (ou pequenas estruturas cerebrais equivalentes) usando classificação de células ativadas magneticamente (MACS), em um tempo relativamente curto. A microglia hipotalâmica classificada por MACS pode ser usada para análise ex vivo e pode ser plaqueada para realizar ensaios in vitro .

Isolamento da microglia hipotalâmica do cérebro de camundongo adulto recém-perfundido por classificação de células ativadas por magnetismo  

Aprenda a avaliar a fagocitose microglial de detritos de mielina in vitro sob estimulação magnética repetida. Este método demonstra potencial terapêutico para neuro-reabilitação e recuperação neural.

Avaliação da fagocitose microglial de detritos de mielina in vitro sob estimulação magnética repetida

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