Name: Crioseccionamento e imunocoloração do tecido do ouvido interno de camundongos: dos estágios embrionário ao adulto (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-04-11T13:40:00.000+00:00
Duration: 9 min 9 s
Description: Aprenda a preparar amostras de orelha interna de camundongos em diferentes estágios do desenvolvimento para imunocoloração. Este protocolo de crioseccionamento preserva estruturas cocleares e auxilia pesquisadores iniciantes em ciências auditivas.

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</ol>

<table><tbody><tr><td>Chemicals</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Thermo Fisher Scientific, Inc.</td><td>BP151-500</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Corning, Inc.</td><td>46-013-CM</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Sigma-Aldrich, LLC.</td><td>60-00-4</td><td></td></tr><tr><td>Sacarose</td><td>VWR International, Inc.</td><td>97061-432</td><td></td></tr><tr><td>Azida sódica&nbsp;</td><td>Amresco, Inc.</td><td>0639-250G</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldeído</td><td>Microscopia Eletrônica</td><td>Ciências 15714</td><td></td></tr><tr><td>Etanol</td><td>Decon Labs, Inc.</td><td>v1001</td><td></td></tr><tr><td>Dimetilbutano&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific, Inc.</td><td>19387-AP</td><td></td></tr><tr><td>Composto de temperatura de corte ideal (OCT)</td><td>VWR International, Inc.</td><td>25608-930</td><td></td></tr><tr><td>Equipamento específico</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cryostat</td><td>Thermo Fisher Scientific, Inc.</td><td>14-071-459</td><td></td></tr> Pinça de Disecção Caneta de Barreira Hidrofóbica Peroxidase-Antiperoxidase (PAP) <tr><td></td><td>da Electroscopy Sciences</td><td>72700-DZ</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp;</td><td>Laboratórios Vector, Inc.</td>Microscópio Confocal <td>H-4000</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Carl Zeiss Microscopy, LLC.</td><td>Micropipeta LSM 880</td><td></td></tr><tr><td>P20</td><td>Gilson, Inc.</td><td></td><td></td>F144056M</tr><tr><td>Tesoura de dissecção</td><td>Thermo Fisher Scientific, Inc.</td><td>08-951-20</td><td></td></tr><tr><td>Sylgard dish</td><td>Microscopia Eletrônica Sciences</td><td>24236-10</td><td></td></tr><tr><td>Centrífuga</td><td>Eppendorf</td><td>5424R</td><td></td></tr><tr><td>Mounting Materials</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fluoromount</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>17984-25</td><td></td></tr><tr><td>Superfrost mais slides</td><td>Thermo Fisher Scientific, Inc.</td><td>1255015</td><td></td></tr> <tr><td>< reagentes > imunocoloração < / forte ></td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>soro de burro normal</td><td>Jackson ImmunoResearch, Inc.</td><td>017-000-121</td><td></td></tr><tr><td>Fragmentos FAB anti-rato&nbsp;</td><td>Jackson ImmunoResearch, Inc.</td><td>715-007-003</td><td></td></tr><tr><td>Laboratórios BlokHen</td><td>Aves, Inc.</td><td>BH-1001</td><td></td></tr><tr><td>Tuj1 (beta-III-tubulina) anticorpo monoclonal de camundongo</td><td>Biolegend, Inc.</td><td>MMS-435P</td><td></td></tr><tr><td>Sox2 anticorpo policlonal de cabra</td><td>R& D Sistemas, Inc.</td>Anticorpo policlonal <td>AF2018</td><td></td></tr><tr><td>Myo6 rabbit</td><td>Proteus Biosciences</td><td>25&ndash; 6791</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo policlonal de coelho Myo7A</td><td>Thermo Fisher Scientific, Inc.</td><td>PA1-936</td><td></td></tr><tr><td>Plexin-B1 anticorpo policlonal de cabra R</td><td>& D Sistemas, Inc.</td><td>AF3749</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpos secundários (fabricados em burro; Alexa-488, Cy3, Cy5)</td><td>Jackson ImmunoResearch, Inc.</td><td>ver catálogo</td><td></td></tr></tbody></table>

crioseccionamento e imunocoloração do tecido do ouvido interno de camundongos: dos estágios embrionário ao adulto

Cryosectioning and Immunostaining Mouse Inner Ear Tissue: From Embryonic to Adult Stages

Apresentamos exemplos de nosso próprio laboratório do ápice e giro basal de uma cóclea embrionária de camundongo dia 16.5 (E16.5) e o giro basal do dia 0 pós-natal (P0) e cóclea P30. Essas amostras foram seccionadas e imunomarcadas usando marcadores para células ciliadas (Myo7A e Myo6), neurônios ganglionares espirais (SGNs; Tuj1), glia e células de suporte (Sox2) e Plexin-B1, que rotula a membrana basal ao redor do ducto coclear e SGNs. As seções transversais da cóclea em diferentes estágios de desenvolvimento revelam d...

Crioseccionamento e imunocoloração do tecido do ouvido interno de camundongos: dos estágios embrionário ao adulto

This protocol details general histology methods for preparing inner ear samples from embryonic, neonatal, and adult mice. The purpose of this protocol is ...

cryosectioning-immunostaining-mouse-inner-ear-tissue-from-embryonic

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Biologia do Desenvolvimento

Um procedimento simples de vibratome seccionando o órgão de Corti, seguido por microscopia confocal e imuno-histoquímica é descrito. Este procedimento permite uma melhor preservação da citoarquitetura fino do órgão de Corti de mamíferos e, conseqüentemente, permite a quantificação precisa dos tipos de células.

Vibratome Seccionamento de Preservação melhorada da citoarquitetura do Órgão de Corti de mamíferos

Apresentamos um método que descreve o isolamento e a cultura de explantes cocleares da orelha interna embrionária de camundongos.  Também demonstramos um método para transferência de genes em explantes cocleares por meio de eletroporação de onda quadrada. A cultura de explantes in vitro, juntamente com a técnica de transferência de genes, permite que os pesquisadores estudem os efeitos da alteração da expressão gênica durante o desenvolvimento.

Cultura da embrionárias mouse cocleares explantes e Gene Transferência de Eletroporação

Nós apresentamos um método para isolar o órgão de Corti adulto como três voltas intactas cocleares (Apex, médio e base). Nós também demonstrar um procedimento para a imunocoloração com anticorpos marcados por fluorescência. Em conjunto estas técnicas permitem o estudo de células ciliadas, células de suporte, e outros tipos de células encontradas na cóclea.

Monte todo Dissecção e Imunofluorescência do mouse cóclea Adulto

Apresentamos um protocolo para isolar a bula auditiva, a cápsula e os ossículos de camundongos pós-natais para análise histológica e de montagem inteira.

Dissecção da Auditivo Bulla em ratos pós-natais: Isolamento dos ossos do ouvido médio e da análise histológica

Aqui, nós apresentamos um protocolo detalhado para detectar e quantificar níveis da proteína durante a morfogênese/patogénese craniofacial pela imunocoloração usando tecidos craniofacial do rato como exemplos. Além, nós descrevemos um método para a preparação e o criossecção de tecidos duros secçóes dos ratos novos para a imunocoloração.

Preparo tecidual e imunocoloração de tecidos craniofaciais do camundongo e osso não-descalcificado

Este manuscrito descreve um protocolo experimental para avaliar as características morfológicas e o estado funcional das sinapses da fita em camundongos normais. O modelo atual é igualmente apropriado para modelos synaptopathy-restringidos ruído-induzidos e idade-relacionados da coclear. Os resultados correlativos de estudos precedentes do rato são discutidos igualmente.

Avaliação morfológica e funcional de sinapses de fita em regiões de frequência específica da cóclea do rato

Este artigo apresenta um método de preparação da superfície coclear modificado que requer decaltificação e uso de um adesivo de células e tecidos para aderir aos pedaços de epélia coclear a 10 mm de cobertura redonda para imunohistoquímica em córquia de camundongo adulto.

Preparação da superfície coclear no mouse adulto

Este estudo descreve como dissecar o saco endolinfático do ouvido interno do camundongo em diferentes idades. O resultado de uma dissecção semelhante é mostrado em um modelo de camundongo Slc26a4-null de aumento do saco endolinfático. Um camundongo transgênico com um repórter fluorescente expresso no saco endolinfático é apresentado como um modelo para visualizar prontamente o saco endolinfático e uma ferramenta educacional.

Dissecção do saco endolinfático de camundongos

Apresentamos um protocolo para um modelo de perda auditiva induzida por ruído (PAIR) em camundongos. Para induzir a PAIR, desenvolvemos um dispositivo novo e simples usando plástico corrugado, uma gaiola armadilha para ratos e um alto-falante. O potencial evocado auditivo de tronco encefálico e a imagem de imunofluorescência foram empregados para avaliar a função auditiva e o dano às células ciliadas externas, respectivamente.

Condições experimentais modificadas para perda auditiva induzida por ruído em camundongos e avaliação da função auditiva e lesão das células ciliadas externas

A estria vascular é vital para a geração do potencial endococlear. Apresentamos aqui a dissecção da estria vascular de camundongos adultos para sequenciamento de núcleo único ou imunomarcação.

Dissecção da estria vascular de camundongos adultos para sequenciamento de núcleo único ou imunomarcação

Um protocolo para preparar criossecções de retina de camundongos e realizar imunocoloração em fotorreceptores é descrito. Este artigo permite que os pesquisadores produzam consistentemente seções congeladas de retina de camundongos com morfologia bem preservada e resultados de imunocoloração de alta qualidade.

Crioseccionamento e imunocoloração da retina de camundongos

Aprenda a preparar amostras de orelha interna de camundongos em diferentes estágios do desenvolvimento para imunocoloração. Este protocolo de crioseccionamento preserva estruturas cocleares e auxilia pesquisadores iniciantes em ciências auditivas.

Crioseccionamento e imunocoloração do tecido do ouvido interno de camundongos: dos estágios embrionário ao adulto

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